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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘力铭 钱爱霞 鄢庆枇 覃映雪
采用平板趋化和毛细管趋化的方法,研究了病原性哈维氏弧菌TS-628菌株的趋化性。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉、表皮黏液、肠黏液及血清的趋化性研究结果表明,该菌对青石斑鱼肌肉提取物的趋化性最强,且哈维氏弧菌的趋化运动明显受到温度、pH及盐度等环境因子的影响。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉18种主要氨基酸的趋化性研究表明,该菌对其中多种氨基酸均表现出很强的趋化性,但氨基酸浓度也会对该菌的趋化性造成影响,浓度过高趋化性反而减弱。
关键词：
趋化性 哈维氏弧菌 青石斑鱼
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
覃映雪 苏永全 陈雅芳 王军
采用复性电泳技术,研究环境pH、温度及培养时间对哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的影响。结果表明,胞外产物蛋白酶最适反应pH在8.5左右,酸对ECP蛋白酶活性的抑制明显强于碱对它的抑制作用;最适反应温度在20～50℃之间,20℃以下或50℃以上蛋白酶活性则受到明显抑制,表明蛋白酶不仅对高温敏感,对低温也很敏感;培养12h的胞外产物蛋白酶活性最强。最适温度和pH条件下,主要出现3种蛋白酶,其中分子量为94kDa和26kDa的两种蛋白显示了很强的蛋白酶活性,而且能在比较极端的温度和pH值条件下保持活性,而分子量为35kDa蛋白酶只在最适反应条件下出现,并且该蛋白酶的最适反应条...
关键词：
哈维氏弧菌 胞外产物 蛋白酶
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王保坤 余俊红 李筠 纪伟尚 徐怀恕
1999年 4～ 5月 ,山东省青岛市胶南海区网箱养鱼场花鲈 (Lateolabraxjaponicus)幼鱼发生暴发性传染病 ,死亡率达 5 0 %。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到 1株优势菌SF 1,经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF 3菌株的再感染试验结果表明 ,所分离的菌株为此次花鲈烂尾病的致病菌。经形态、生理生化等 64项特征指标鉴定 ,SF 1和SF 3均为哈维氏弧菌 (Vibrioharveyi)。药敏试验结果表明 ,头孢噻肟、头孢三嗪、头孢孟多、呋喃妥因、氯霉素、氧哌嗪青霉素、磺胺类、复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素E等 10种药物对该菌株有明显的抑制作用
关键词：
花鲈 哈维氏弧菌 药敏试验
[期刊] 水产学报
[作者]
徐芝亮 吴灶和 简纪常 黄郁葱
运用RAPD分型和BOX分型分子方法研究患病的海水鱼类体内和海水环境的101株哈维氏弧菌的分子遗传多样性。结果显示,从10个RAPD引物中发现只有PM2引物的分辨率和重复性较好,出现15条不同RAPD条带,在相似度65%下,101株哈维氏弧菌可以分为18种不同型;BOX分型出现20条不同的条带,在相似度为40%的情况下,可以把101株哈维式弧菌分15种不同的型;综合RAPD PM2和BOX分型,发现在相似度50%下,101株哈维氏弧菌可分18种型。综合RAPD和BOX分型数据可以很好地克服各自的缺点,得到更加准确的分型结果。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
毛芝娟 楼丹 吴雄飞 楠田理一 陈昌福
采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio harveyi 624、809和106等3个菌株,制备成福尔马林灭活菌苗,注射接种大黄鱼4周后,通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验,证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。
关键词：
哈维氏弧菌 血清型 抗原性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
于劼豪 黄郁葱 孙良娟 钟键 鲁义善 简纪常 蔡双虎
为加强对哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）早期快速诊断，本研究探究建立一种基于环介导等温扩增（LAMP）技术的可视化快速检测方法。基于环二聚体磷酸二酯VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性，将其作为靶基因设计引物并初步建立LAMP反应体系，对LAMP反应体系中各反应物浓度、内外引物比例、反应时间和反应温度进行优化，并对优化后的LAMP反应的特异性和灵敏度进行检测；分别在优化后的LAMP反应体系中加入SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子或羟基萘酚蓝作为指标剂对LAMP反应产物进行可视化判别，从而建立了一种针对哈维氏弧菌的LAMP可视化检测方法。研究表明该LAMP反应体系最佳反应温度60℃、反应时间60 min、Mg~(2+)浓度1.2 mmol·L~(-1)、dNTPs浓度0.64 mmol·L~(-1)、甜菜碱浓度0.25 mmol·L~(-1)及内外引物比例16:1；该反应体系能特异性检测到哈维氏弧菌，且灵敏度为3.4×10~(-6 )ng·μL~(-1)。可视化指标剂钙黄绿素-锰离子的添加比例为12:1或羟基萘酚蓝的添加浓度为390 μmol·L~(-1)时LAMP反应结果的可视化效果最好，临床应用表明该LAMP可视化技术能准确并特异性地检测到珍珠龙胆石斑鱼和凡纳滨对虾组织中感染的哈维氏弧菌。本研究提供了一种简单、快速和结果可视化的哈维氏弧菌LAMP检测方法，可以为水生动物哈维氏弧菌的现场检测和弧菌病的早期诊断提供技术支持。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
樊英 许拉 王晓璐 李乐 盖春蕾 于晓清 李天保 叶海斌
通过注射和浸浴2种方式,使体长约3.5 cm的凡纳滨对虾感染哈维氏弧菌,测定7 d内各组对虾死亡率;通过组织切片探究肠道组织结构变化,并对肠道内容物中弧菌数量进行监测.结果表明:高浓度(107CFU·m L~(-1))浸浴组的对虾死亡率最高,约68%;高浓度(107CFU·m L~(-1))注射组对虾死亡率约62%.被感染的对虾肠道中弧菌数量明显增多,浸浴组比注射组弧菌数量增加时间较早且幅度较大;随着时间延长对虾肠道中的弧菌数量发生回落,且趋于稳定.感染哈维氏弧菌后对虾肠道组织受到损伤,2种感染方式均呈现高浓度处理下短时间内受损加重,上皮细胞溃散,黏膜褶皱处发生不同程度的脱落,肌层发生损伤,且试验期间未能修复.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈超然 毛芝娟 吴建军 楠田理一 陈昌福
从鱼类致病菌中提取的脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)作为免疫原接种供试鱼,能诱导受免鱼产生较强的特异性与非特异性免疫应答[1-3],这是因为革兰氏阴性致病菌的LPS上存在菌体的有效抗原并具有佐剂性的缘故[4]。研究结果还证明了因致病菌的种类[1.2]、菌株培养时间[5]、菌株的血清
关键词：
哈维氏弧菌 脂多糖 化学成分
[期刊] 中国水产科学
[作者]
涂志刚 杨海朋 崔婧 严耿杰 李丹萍 周永灿 邱名毅
哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是引起海南省后水湾深水网箱养殖卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)"烂身病"的主要病原菌。为了能够快速诊断该病原菌,急需建立一种耗时短、准确以及便捷的检测方法。本研究利用分离到的致病菌株QT520的ToxR基因序列设计特异性引物和加入SYTO-9特异荧光染料,建立了一种可以实时、快速检测哈维氏弧菌的LAMP法(RT-LAMP)。该方法对哈维氏弧菌的基因组DNA及菌液灵敏度分别为100 fg/μL和10~3 cfu/mL,与Real-time PCR法检测灵敏度相当,比普通PCR的检测灵敏度要分别高1000倍和10倍,能有效区分哈维氏弧菌与坎氏弧菌(Vibrio campbellii);可以实时观察检测结果,且检测时间只需要40 min;具有耗时短、特异性和灵敏度高、仪器便携、操作简单且能实时观察检测结果等优点,非常适合在生产现场进行哈维氏弧菌的检测。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
沈桂明 李晨 史成银 贾丹 范超 谢国驷 付泉洁
本研究以引起珍珠龙胆石斑鱼[Epinephelus fuscoguttatus(♀)?Epinephelus lanceolatus(♂)]幼鱼"皮肤溃疡病"的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株为研究对象,采用平板膜覆盖技术和柱层析技术,分离、纯化了ML01株的胞外产物及分泌性蛋白。应用毒性试验、质谱分析与分子克隆技术,对纯化的胞外产物和3种主要的分泌性蛋白进行了特性分析与鉴定。结果显示,哈维氏弧菌ML01株的胞外产物(Extracellular products,ECPs)具有酯酶、明
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈献稿 吴淑勤 石存斌 李宁求
从患病斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)肝脏组织分离到EcGY0 2 0 4 0 1菌株 ,经人工感染、回归感染实验证实为致病菌。通过API系统和菌体常规形态特征、培养特性和生理生化反应指标测定以及 16SrRNA测序分析等综合鉴定 ,Ec GY0 2 0 4 0 1菌株为弧菌属哈维氏弧菌 (Vibrioharveyi) ,其半致死剂量LD50 为 2 .7× 10 6CFU/g鱼体重。药敏试验结果表明 ,EcGY0 2 0 4 0 1菌株对利福平、四环素、喹诺酮类及头孢曲松等抗生素较为敏感
关键词：
斜带石斑鱼 哈维氏弧菌 16SrRNA
[期刊] 水产学报
[作者]
莫照兰 俞勇 王祥红 李会荣 纪伟尚 徐怀恕
对气味黄杆菌（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａ ｏｒｄｏｒａｔｕｍ） ＱＪ２及其去细胞上清液（ＣＦＳ）对对虾病原性哈维氏弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｈａｒｖｅｙｉ）Ｚ３Ｇ２ Ｅ０２２的拮抗作用进行了研究。ＱＪ２的ＣＦＳ对病原菌表现显著的拮抗性能，在６ｈ内使数量为１０５－１０６ｃｆｕ·ｍＬ的病原菌（Ｚ３、Ｅ０２２均降为０。经热、酸碱、蛋白酶处理的ＣＦＳ，抑菌活性均有不同程度下降，结果为；经６０℃处理以６０ｍｉｎ的ＣＦＳ，经６ｈ使Ｚ３Ｇ２细菌数降为０，经１５ｍｉｎ使Ｅ０２２数量降为最低，为初始菌数的６３．０％：经１００℃处理１０ｍｉｎ，ＣＦＳ使Ｚ３Ｇ２和Ｅ０２２数量分别在１ｈ和１５ｍｉｎ降为最低，各为初始菌数的２...
关键词：
气味黄杆菌 病原性哈维氏弧菌 拮抗
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张永刚 栾林林 任海 葛慕湘 靳晓敏 叶仕根
为了解中草药对大菱鲆源哈维氏弧菌的体外抑菌效果,采用琼脂扩散法和二倍稀释法测定了哈维氏弧菌菌株对18种中草药的敏感性。结果显示:五倍子、石榴皮、大黄、乌梅和苏木的抑菌作用最强,最小抑菌浓度(MIC)
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄辉 毛芝娟 陈吉刚
根据已发表的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)外膜蛋白OmpU的基因序列设计1对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,自哈维氏弧菌致病菌株基因组中扩增获得一段约1 000 bp的序列,构建重组载体pMD18-T-OmpU;测序结果表明,该基因与已发表的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU序列存在98%以上的相似性,该序列在GenBank上的登录号为FJ919231。构建表达质粒pET-30a(+)-OmpU后转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3),在IPTG诱导下实现高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约为41 ku,与预期基本相符。重组蛋白以包涵体形式表达。以脲素法得到...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
彭英林 刘慧敏 鄢庆枇 王玮 许净 郑江
本研究采用核酸适配体的单链DNA浓度来表征其亲和力,通过测定核酸适配体与靶细菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)结合后ssDNA的浓度,来研究该核酸适配体的亲和特异性和亲和常数,并通过荧光显微镜法对其亲和特异性进行验证。结果显示,采用单链DNA浓度法测得该核酸适配体对靶细菌哈维氏弧菌的亲和力是非目标菌的15.2倍以上;荧光显微镜直接观察发现只有靶细菌能较好结合有荧光标记的核酸适配体,并呈现明显荧光;荧光阻断法发现靶细菌和非靶细菌都未呈现明显荧光,证明了该适配体有较好的亲和特异性,也进一步验证了单链DNA法的测定结果。在亲和常数的测定方面,利用单链DNA浓度法测得该核酸适配体的亲和常数K_d=(33.70±7.83) nmol/L,相应的拟合系数为R~2=0.960,有较好的准确性和可靠性,说明采用单链DNA浓度法来测定适配体的亲和力和亲和常数是可行的。
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