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[期刊] 华北农学报
[作者]
李富强 张小丽 马小军 罗秀刚 岳燕 姜力飞 王恩丽 时帅峰
运用RT-PCR和PCR技术克隆基因,应用DNAStar对获得的cDNA及推测的氨基酸序列进行分析。从合作猪脾脏组织中克隆IFN-γcDNA ORF全长501 bp,共编码166个氨基酸,N端具有由23个氨基酸组成的信号肽,该蛋白预测的分子质量为19.418 5 kDa,等电点为9.54,合作猪IFN-γ核苷酸序列上共发现9个磷酸化位点,分别为Ser(7)、Thr(1)、Tyr(1);2个N-糖基化位点,分别在第39位和第106位Asn处。序列比较结果表明,合作猪IFN-γ基因序列与藏猪、印度猪种、内江猪、牛、狗的同源性较高,与人类和鸡的同源性较低。对于小分子蛋白质和多肽,有义突变和无义突变对...
关键词：
合作猪 IFN-γ 克隆 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
李文林 陈福伟 王伟杰 韩立强 王月影 李宏基 刘红亮 杨国宇
在猪的肠道组织中克隆Reg3基因,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化E.coliJM109,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明:克隆的猪Reg3基因与人、绵羊、马的同源性分别为83.7%,82.3%,82.2%;克隆了猪Reg3全长基因并注册GenBank注册号为Accession.FJ531494。
关键词：
猪 Reg3基因 克隆 序列分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周勇 范玉顶 黄莉莉 曾宪辉 张雪萍 张琳琳 曾令兵
【目的】开展青鱼γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究。【方法】采用ｃＤＮＡ末端快速扩增技术获得了青鱼（ＭｙｌｏｐｈＡｒｙＮｇｏＤｏＮ ｐＩｃｅｕｓ）ＩＦＮ－γ基因ｃＤＮＡ的５′和３′末端序列，然后根据其末端序列设计特异性引物，扩增得到青鱼ＩＦＮ－γ基因ｃＤＮＡ全长序列，对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析，同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析。通过构建真核表达载体，将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析。【结果】青鱼ＩＦＮ－γｃＤＮＡ全长为８９５ｂｐ，其开放阅读框大小为５４９ｂｐ，编码１８２个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果显示，青鱼ＩＦＮ－γ．．．
关键词：
青鱼 IFN-γ基因 结构特征 表达分析
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言
提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC ,并实现在大肠杆菌中的高效表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及 0 5mol·L-1盐酸胍复性液复性处理 ,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化。细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪IFN -γ具有较高的干扰素活性 ,约为 4 5× 1...
关键词：
猪γ干扰素 基因改造 原核表达 分离纯化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙建和 陆苹 蒋静
分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡 ,无菌取处理鸡的脾脏 ,匀浆后用Tr izol抽提细胞总RNA ,应用随机引物反转录获得cDNA ,设计引物 ,经PCR扩增获得鸡白介素 - 6 (ChIL - 6 )基因 ,应用pGEM -T载体克隆该基因 ,经测序 ,表明其与GeneBank中公布的唯一的一个ChIL - 6基因为同源基因。
关键词：
鸡 ChIL-6基因 基因克隆
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王长康 李昂 仲妍妍 王寿昆 王宏 王光瑛
为探明番鸭的遗传分化,以番鸭脑垂体的总RNA为模板,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增了含有催乳素(PRL)基因的DNA片段,将其克隆到pMD18-T载体上并进行了序列分析.结果表明,番鸭PRL基因由765 bp组成,编码229个氨基酸;与已报道的北京鸭、马岗鹅、皖西白鹅、莱茵鹅、家鸡、火鸡、鹌鹑等禽类PRL基因相比,PRL基因的核苷酸和氨基酸序列同源性为91.0%-99.0%和98.3%-99.1%.说明PRL基因在进化过程中相当保守.番鸭PRL基因氨基酸序列与北京鸭比较两者并没有太大差别,仅在第9(K/E)、176(V/I)、194位(K/I)各有一个突变,可以推测这两者之间...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张跃 白俊杰 李英华 叶星 简清 李新辉 罗建仁
采用逆转录—聚合酶链式反应 (RT -PCR)方法 ,从牙鲆 (Paralichthysolivaceus)肝脏总RNA中扩增出干扰素调节因子 (fIRF)的核心区序列。定向插入质粒 pUC18,克隆的牙鲆IRFcDNA序列分析表明 ,与Yabu报道的牙鲆IRFcDNA相比有 1个碱基差异 ,但与推断的氨基酸序列完全一致。将牙鲆IRF的核心区序列cDNA定向插入原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成牙鲆IRF表达载体pBVfIRF2 2。SDS -PAGE分析表明 ,经 4 2℃诱导 ,含 pBVfIRF2 2质粒的大肠杆菌可表达一分子量约 12 0 0 0的特异蛋白。
关键词：
牙鲆 干扰素调节因子 分子克隆 原核表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈美玲 陈焕春 宋云峰 黄红亮
参照Genbank上公开发表的PCV1 全基因序列设计引物,以质粒pSK PCV为模板扩增出PCV1 ORF2基因,插入pMD18 T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1 基因序列相比较,同源性达97%,再与Genbank 上发表的PCV2 的ORF2 基因序列相比较发现PCV1 ORF2 和PCV2 ORF2的差异表现在两者在核苷酸序列的2个部位互相存在基因缺失现象。将推导出的PCV1 ORF2 的氨基酸序列同PCV2 ORF2进行比较,发现二者在几个功能区相当保守,尤其是N 末端的核定位序列、N 糖基化位点以及酪氨酸磷酸化位点。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨龙 张冬杰 汪晓鸿 王文涛 刘琪 刘娣
在猪的RBP4基因的第1外显子和第3外显子处设计引物,成功扩增了该基因的第1内含子和第2内含子,与人和鼠的同源性分别为80%和78%,说明扩增正确。采用PCR-RFLP法对大白猪、杜洛克、长白猪、民猪和杂种猪的RBP4基因进行多态性检测。结果表明:该基因经限制性内切酶MspⅠ酶切后获得3种带型:AA,BB和AB型;除大白猪与民猪、长白猪与杂种猪外,其余各猪种间RBP4基因的基因型频率分布均差异极显著(P<0.01);该基因在长白、大白和杂种猪的MspⅠ位点处于群体不平衡状态,在杜洛克和民猪处于群体平衡状态;基因多态信息含量(PIC)计算,大白、长白、杜洛克、民猪和杂种猪均表现为中度多态性(0....
关键词：
猪 RBP4基因 克隆 PCR-RFLP
[期刊] 华北农学报
[作者]
祝俊鹏 杨彬 兰喜 柳纪省 马小军
为了深入研究嵴病毒(sw Ko V)主要结构蛋白基因VP1,根据Gen Bank中已发表的猪嵴病基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增猪嵴病毒CH441株VP1基因,并对其进行克隆与测序分析。结果表明,sw Ko V CH441株的VP1基因为762 bp,与Gen Bank已发表的嵴病毒属的15株嵴病毒序列的VP1基因相比较,sw Ko V CH441株的VP1基因与其他各毒株VP1基因的核苷酸同源性为81.5%~90.2%,氨基酸同源性为86.6%~96.9%,进化分析显示,sw Ko V CH441株与GS-1株之间的亲缘关系较近。生物信息学分析显示,VP1蛋白理论等电点(p ...
关键词：
VP1基因 克隆 DNA测序 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯海燕 莫斯科 房永祥 景志忠
旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体(Tcell receptor,TCR)α链(AB087988)为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因(pTCR-α)。结果表明:克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列(AB087988)的同源性为94.6%,与其...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孟丽平 赵德明 王金秀 宁章勇 马李颖
根据已发表的猪朊蛋白基因(PRNP)序列设计特异性引物,进行PCR直接扩增,得到了中国实验小型猪(CEMP)的朊蛋白基因(PRNP),将其克隆到pGEM-T Easy载体中。序列分析表明上述CEMP的PRNP基因ORF区全长为774 bp,编码257个氨基酸的前体蛋白,分子质量约为28.3 ku,其PRNP序列与已发表的猪PRNP序列(L07623)差异微小,仅在第4位氨基酸残基处有变异(Ser→Asn);绘制CEMP与其他15种属动物朊蛋白的氨基酸序列进化树发现,CEMP与多种哺乳动物朊蛋白的氨基酸序列遗传距离比较接近,与水貂最近,而与禽类朊蛋白氨基酸的遗传距离较远。
关键词：
中国实验小型猪 朊蛋白 克隆 序列分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许瑞胜 何奇松 李春英 冯淑萍 易春华 韦达有 胡丽萍 黄胜斌 胡巧云 熊毅 马琳
【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢立兰 安康 陈力 孙紫德 方六荣
DEAD-box解旋酶21(DEx D-box helicase 21,DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一,不仅参与RNA的合成和加工过程,同时还参与机体的天然免疫应答,调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能,以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模板,根据GenBank公布的预测序列(XM_005657387.2)设计引物扩增猪源DDX21基因,并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列(Ge
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
魏麟 陈斌 张善文 宋伸 刘鹏
从猪血液总RNA中克隆出BPI基因,对该基因的cDNA进行序列分析。结果表明:克隆到的序列全长1 874 bp(基因登录号为FJ810853),其中1 452 bp的开放阅读框编码483个氨基酸残基,含13.25%的亮氨酸,有一段27个氨基酸的信号肽序列。同源性分析结果显示:猪BPI与人、牛、兔、狗、大鼠、小鼠、鲤鱼、非洲爪蟾、大西洋鲑和大黄鱼BPI分子氨基酸序列的同源性分别为64%、74%、59%、67%、53%、51%、35%、44%、28%和27%。该蛋白氨基端部分和羧基端部分为2个明显不同的功能区,各存在1个超活性结构域,中间为胰蛋白酶水解位点,表现出类似人BPI结构的特征。
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