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[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋洋波 马捷 李丽 张留燕 刘延琳
近年,随着基因工程技术的日益发展,酿酒酵母在分子生物学研究方面的应用越来越广泛。本文介绍了后基因组学用于酿酒酵母的方法,并概述了利用该手段对试验菌株与商业酿酒酵母进行生理功能分析、研究和改造的最新进展,展示了后基因组时代对酿酒酵母的影响及综合基因组信息、生物信息学和分子生物学技术的研究策略。最后,展望了现代生物技术手段在葡萄酒工业中的应用前景。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘延琳 李华
【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行。【方法】克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA。进行转化子的营养缺...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王春晓 俞俊竹 周文亚 许引虎
葡萄皮上天然存在着非酿酒酵母属酵母（non-Saccharomyces），主要在葡萄酒浸渍和发酵初期发挥作用，近年来非酿酒酵母属酵母在葡萄酒发酵中的应用受到越来越多的关注。相对于酿酒酵母，非酿酒酵母属酵母在酒精发酵中具有较弱的发酵力，可将还原糖转化为乙醇及其他代谢副产物，是生产复杂风味和低酒度葡萄酒的潜在优良酵母。不同非酿酒酵母属酵母菌种在葡萄酒发酵应用中具有不同的代谢特征，选择具有一定特征的优良非酿酒酵母属酵母应用于发酵中，可以提高葡萄酒的特色化品质。本研究在总结商业化非酿酒酵母属酵母的种类、酿造特点和应用方式的基础上，重点综述了不同非酿酒酵母属酵母对葡萄酒颜色、香气、口感和安全健康4个方面的积极作用、代谢机理和研究热点：具有高产酸、多糖、胞外丙酮酸及低吸附性等特性的非酿酒酵母属酵母可通过不同代谢机理促进葡萄酒颜色的稳定；不同非酿酒酵母属酵母通过低产乙醇、乙醛、降低挥发性酚类，高产乙酸乙酯、乙酸酯类化合物、乙酯类化合物、高级醇、与萜烯或硫醇释放相关的酶类等途径促进葡萄酒果味香气的提升，增加香气复杂性；非酿酒酵母属酵母通过高产甘油、多糖和乳酸，降解苹果酸等方式调节葡萄酒的口感特征；非酿酒酵母属酵母作为生物防治剂可以降低葡萄酒酿造中二氧化硫的用量，通过代谢降解作用减少有毒化合物，提升葡萄酒的安全质量。本文进一步解析了非酿酒酵母属酵母的基因组和微卫星位点分析研究现状，探讨了目前非酿酒酵母属酵母葡萄酒发酵应用研究的主要接种策略，提出了未来研究仍需关注的热点方向，为非酿酒酵母属酵母在葡萄酒酒精发酵中的应用研究提供理论参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
胡澄溪 刘伟 毕燕会 周志刚
三酰甘油（TAG）合成缺陷型酿酒酵母突变株H1246常用于其他生物二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）的基因功能鉴定。为了解外源DGAT的基因表达对酵母细胞脂质及生长的影响，实验将缺刻缘绿藻1个I型和3个II型的DGAT分别转化H1246菌株，经筛选获得tDGAT1、tDGAT2A、tDGAT2B及tDGAT2C等4株转目的基因酵母。通过显微观察、分光光度法、重量法、棒状色谱分析、气相色谱-质谱分析对酿酒酵母的形态和脂滴、细胞密度、生物量、总脂、总脂肪酸以及TAG含量进行检测。稳定生长期时的显微观察结果显示，这4个外源基因均能使H1246菌株恢复TAG的合成和贮存能力进而在细胞中出现油滴；油脂分析结果表明，tDGAT1菌株的TAG及脂肪酸含量最高，且显著高于野生型Scy62及其他3株转目的基因菌株的水平；生长性能的数据显示，4个外源基因均能使H1246菌株的细胞密度达到Scy62的水平，这可能是由于TAG的合成消耗了游离脂肪酸，以减轻其对细胞产生的伤害而致；但tDGAT1菌株的生长迟滞期明显延长，以致其生长速率最低。本研究结果表明，将缺刻缘绿藻不同类型的外源DGAT转化酿酒酵母后，使后者的生长性能及脂质含量产生不同的变化。该结果为利用基因工程改造酵母菌株以生产人类所需要的目的油脂研究奠定了基础。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
郝淼闻 俞志敏
考察了半胱氨酸(CYS)添加量和添加时间对酿酒酵母(Saccharomy cerevisiae Y08)合成谷胱甘肽(GSH)的影响。结果表明:在发酵开始时添加半胱氨酸,能够增强菌体合成GSH能力,当添加量达到0.05%时,GSH产量达到最大值(52.28mg·L-1)。在发酵稳定期(10h)添加半胱氨酸,胞内GSH含量增加不显著,GSH产量仅提高了10.57%。为降低半胱氨酸对菌体生长的抑制,对酿酒酵母原生质体进行复合诱变,筛选半胱氨酸抗性突变菌株。结果表明:半胱氨酸对半胱氨酸抗性突变菌株的生长抑制作用减轻,抗性菌株能够在含有0.4%半胱氨酸的发酵液中正常生长,GSH产量和胞内GSH含量比未...
关键词：
半胱氨酸 酿酒酵母 谷胱甘肽 生物合成
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵育 李海兰 杜君 战吉宬
【目的】研究铜胁迫下,酿酒酵母胞内海藻糖的积累情况及海藻糖对酿酒酵母的保护作用,为探讨铜胁迫下酿酒酵母的防御保护机制提供理论依据。【方法】以改良模拟葡萄汁为发酵培养基,分别对菌株AWRI、BH8和Freddo进行直接铜胁迫处理(Cu2+浓度为1.00 mmol.L-1)、热激预处理(37oC,1 h)、再铜胁迫处理,同时,设定无铜培养为对照。测定各种处理下酿酒酵母的存活率、胞内海藻糖的积累和6-磷酸海藻糖合成酶(TPS1)酶活性的变化。【结果】与对照相比,1.00 mmol.L-1Cu2+胁迫处理使酵母细胞内海藻糖的含量增加,TPS1酶活性提高。热激预处理可诱导海藻糖的积累,且铜胁迫下细胞的存...
关键词：
铜胁迫 酿酒酵母 海藻糖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张梁 石贵阳 王正祥 章克昌
采用基因敲除技术,在工业酿酒酵母染色体DNA上的甘油代谢途径关键酶基因GD P 1中,整合入来源于里氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgⅡl,通过提高G 418浓度筛选得到多拷贝整合子。结果表明,整合子利用纤维二糖的能力得到提高,产甘油能力下降,外源基因表达稳定;引入外源基因后,其对酵母增殖能力没有大的影响,仅形态发生变化;在以微晶纤维素为原料,结合纤维素酶发酵时,与亲代工业酿酒酵母相比,发酵液乙醇浓度最高增加69%。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李华 游玲 刘晓晴 刘延琳
对酿酒酵母(S accharomy ces cerev isiae)与酒类酒球菌(O enos.oen i)的跨界融合子F-20-7进行抗生素筛选、降酸试验、生长试验等生产性能测试及相关基因鉴定研究。结果表明,氨苄青霉素对融合子的影响较小,融合子对L-苹果酸的降解率在54.06%~78.81%,在挑选出的融合子中仅有4株能够在YNB、模拟葡萄汁及天然葡萄汁中生长,其生长力较葡萄酒酵母差。PCR扩增结果显示,融合子质粒DNA中存在苹果酸-乳酸发酵的两个关键酶基因,即苹果酸-乳酸酶基因M leA和苹果酸-乳酸通透酶基因M leP,测序结果表明M leP基因与G enB ank中M leP基因序列的...
关键词：
酿酒酵母 酒类酒球菌 跨界融合子
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵秀 朱小龙 何亚文 梁永恒
[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响。[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性。[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,c...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘加爱 陈蕾 林元山 张小鹃 邹洪彬 张学文
为了以酿酒酵母S78为宿主菌异源高效表达糖化酶基因,进一步扩大糖化酶基因在工业生产上的应用。运用RT-PCR法从黑曲霉中克隆得到糖化酶基因(glaA)cDNA,去除其信号肽编码区后的序列重组到酵母表达载体pVT102U/αADH1强启动子下游,并与α因子分泌肽信号序列融合。用PEG/LiAc法将构建的重组表达载体转入酿酒酵母S78菌株,筛选出的转化菌点种到可溶性淀粉平板上培养,用碘染法鉴定重组基因的表达情况。鉴定出了典型水解圈的酵母转化子,转化子接种到YPD培养基中摇瓶培养后,取发酵上清液经SDS-PAG
关键词：
黑曲霉 糖化酶 酿酒酵母 异源表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈文婷 白描 谭君 唐婉莹 杨国顺
为探索本土野生酵母在刺葡萄酒酿造生产中的应用价值,改良刺葡萄酒品质,采用顶空固相微萃取(HS–SPME)和气相色谱-质谱联用(GC–MS)技术对1株商业酿酒酵母和6株野生酿酒酵母所酿刺葡萄酒的挥发性物质进行分析,并用统计建模软件RGui构建热图,分析各菌株对刺葡萄酒香气的影响。结果表明:刺葡萄酒中的挥发性物质主要为酯类物质,其次是醇类物质;LE28、LD22与商业酵母RC212处于同一分支,其刺葡萄酒呈香物质含量趋势一致;LD1015独成一支,其香气物质总含量显著高于其他菌株的,但含有闻起来令人不愉快的气
关键词：
刺葡萄酒 本土酵母 香气 挥发性物质
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘林丽 王跃进
应用基因重组技术,将从华东葡萄白河-35-1中分离出的长1179 bp芪合酶(stilbene synthase,STS)基因的cDNA片段克隆入大肠杆菌-酵母菌穿梭型诱导表达载体pYES6/CT上,构建重组酵母真核表达质粒pYES6/CT-STS,转化酿酒酵母菌株INVSc1,用Blasticidin(bsd)筛选出阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行5个时间段菌体全蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果发现,诱导4 h后开始有目标带(48 ku)出现,诱导16 h开始大量且稳定表达。证明目的基因片段可以在酿酒酵母中表达,为后续基因功能的验证奠定了基础。
关键词：
芪合酶 酵母表达载体 载体构建 诱导表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯光惠 余华顺 姚娟 陈明利 张执欣 郭蔼光
为了准确快速地为酵母生产提供优良菌株,采用核糖体DNA ITS-1(Internal transcribed spacer 1)序列分析法,对27株酵母菌(其中24株为酿酒酵母属中的酿酒酵母(S.cerevisiae),其他3株分别为汉逊酵母属中的多形酵母(H.polymorph)、克鲁维酵母属中的乳清酵母(K.marxianus)和红酵母属中的粘质酵母(R.mucilaginosa))进行了系统分类学研究,提取这27株酵母菌的基因组DNA并进行PCR扩增,采用琼脂糖和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,能将酵母菌株鉴定到属的水平;对PCR扩增序列进行克隆和测序,结果表明大多数酿酒酵母菌株之间的IT...
关键词：
ITS-1序列 酿酒酵母菌 系统发育分析
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘岩 邹珅珅 陈永 梁永恒
为了探讨蛋白质转运颗粒(TRAPP)复合体相关蛋白Tca17通过何种Rab蛋白参与囊泡运输和细胞自噬过程,用绿色荧光蛋白(GFP)标记野生型和TCA17敲除突变体中囊泡运输标志蛋白Snc1后,检测菌株生长和GFP-Snc1运输缺陷情况,并检测不同Rab蛋白对突变体的生长和GFP-Snc1运输缺陷的抑制情况。相应地,用GFP标记野生型和TCA17敲除突变体中细胞自噬标志蛋白Atg8后,检测菌株生长和在营养缺乏条件下GFP-Atg8的运输和降解缺陷情况,并检测不同Rab蛋白对突变体的生长和GFP-Atg8的运输及降解缺陷的抑制情况。结果表明:敲除TCA17导致菌株高温敏感,Snc1运输受阻以及At...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜君 李海兰 李慧 战吉宬 黄卫东
【目的】明确铜离子胁迫对模拟葡萄汁培养基和真实酿酒葡萄汁培养基中酵母发酵行为的影响及其差异性。【方法】以模拟葡萄汁和赤霞珠葡萄汁为发酵培养基,分别添加CuSO4以设置0.05mmol·L-1和0.50mmol·L-1两个不同的Cu2+浓度,研究铜胁迫对两种培养基中酿酒酵母生长和发酵过程的影响。【结果】铜胁迫能够降低两种培养基中酵母的存活率。0.05mmol·L-1Cu2+严重抑制了模拟葡萄汁的发酵过程,其产生CO2和酒精的量分别为对照组的26.47%和30.76%,残糖量显著增多。而0.05mmol·L-1Cu2+对赤霞珠葡萄汁发酵过程基本没有影响。0.50mmol·L-1Cu2+几乎完全抑制...
关键词：
铜 模拟葡萄汁 赤霞珠葡萄汁 发酵
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