[目的]本研究为初步明确黑龙江省大豆田反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）种群对氟磺胺草醚的抗药性水平，并研究其产生抗性及多抗性的分子机制。[方法] 利用琼脂法快速测定了采自黑龙江省嫩江县的3个反枝苋种群对氟磺胺草醚的抗性水平。通过盆栽法筛选出抗氟磺胺草醚/噻吩磺隆的反枝苋植株，并进行PPO和ALS的靶标基因测序。[结果]相比于敏感种群，黑龙江省3个种群对氟磺胺草醚的相对抗性倍数（resistance index，RI）分别为83.6、83.8、93.4；位于反枝苋PPO2高度保守区域编码128位氨基酸的核苷酸由AGG突变为GGG，导致精氨酸被替换为甘氨酸（Arg-128-Gly）。三个抗氟磺胺草醚的反枝苋种群均对ALS抑制剂类除草剂产生多抗性。对als基因测序后发现，与敏感种群相比，各抗性种群10个单株的ALS保守区域均发生了多个不同位点（Ala-205-Val、Asp-376-Glu、Trp-574-Leu和Ser-653-Thr）及组合的氨基酸取代方式，各种群突变位点和杂合度多样。[结论]本研究表明：PPO2的Arg-128-Gly氨基酸取代可能是黑龙江三个反枝苋种群对氟磺胺草醚产生抗性的主要原因，三个种群同时对ALS抑制剂类除草剂存在靶标位点突变导致的多抗性。

【目的】稗草（Echinochloa crus-galli）是我国水稻田主要恶性杂草之一，五氟磺草胺等乙酰乳酸合成酶（acetolactate synthase,ALS）抑制剂类除草剂是防治稻田稗草的主要除草剂种类。本研究团队前期在安徽省天长市水稻主产区发现疑似五氟磺草胺抗性稗草种群AHTC-01，明确其对稻田不同种类除草剂的抗性水平及可能的抗性分子机制，为抗性稗草有效防治、延缓其抗药性进一步发展提供理论依据。【方法】采用温室盆栽法在整株水平上测定稗草种群AHTC-01对五氟磺草胺的抗性水平及对不同除草剂的抗性模式，并通过靶标基因测序和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析探索其靶标抗性分子机制。【结果】相比敏感稗草种群AHFY-01，疑似抗性稗草种群AHTC-01已对五氟磺草胺产生高水平抗性，抗性倍数（resistance index,RI）为620。靶标抗性机制分析表明，AHTC-01种群ALS基因拷贝2(ALS2)第574位氨基酸由色氨酸（Trp）突变为亮氨酸（Leu），其种群突变频率为100%；在五氟磺草胺处理后12 h，抗性稗草种群AHTC-01 ALS相对表达量为敏感稗草种群AHFY-01的2.26倍。AHTC-01同时对其他3种ALS抑制剂类除草剂双草醚、嘧啶肟草醚、甲氧咪草烟产生不同水平交互抗性，抗性倍数分别为8.24、13.36、20.36；但是对乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase, ACCase）抑制剂氰氟草酯、精噁唑禾草灵和烯草酮，4-羟基苯基丙酮酸双氧化酶（4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase,HPPD）抑制剂三唑磺草酮，合成生长素类（synthetic auxin mimic）氯氟吡啶酯等其他作用机制除草剂依旧较为敏感。【结论】稗草种群AHTC-01靶标基因ALS2第574位氨基酸突变和ALS过量表达是其对五氟磺草胺产生抗性的主要原因之一，该抗性机制同时赋予其对不同ALS抑制剂的交互抗性。农田生产实际中，可轮换使用其他作用机制除草剂对其进行有效防治。

为了减轻氟磺胺草醚对土壤的污染问题,利用富集培养技术从山东某农药厂活性污泥中筛选到1株具有高效降解氟磺胺草醚能力的细菌,命名为BX3。通过菌落形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析,初步鉴定菌株BX3为微嗜酸寡氧单胞菌。同时对菌株BX3的生长特性及降解特性进行了初步研究。结果表明,该菌株降解氟磺胺草醚的最适条件为:氟磺胺草醚质量浓度为100 mg/L,培养温度为30℃,pH值6～7。在最适条件下,菌株BX3具有较强的降解氟磺胺草醚的能力,培养5 d后对氟磺胺草醚的降解率达到80%以上。可为氟磺胺草醚污染土壤的生物修复提供适宜的菌种资源。

通过室内抗性品系筛选、现实遗传力分析、离体酶活力测定,对灰飞虱对氟虫腈抗性及其机制进行了研究。结果发现:灰飞虱对氟虫腈的抗性发展较慢,利用田间低抗种群(RR6.9倍)进行室内筛选,24代后抗性仅增加到21.2倍,其抗性现实遗传力较小,仅为0.041。利用室内筛选的氟虫腈抗性和敏感性品系进行解毒酶活力的对比研究发现:抗性灰飞虱体内的酯酶和谷胱甘肽转移酶活力与敏感品系没有显著差异,但P450单加氧酶活力是敏感品系的1.58倍。增效试验表明:在敏感品系中3种增效剂对氟虫腈均没有明显增效,但在抗性品系中,PBO对氟虫腈的增效比达到13.68,TPP和DEM的增效比仅分别为1.39和1.35。表明:灰飞...

土壤盐渍化是目前影响农作物产量和质量的主要环境因子之一。植物对盐胁迫的适应非常复杂，提高作物的耐盐性仍然面临着极大的挑战。本文对SOS信号（salt overly sensitive）转导途径、microRNA和转录因子在盐胁迫中的调控作用进行了综述，旨在为后期抗盐性研究与耐盐育种提供基础支持。

土壤盐渍化是目前影响农作物产量和质量的主要环境因子之一。植物对盐胁迫的适应非常复杂,提高作物的耐盐性仍然面临着极大的挑战。本文对SOS信号(salt overly sensitive)转导途径、microRNA和转录因子在盐胁迫中的调控作用进行了综述,旨在为后期抗盐性研究与耐盐育种提供基础支持。

为了探讨乙氧氟草醚、乙草胺和盖草能在森林苗圃中的应用效果,进行马尾松Pinusmassoniana、火力楠Micheliamacclurei和乳源木莲Manglietiayuyuanensis苗圃化学除草正交试验。试验结果表明,乙氧氟草醚和乙草胺在苗圃播种后芽前期使用和苗期使用乙氧氟草醚、乙草胺和盖草能除草率达90%以上,持效期45～63d,同时对种子发芽出苗和苗木生长安全。采用20%乙氧氟草醚、90%乙草胺和10 8%盖草能,使用剂量为0 105mL·m-2进行化学除草,比人工除草减少除草用工59 1%～66 7%,降低除草成本46 8%～62 9%。表3参4

[目的]利用敏感性基线、交互抗性、生物适合度等评价新药的抗药性风险水平。本研究评价了灰霉病菌对氟吡菌酰胺的抗药性风险水平,这对科学使用氟吡菌酰胺和可持续防治灰霉病具有重要意义。[方法]采用菌丝生长速率法,测定了100株江苏省草莓灰霉病菌对氟吡菌酰胺的毒力曲线,建立了敏感性基线,并通过交互抗性及相关生物学测定,评价了其潜在的抗性风险。[结果]建立的敏感性基线是一个单峰曲线,接近正态分布,平均EC50为(1.94±1.55)μg·m L-1;氟吡菌酰胺与其同类的啶酰菌胺及其他类型杀菌剂之间不存在交互抗性;氟吡菌酰胺抗性菌株的生物适合度显著低于敏感菌株。[结论]灰霉病菌对氟吡菌酰胺的抗性风险属于低至...

为探讨烟草品种对青枯病的抗病性及抗性机制 ,为烟草的抗病育种提供抗源和鉴定方法 ,室内鉴定了 5 4个烟草品种对青枯病的抗性 ,发现不同品种间抗性有明显差异 ,抗病品种有 T144 8A,贵烟 ,CV 91,大晒烟 ,香烟 ,K32 6等 6个 ,中抗品种有大幅 ,D10 1,G2 8,安流晒烟 ,子州羊角大烟 ,G2 8× MD6 0 9,小样无烟 ,清间羊角大烟 ,N 32 6等 9个 ,其余均为感病品种 ,没有免疫品种 .选择 10个对烟青枯病抗、感性不同的品种进行了生化反应与抗性关系的研究 .结果表明 ,人工接种后 ,抗性品种的木质素、可溶性总糖、酚类物质含量、可溶性总糖 /淀粉及超氧...

采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中 ,获得转基因群体 ,通过 PCR及 Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测 ,以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组 .结果表明 ,外源人α-干扰素抗病基因已整合入草鱼基因组中 .采用腹腔注射法 ,对转基因鱼进行草鱼出血病病毒接种攻毒试验 ,结果显示转基因草鱼比对照组的抗病毒能力有显著提高

为探讨牛筋草ＥｌＥｕｓｉｎＥ ｉｎｄｉｃａ（ｌ．）ＧａＥｒｔｎ对百草秸的抗性水平，测定了百草枯对抗性和敏感生物型牛筋草的抗性水平、叶绿素荧光参数和抗性基因的扩增。结果表明，百草枯对抗性和敏感生物型牛筋草地上部鲜重抑制中浓度（Ｅｄ＿（５０））分别为０．１０２９和６．１１２０ ｋＧ／ｈｍ～２，抗性和敏本生物型Ｅｄ＿（５０）的比值为５９．４８；经１ ｋＧ／ｈｍ～２百草枯处理牛筋草３ ｈ后，抗性生物型叶绿素荧光参数逐渐恢复，敏感生物型逐渐降低，而０．１μｍｏｌ／ｌ硝酸盏＋１ ｋＧ／ｈｍ～２百草枯处理的抗性生物型未出现恢复现象。推测转运体参与了百草枯在抗性生物型牛筋草体内的转运。经特异性引物，抗性生物型．．．

通过PCR扩增,从pCAMBIA1300-bar质粒中获得bar基因编码区全长,经酶切鉴定和测序后证实,bar基因分离成功。用BamH和Hind酶切,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组质粒pET28bar。将重组质粒pET28 bar转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)后,获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白质分子量约为27 ku。将包涵体离心、洗涤和纯化后,得到高纯度的目的蛋白。该蛋白可以替代植物外源蛋白进行转bar基因产品的食用安全性检测,也可用于转bar基因产品ELISA检测的抗体制备。

【背景】灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是危害番茄（Solanum lycopersicum）的重要病害之一，防治不及时可造成30%—40%减产。目前生产上多以化学防治为主，但存在农产品安全及环境污染的风险。N-酰基乙醇胺（NAE）是植物体内天然存在的一类脂质生物活性化合物，其在哺乳动物中具有多种免疫功能，但其在植物免疫中的作用和机制尚不清楚。【目的】探讨N-酰基乙醇胺在诱导番茄对灰葡萄孢防御中的作用，为研发番茄灰霉病绿色防控技术提供依据。【方法】将灰葡萄孢分别接种在含有硬脂酰乙醇胺（NAE 18:0）、亚油酸乙醇胺（NAE 18:2）、廿二碳五烯酸乙醇胺（NAE 22:5）的培养基上，观察灰葡萄孢的生长情况。在此基础上，以番茄‘Moneymaker’植株为材料，硬脂酰乙醇胺、亚油酸乙醇胺、廿二碳五烯酸乙醇胺外源处理番茄叶片后接种灰葡萄孢，统计病情指数，测定荧光参数。采用qRT-PCR技术明确亚油酸乙酰胺处理后番茄叶片灰葡萄孢Actin的相对表达量，进一步测定番茄叶片中主要抗病基因PI I、PR-1、NPR1、Nr、ACO1、PYR1a等的相对表达量及茉莉酸（jasmonic acid,JA）、水杨酸（salicylic acid,SA）、乙烯（ethylene,ETH）、脱落酸（abscisic acid,ABA）、生长素（indoleacetic acid,IAA）含量。并以乙烯信号转导突变体植株never ripe(nr)及对照植株Pearson(PB)为材料，在外源亚油酸乙酰胺处理后接种灰葡萄孢，测定番茄叶片叶绿素荧光参数和灰葡萄孢Actin的相对表达量。【结果】体外培养试验结果表明灰葡萄孢生长并不受外源N-酰基乙醇胺的影响，外源施用N-酰基乙醇胺能显著提高番茄植株对灰霉病的抗性，缓解由灰葡萄孢侵染导致的番茄叶片光系统II实际光化学效率（ΦPSII）的下降。3种N-酰基乙醇胺中，亚油酸乙醇胺施用后番茄叶片灰霉病病情指数下降最为明显，灰葡萄孢Actin的相对表达量下调60%，其诱导灰霉病抗性效果最佳。番茄植株接种灰葡萄孢后抗性基因PI I、PR-1、NPR1、Nr、ACO1的表达水平均有不同程度上调。外源亚油酸乙醇胺处理使得番茄响应灰葡萄孢接种后PI I、Nr、ACO1的表达进一步增强，其中乙烯合成基因ACO1的表达水平最高。番茄植株接种灰葡萄孢后叶片水杨酸、茉莉酸、生长素和乙烯含量增加，但外源亚油酸乙醇胺处理并接种灰葡萄孢后只有乙烯含量显著增加。进一步研究发现，番茄乙烯突变体nr植株中，外源亚油酸乙醇胺对灰葡萄孢的抗性诱导作用显著受到抑制。【结论】外源施用亚油酸乙醇胺能够提高番茄内源光合效率和抗病基因的表达及内源激素乙烯的含量，增强番茄植株对灰霉病的抗性，推测其诱导抗性作用可能与乙烯信号路径相关。

【目的】研究抗氟吡菌胺突变体对不同杀菌剂的交互抗性并评估马铃薯晚疫病菌对氟吡菌胺的抗性风险。【方法】通过紫外线照射菌丝体、紫外线照射孢子囊和药剂驯化的方法获得抗氟吡菌胺的马铃薯晚疫病菌突变体，计算突变体的突变频率，测定抗性突变体的抗性水平，研究突变体在无药条件下继代培养１０代后抗性能否稳定遗传，测定突变体在ＲＳＡ培养基和离体叶片上的适合度（菌丝生长速率、产孢子囊能力及复合适合度指数），比较抗性菌株与其亲本敏感菌株的竞争力，分析对氟吡菌胺表现不同敏感性的菌株对不同药剂的交互抗性，并通过笔者实验室建立的抗性风险量化标准评定马铃薯晚疫病菌对氟吡菌胺的抗性风险。【结果】共获得２１个抗性菌株，抗性水平介．．．

为了研究水稻品种在不同时期对褐飞虱的抗性变化及其抗性机制，对１５份水稻材料进行苗期和成株期抗虫鉴定。并通过测定水稻抗生性及趋避性，对这１５份水稻材料进行抗性机制研究。结果表明，１５份水稻材料有１３份在苗期和成株期的抗性没有或呈现微弱变化，其余２份材料Ｔ１２、ＯＢ６６７在苗期抗性鉴定为感虫，在成株期表现为中抗。在抗生性试验下，其抗生性大小与抗虫能力基本保持一致；而在趋避性试验中，水稻的趋避性强弱并未与其抗虫性强弱表现一致性。