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[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 何孔旺 俞正玉 茅爱华
为了明确O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖。选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量。结果表明:O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌;第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌。直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天。口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O1...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 何孔旺 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 倪艳秀 周俊明 李彬 王小敏 郭容利 俞正玉 茅爱华 吕立新
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李丽 张雪寒 何孔旺 姜平 赵攀登 叶青 栾晓婷 温立斌 倪艳秀 周俊明 吕立新 郭容利 俞正玉 茅爱华 李彬 王小敏
建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rf...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 何孔旺 卢维彩 赵攀登 温立斌 李彬 郭容利 王小敏 倪艳秀 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新
为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈雅君 胡慧 段志刚 崔保安 张龙现 孟振北 彭新然 陈丽颖 王亚宾
为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中。结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因(247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡慧 段志刚 崔保安 张龙现 陈雅君 陈丽颖 张红英 彭新然 孟振北 王亚宾
【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌O157∶H7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临床应用效果进行了初步验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠埃希菌O157∶H7rfbE、fliC和hylA基因的多重PCR方法,该方法特异性较好,灵敏度较高,可达2.0×102CFU/mL。【结论】初步建立了检测动物源大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,该方法可用...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张雪寒 张碧成 栾晓婷 汪伟 周俊明 何孔旺
肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是重要的食源性病原菌,导致严重的人兽共患病。本文旨在建立以Z0372基因为靶基因的PCR检测技术,特异性检测EHEC O157:H7。以Z0372基因为靶序列,设计引物,建立Z0372-PCR,分析敏感性、特异性,并检测模拟阳性污染样品。结果表明,Z0372-PCR对纯培养物检测限103~104CFU/m L,模拟阳性污水样和肉样,增菌后检测限10~102CFU/m L(g)。非大肠杆菌O157和其他肠道病原全部为阴性扩增,只有肠出血性大肠杆菌O157:H7扩增出清晰而特异的条带。模拟阳性样品检测,条...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨文仪 肖家伟 雷连成 张付贤
为查明南京市某赛鸽公棚赛鸽出现腹泻、死亡的致病病原，本研究对采集的病料进行病原分离鉴定，分析致病菌的血清型、生物被膜表型、毒力基因、耐药菌谱，并对分离菌株进行了人工感染试验。研究表明：1)从患病鸽组织、拭子和粪便中分离出的细菌初步诊断为大肠杆菌O157;分离菌株在NA平板上长出白色、光滑的圆形菌落，在CT-SMAC平板上长出紫红色菌落。2)分离菌株的16S rRNA基因序列与大肠杆菌的相似性达98%～99%,命名为E.c.86246。3)血清学试验表明分离菌株为大肠杆菌O157:非H7菌株，动力试验进一步证实其为动力株。4)分离菌株携带tccp1014、eaeA和hly毒力基因，可导致雏鸡胃肠道出现不同程度的功能损伤，甚至导致死亡；其半数致死量为2.0×10~5 CFU/mL,具有较强的致病性。5)分离菌株携带tetA、tetM、sul2、aadA1和bla_(TEM) 5种耐药基因，具有较弱的生物被膜形成能力，对四环素、氨基糖苷类等抗菌药物严重耐药，对阿莫西林、氧氟沙星和诺氟沙星敏感。综上，本研究分离的鸽源大肠杆菌O157:非H7菌株，具有动力性，有较强的致病性和一定的耐药性，为大肠杆菌O157的流行病学调查、致病机理分析和抗菌药物的精准施治提供理论依据和数据参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张雪寒 何孔旺 茅爱华 周俊明 俞正玉 温立斌 倪艳秀 郭容利 吕立新
【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后B...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
夏炉明 孙建和 严亚贤
【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑,并采用PCR方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导前以及诱导8、12、16h这4个阶段滤液中Stx毒素的表达量,毒素表达量采用WST-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量也显著增加,且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加,但增加的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
薛海燕 李红心 宋宏新
以灭活大肠杆菌(E.coli)O157为抗原免疫产蛋鸡获得抗E.coliO157卵黄抗体(IgY),建立了该抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。并研究了包被温度和时间及不同卵黄前处理方法对ELISA检测的影响,所获得的最佳检测条件为:以浓度为108~109/mL的灭活E.coliO157为抗原进行包被,4℃包被19h,水稀释法对卵黄进行前处理,然后检测其中的IgY效价。该方法简便可靠,适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和批量检测。
关键词：
大肠杆菌O 卵黄抗体 酶联免疫吸附试验
[期刊] 林业科学
[作者]
田国忠 李永 梁文星 朴春根 黄钦才 郭民伟
用保存的不同泡桐无性系染病和健康组培苗为试材,对染病苗、机械损伤、嫁接接种和健康组培苗组织中H2O2及过氧化物酶的变化进行研究。用DAB组织染色方法对H2O2组织定位结果显示,在未损伤情况下多数染病泡桐苗和健康苗H2O2积累皆较少。机械损伤后,病与健苗皆出现H2O2过量积累,其中健苗强于病苗。在维管束部位,重症苗POD活性最强,轻症苗次之,无症和健康苗活性较低;而且所有苗在脉间叶肉组织POD活性都明显低于叶脉组织。用病接穗嫁接健康泡桐砧木的早期(3天以内)似乎与损伤反应类似(包括POD和H2O2产生);6天后损伤反应减弱。嫁接接种成功的组合至20天,在嫁接接口处仍维持高的H2O2释放和强POD...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马保华 杨亚提 田秀娥 王志东 于志峰 黄建锋 张红 李键 陈玉林 王永军
为了分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律,春季在甘肃天水用本地山羊、秋季在四川成都用关中奶山羊各108只进行体内试验。试验羊在同一天阴道放置羊用NRID,以放置NRID当天为0 d,从放置NRID的次日(1 d)起,每天分别随机取出6只羊的NRID,直到18 d全部回收结束。在实验室用丙酮溶解,并用紫外线分光光度仪测定每枚NRID内炔诺酮剩余量,计算每枚NRID内炔诺酮释放量,模拟分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律。结果表明,在春季和秋季,山羊体内放置的NRID中,炔诺酮的总释放规律是前期释放速度较快,之后释放速度逐渐降低,并呈现缓慢持续释放的特点。由此可以估测山羊阴道内每天...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
翟新贵 张有亮 赵彪 马丙婷 孙睿 李引乾
【目的】研究磺胺噻唑在山羊体内的药物动力学过程,为该药在兽医临床的合理应用提供依据。【方法】用磺胺噻唑对照品配制标准溶液,建立磺胺噻唑的紫外测定方法。给6只山羊分别静脉注射剂量为70mg/kg的磺胺噻唑钠,于注射前和注射后5,10,15,30,45,60,120,180,240和300min分别颈静脉采血,测定血药质量浓度,用残数法拟合药-时曲线,计算其药物动力学参数。【结果】磺胺噻唑在山羊体内的药物动力学符合二室模型。药物动力参数消除相初始质量浓度B为(198.37±64.63)mg/L,分布相半衰期t1/2α为(0.05±0.04)h,消除相半衰期t1/2β为(0.89±0.21)h,表观...
关键词：
磺胺噻唑 山羊 药物动力学
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘湘新 何湘蓉 孙志良 谭超 许建平
为了探明吡喹酮脂质体在山羊体内的代谢动力学 ,给山羊 1次静脉推注吡喹酮脂质体 3 m g/kg,取 2 4h内不同间隔时间的血样测血药质量浓度 .结果表明 ,血药质量浓度 -时间曲线符合无吸收因素的一室开放模型 ,其药物代谢动力学参数 :消除半衰期为 (10 .0 0± 0 .5 9) h;消除速率常数β为 (0 .0 6 9± 0 .0 0 4) h- 1 ;初始质量浓度为(18.81± 0 .46 ) μg/10 0 m L;维持有效质量浓度时间为 (2 0 .0 1± 1.18) h;表观分布容积为 (2 .91± 0 .42 ) 10 0 m L/kg;清除率为 (1.93± 0 ....
关键词：
吡喹酮脂质体 药物代谢动力学 山羊
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