否定句具有与肯定句相对立的意义。否定句的表达作用是通过否定句与肯定句的相互作用来体现的。否定句具有句式预设、句义映衬、语义弱化、语用强化等作用。单用否定句，可以预设肯定句的意义。肯定句否定句合用，具有映衬辞格的强化功能。从语义层面看，否定句比肯定句弱；从语用层面看，否定句比肯定句强。句式预设与语义弱化侧重于语义理解，主要是语言法则；句子映衬与语用强化侧重于语用策略，主要是言语法则。

用户的信息需求具有主观性和认识性,存在着客观状态、认识状态和表达状态。用户信息需求的表达取决于用户的认知能力、表达能力、用户对服务系统的信任度和用户表达需求的途径、手段及环境。用户信息需求的表达和接收可以分解为三个要素:语用主体即用户和服务人员、语境和语用主体所使用的话语实体。

国家意识形态安全与中国话语国际表达具有内在的逻辑关系。目前,中国话语国际表达面临"西强我弱"的话语格局,存在"话语贫困"的现实问题,呈现"表达滞后"的客观境况。从维护国家意识形态安全的高度重视中国话语的国际表达,就要善于打造融通中外的普适性新话语,构建中国话语国际表达的主体合力,创新中国话语国际表达的传播形式。在增强中国话语国际表达的主动性、自觉性和实效性中维护国家意识形态安全。

【目的】研究牛Rybp基因时空表达图谱，为Rybp基因的功能研究奠定基础。【方法】利用实时定量PCR方法，检测Rybp基因在秦川牛16种组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸、皮下脂肪、心包脂肪、背最长肌、里脊、大肠、小肠、瘤胃、网胃、皱胃和瓣胃)、5个不同发育阶段(6,12,18,24和60月龄)肌肉、脂肪组织以及不同分化阶段（第0,2,4,6和8天）牛成肌细胞中的表达特性。【结果】Rybp基因在成年秦川牛睾丸组织中的表达量远远高于其他组织，是背最长肌的365倍，而在背最长肌、里脊、心脏等组织中的表达

为深入研究胡杨的抗盐分子机制,并获得与之相关的抗逆基因,采用SMART技术构建了胡杨盐胁迫处理cDNA文库。经随机测序,得到一个编号为SSL061的EST序列,与欧美杨的脱水素基因有较高相似性,通过PCR快速扩增文库的方法获得了胡杨脱水素基因(Pedhn)。分析表明,该cDNA的长度为813 bp,拥有681 bp的开放读码框,共编码227个氨基酸。该序列包括两个重复的富含赖氨酸的K片段和由7个连续的丝氨酸残基组成的S片段,但是缺乏Y片段。RT-PCR结果表明,胡杨在未受胁迫的情况下脱水素基因的转录水平较低,而随着盐胁迫浓度的升高,脱水素基因的转录水平总体呈上升趋势。

采用荧光定量PCR技术检测了Dmrt2基因的两个亚型Dmrt2a和Dmrt2b在金鱼(Carassius auratus)不同发育时期以及不同组织中的表达情况,用RACE技术克隆得到金鱼Dmrt2a cDNA序列的全长为1 755 bp,5'和3'非编码区长分别为188 bp和67 bp,推测的开放阅读框可编码499个氨基酸的多肽。分子系统进化分析表明金鱼Dmrt2a与其它鱼类Dmrt2a基因聚成一支,与斑马鱼(Daniorerio)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)、青鳉(Oryzias latipes)、罗非鱼(Oreochromis Niloticus)Dmrt2a的同源...

Wnt-4基因是Wnt基因家族重要的成员,在许多生物事件中都发挥着重要的作用。从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)卵巢转录组数据库中筛选到EsWnt-4的cDNA序列1027 bp。RT-PCR检测发现EsWnt-4在神经组织、心脏和性腺中有表达,说明在中华绒螯蟹中EsWnt-4可能与多种组织细胞的活动有关。荧光定量检测发现,受精卵中EsWnt-4 mRNA的含量较成熟卵细胞和2、4、8细胞胚胎时期高,推测EsWnt-4基因有可能在受精卵中已经开始表达,而在之后的2、4、8细胞时期其表达又受到抑制。此外,EsWnt-4在16细胞期表达量再次升高,说明该时期可能有相关的生物学事件需要EsWnt-4基因的参与。在幼体阶段EsWnt-4在第二溞状幼体及第五溞状幼体阶段表达最高,说明EsWnt-4可能与幼体体节生成及变态发育有关。

作为一种基础性的宪法权利,学生享有表达自由权。本文首先探讨了表达自由权的概念及其必要性。其次,本文认为学生的表达自由具有多种形式,主要包括言论自由、发型自由、着装自由、集会及结社自由。最后,本文强调指出,学校管理者应尊重并保护学生的表达自由,促进学生权利与学校管理权力的和谐发展。

白细胞介素17 (Interleukin-17, IL-17)在炎症和宿主防御中起重要作用。为了解鲤(Cyprinus carpio) IL-17N基因的功能，本实验使用同源搜索和基因克隆的方法在鲤基因组挖掘鉴定到两个IL-17N基因(CcIL-17Na和CcIL-17Nb)，均由TOP3B基因内含子2的互补序列编码。共线性比较显示，除了东方红鳍鲀(Takifugu rubripes)外，在其他已研究的鱼类中，与该基因相邻的均为SDF2L和PPM1F基因。两个CcIL-17Ns都有3个外显子，编码136个氨基酸，两者相似性高达为97.1%，CcIL-17Na、CcIL-17Nb和其他硬骨鱼类的IL-17N相似性分别为65.3%～97.1%、64.7%～96.3%，和鲤IL-17家族其他成员的相似性分别为32.9%～51.4%、31.4%～50.7%。鱼类IL-17家族系统树显示7个成员形成6支，其中IL-17A/F1和IL-17A/F3组成一支，其余6个成员单独成支，鲤IL-17N先与鲤科鱼类以94% 置信值聚在一起，然后与鲑鳟鱼类、鳉、东方红鳍鲀和尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)等以85%的置信值聚在一起，再与雀鳝(Lepisosteus oculatus)和腔棘鱼(Coelacanth)的IL-17N以95% 置信值聚为一支。实时定量PCR结果显示CcIL-17Ns在受精后0.5 h和12 h的表达量极显著高于受精后25 h、35 h、60 h、120 h及仔鱼阶段的表达量(P<0.01)；CcIL-17Ns在鲤夏花和成鱼脑中的表达量均最高，显著(P<0.05)或极显著(P0.05)。构建原核重组表达载体pMAL-c2X-17N，在大肠杆菌Transetta (DE3)中进行原核表达，使用镍柱纯化获得可溶的IL-17N重组蛋白(MBP-17N)。使用0.1 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL的MBP-17N孵育鲤肾组织8 h，结果显示，不同浓度的MBP-17N均使IL-1β和NF-κB显著上调(P<0.05)。本实验通过分析鲤IL-17Ns的系统发育、测定该基因的时空表达特征，发现嗜水气单胞菌感染后各组织CcIL-17Ns表达上调、原核表达蛋白能引起炎症因子的表达，从而证实了鲤IL-17N参与炎症反应。

类胰岛素生长因子（insulin-like growth factor, IGF）信号通路在机体的发育、繁殖以及生长等过程中起着重要的调控作用。类胰岛素生长因子酸不稳定亚基（IGF acid-labile subunit, IGFALS）是IGF系统中的重要一员，可通过延长IGF的半衰期参与IGF信号通路的调控。本研究首次在缢蛏转录组数据库中筛选鉴定了两个IGFALS基因，包含完整的开放阅读框，分别命名为IGFALSa和IGFALSb。IGFALSa基因的cDNA序列为4809bp，编码996个氨基酸；IGFALSb基因的cDNA序列为1925bp，编码546个氨基酸。在缢蛏不同发育期的表达分析中发现，IGFALSa和IGFALSb在幼虫的前期发育阶段均只有少量表达，而随着幼虫的发育，其表达量逐渐上升；组织表达分析表明，IGFALSa在外套膜和性腺中高表达，IGFALSb则在水管中高表达。利用不同浓度胰岛素短期刺激缢蛏稚贝，当浓度为10mg/L时，两个IGFALS基因表达量均显著上调，其下游基因IRS、PDK1、MPKP1的表达量也显著上调；进一步利用10mg/L胰岛素长期喂养缢蛏稚贝，结果显示其壳长和壳宽的日生长率均显著提升。

通过RT-PCR获得猪Ghlelin基因cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)质粒中构建真核表达质粒pcDNA-pGhl,并将该质粒注射到大鼠和新西兰兔后腿肌肉中,以研究pGhlelin真核表达质粒对动物生长和血液相关激素分泌的影响。大鼠试验表明:pcDNA-pGhl在注射初期的1个月内有增加大鼠体重及在整个试验期有降低料重比的趋势。在注射质粒后第6天,试验组个体增重提高10.6%,差异显著;饲料转化率提高10%,差异极显著。新西兰兔试验表明:试验组血液GH水平一直高于对照组,且在注射后2周高出35%,同时随着GH浓度的增加,血液中SS的浓度相应升高。注射重组质粒pcDNA-sGhl有增加...

在图书馆形象战略中 ,公益广告是图书馆自我传播的手段之一。公益广告可以影响读者对图书馆的信心 ,使图书馆获得较高记忆度 ,很高知名度 ,良好印象度和行为的支持度。为图书馆创造良好的社会效益和管理环境 ,促进整个社会精神文明建设。

为探究Smoothened（Smo）信号在精巢不同细胞增殖与存活中的作用，分离鉴定了尼罗罗非鱼smo（命名为Onsmo），检测了其在不同组织中的表达分布及在精巢中的细胞表达模式，在尼罗罗非鱼精巢组织的体外培养体系中，用Smo特异性激动剂SAG或抑制剂环巴胺分别进行处理，EdU掺入法及TUNEL法检测了处理后生殖细胞（Vasa~(+)）、Sertoli细胞（Amh~(+)）与Leydig细胞（Cyp17a1~(+)）增殖或凋亡情况。结果显示，Onsmo开放阅读框全长2 478 bp，编码825个氨基酸，含有7次跨膜结构域，与人SMO氨基酸一致性达77%；Onsmo表达于包括精巢在内的多个组织；在精巢中，Onsmo表达于多种不同类型细胞，包括精原细胞、精母细胞、Sertoli细胞以及Leydig细胞；在精巢组织的体外培养体系中，SAG处理对精原细胞增殖具有显著促进作用，而环巴胺处理对Sertoli细胞、Leydig细胞凋亡具有显著促进作用。从而表明，OnSmo信号在尼罗罗非鱼精巢精原细胞增殖与体细胞存活中具有重要作用。该研究首次证实了Smo信号在鱼类精巢不同细胞增殖与存活中的作用，为进一步研究其作用机制奠定了重要基础。

为观察血管紧张素转化酶(ACE)和血管紧张素转化酶2(ACE2)在自发性高血压大鼠肾脏中的表达及它们与高血压形成的关系,取14周雄性Wistar-京都种大鼠(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR)各8只,自由采食和饮水1周后测定大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率(HR),称重后断头处死,取血液和肾脏组织进行如下试验:放免法测定血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA表达水平的Real-time PCR分析,肾脏组织中ACE2蛋白表达的比较分析。试验结果表明:SHR大鼠SBP和DBP均显著高于WKY大鼠,而心率和体重无显著差异(P>0.05...

该研究利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)探讨茯苓抗食管癌的潜在作用靶点，为食管癌的临床诊治开创新思路.首先在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库中筛选出茯苓的有效活性成分及对应靶点，运用Cytoscape软件中鉴定候选药物作用靶点，接着在癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达谱差异(GEO)数据库中下载肿瘤相关基因表达数据集，通过WGCNA鉴定出与食管癌紧密相关的基因，并将鉴定出的基因与茯苓的候选药物作用靶点进行比对，确定茯苓抗食管癌的潜在作用靶点，最后采用RT-PCR的方法对筛选出核心基因在人食管癌细胞中的表达量进行检测.结果共获得34种茯苓有效活性成分，及17个对应靶点，主要候选药物作用靶点为：CHRM1、NCOA2、PGR、ADRA1B、ADH1B、PTGS2.其中ADH1B为茯苓抗食管癌的潜在作用靶点.筛选出DLGAP5、MCM2、CCNA2、CDK1、TPX2、TRIP13、KIF23、KIF2C、CENPF、CHAF1A等10个核心基因，其中CHAF1A和MCM2的表达水平对食管癌患者的预后具有影响.RT-PCR结果显示，CDK1、CHAF1A、TPIP13和MCM2基因经不同浓度的茯苓水煎液处理后，表达量与对照存在显著差异(p<0.05),表明CDK1、CHAF1ATPIP13和MCM2是茯苓水煎液治疗食管癌的主要作用靶点.