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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
叶志彪 李汉霞 郑用琏 刘后利
将反向克隆的ＡＣＣ氧化酶基因通过Ｔｉ质粒导入到番茄基因组中，转基因番茄植株叶片和果实中ＡＣＣ氧化酶活性和乙烯产生速率均受到显著抑制，显示出反义基因能抑制靶基因（ＡＣＣ氧化酶）的表达。子代抗性标记基因的分离结果表明呈单基因遗传。
关键词：
番茄,反义基因,基因表达,ACC氧化酶
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李明亮 韩一凡 李玲 田颖川 李凝 王世绩
利用ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆了番茄ＡＣＣ氧化酶基因ＬＥＥＴＨＹＢＲ编码区０．９ｋｂ的ｃＤＮＡ片段，经酶切图谱分析和序列分析鉴定后，反向插入到植物表达载体ｐＢｉｎ４３８中，构建了表达ＡＣＣ氧化酶反义ＲＮＡ的二元载体。用农杆菌侵染美洲黑杨叶片，在含卡那霉素的ＭＳ培养基上选择转化子和植株再生，通过ＰＣＲ检测筛选到１６株转基因杨树植株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析初步确证了外源基因是以单拷贝插入到杨树基因组中；对杨树幼苗乙烯释放量的测定结果表明转基因杨树的乙烯释放量为对照植株的２８％。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邱秀翠 刘永杰 焦艳艳 刘辉
【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸...
关键词：
甜菜夜蛾 虫酰肼 酚氧化酶 抑制效应
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
罗云波 郝四平 生吉萍
反义 ACC合成酶 (ACS)基因番茄的采后生理性状与普通番茄不同 ,该番茄的果实和叶片乙烯以及果实呼吸强度受到抑制 ,果实乙烯释放量为 0 ,没有出现呼吸高峰 ,呼吸强度在 10～ 14 mg.kg-1.h-1之间波动 ,极显著低于对照 (高峰时为 2 4 .55mg.kg-1.h-1)。反义番茄的叶绿素降解和番茄红素的合成亦受阻 ,果实在采后和贮藏期间逐渐变为黄色或桔黄色而番茄红素的合成很少 ,到采后 30 d仅有 0 .0 4 A.g-1(fw)。乙烯催熟采后 30 d的反义番茄 ,番茄红素增加 6 0倍。反义番茄 PG酶活性在采后缓慢上升 ,到采收后的第 4 5天达到最高为 4 5.1...
关键词：
转基因番茄 ACC合成酶 PG 成熟
[期刊] 中国农业科学
[作者]
崔青青 孟宪敏 段韫丹 庄团结 董春娟 高丽红 尚庆茂
目的】断根嫁接苗和打顶双干或多干嫁接苗日益广泛用于番茄栽培,丰产作用显著。了解断根与打顶对番茄嫁接愈合的作用机制,可为番茄嫁接生产提供理论依据。【方法】以‘硬粉8号’为接穗品种,‘砧爱1号’为砧木品种,观测断根和打顶后番茄嫁接愈合进程、成活率和木质部连通性等,同时测定嫁接接合部生长素和细胞分裂素的含量及愈合相关基因的表达。【结果】断根和打顶抑制了嫁接接合部上方木质部分化基因VND7的表达,并显著延迟了木质部的重构。断根显著降低了嫁接后12和72 h接合部玉米素核苷(tZR)和反式玉米素(tZ)的含量,以及嫁接后12 h接合部吲哚-3-乙酸(IAA),吲哚-3-乙酸甲酯(ME-IAA)和吲哚-3-甲醛(ICAld)的含量;打顶嫁接后12 h接合部IAA和ME-IAA含量显著低于对照和断根处理,下调了嫁接后3和12 h接合部上方和下方韧皮部分化相关基因NEN4表达水平。断根或打顶均下调了嫁接后3—48 h接合部上方细胞分裂相关基因Histone H4和SlcycB1-4的表达水平;断根和打顶同时处理使嫁接接合部IAA和ME-IAA含量显著低于断根处理,使tZR和tZ的含量及木质部连通性显著低于打顶处理。打顶和断根后分别在嫁接接合部施用10mmol·L~(-1) IAA和10 mmol·L~(-1) 6-BA可显著促进嫁接苗木质部的重构。【结论】断根和打顶分别降低接合部细胞分裂素和生长素积累,下调愈合相关基因表达,降低木质部输导能力,进而延缓番茄嫁接愈合进程。
[期刊] 林业科学
[作者]
赵燕 杨龙 曹露凡 周成刚 罗万春
以舞毒蛾为材料,分离提取酚氧化酶,研究4-己基间苯二酚(4HR)和曲酸对舞毒蛾酚氧化酶活力的影响。结果表明:4HR对该虫的单酚酶和二酚酶活性均表现很强的抑制作用,其IC50分别为0.00041和0.00035mmol.L-1。其中,4HR对单酚酶活力表达的迟滞时间有明显的延长效应,浓度为0.0002mmol.L-1时可使单酚酶活力表达迟滞时间从181s延长到253s;而当浓度为0.0005mmol.L-1时,其迟滞时间则延长至372s。以邻苯二酚为底物时,4HR对二酚酶的抑制作用表现为典型的竞争型抑制类型,抑制常数KI为0.00015mmol.L-1。曲酸对舞毒蛾的单酚酶和二酚酶活性均表现较强...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘伟 肖婷 杜磊 薛超彬 杨帆 罗万春
【目的】筛选对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua(Hübner))酚氧化酶具有高抑制活性的化合物,寻找新型害虫控制剂的线索。【方法】以牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)提取物Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate为抑制剂,采用酶标仪微量法研究了其对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制活性及抑制类型。【结果】Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)分别为2.439mmol·L-1和0.879mmol...
关键词：
牛耳枫 甜菜夜蛾 酚氧化酶 抑制动力学
[期刊] 华北农学报
[作者]
符秀梅 朱红林 周秀 李小靖 陈银华
乙烯在植物生长发育过程中发挥着重要的作用。ACC氧化酶是乙烯生物合成途径的限速酶。通过反义基因工程调控ACC氧化酶基因的表达,进而起到调控乙烯的生成是乙烯研究的主要途径。本研究采用RT-PCR方法获得番茄ACC氧化酶基因cDNA序列1 018 bp,构建该基因的正义、反义、RNA i表达载体,通过电转化法导入农杆菌LBA4404中。
关键词：
番茄 ACO基因 cDNA 表达载体构建
[期刊] 林业科学
[作者]
李明亮 韩一凡 邱德有 李凝 田颖川
利用ＲＴＰＣＲ技术克隆了大豆ＡＣＣ合酶基因ＧＭＣＡＣＣＳＩ编码区１５ｋｂ的ｃＤＮＡ片段，经酶切图谱分析和序列分析鉴定后，反向插入到２元载体ｐＢｉｎ４３８中，构建了表达ＡＣＣ合酶反义ＲＮＡ的植物表达载体，转化农杆菌后用该农杆菌侵染美洲黑杨叶片，在含卡那霉素的ＭＳ培养基上选择转化子和植株再生，通过ＰＣＲ检测从抗卡那植株中选到１５株转基因植株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析初步确证了外源基因是以单拷贝插入到杨树基因组ＤＮＡ中；对杨树幼苗乙烯释放的测定结果表明转基因杨树幼苗的乙烯释放量为对照的２２％。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李少华
以番茄早疫病菌为供试植物病原菌,采用生物活性追踪法和活体盆栽试验法评价了细辛提取物的抑菌活性,并探索了细辛的杀菌活性成分。结果表明:细辛氯仿粗提取物在96和48 h对供试菌的菌丝生长和孢子萌发都有较强的抑制作用。其中对菌丝生长和孢子萌发的半效应浓度EC50分别为1.69和0.41 mg/mL。细辛氯仿粗提取物经萃取分离得到的石油醚、氯仿和甲醇组分中,石油醚组分对供试菌孢子萌发具有强抑制作用,处理48 h后抑制率达到100%;但处理96 h后对菌丝生长的抑制率仅有40%。氯仿组分对供试菌的菌丝生长和孢子萌发均具有较好的抑制作用,分别为72.27%和83.42%。对氯仿组分进行硅胶柱层析分离,得到...
关键词：
细辛 番茄早疫病菌 抑菌活性 活性成分
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
包华 李康 钟睦琪 郝智慧
为证明胡椒碱对番茄灰霉病菌的抑制作用并揭示胡椒碱对番茄灰霉病菌抑菌机理，观察不同质量浓度胡椒碱处理下番茄灰霉病菌的菌落直径、产孢量和孢子萌发率以及胡椒碱处理后对番茄灰霉病菌菌丝形态变化、番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量、酶活性和细胞膜通透性的变化规律。结果表明：胡椒碱对番茄灰霉病菌有明显的抑制作用，当胡椒碱质量浓度为200mg/L时，抑菌率可达80.6%，对番茄灰霉病菌产孢率和孢子萌发抑制率分别达到88.5%和88.8%，对菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）的抑制率分别为82.7%、69.1%和70.4%，对琥珀酸脱氢酶（SDH）和NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）抑制率分别为89.5%和94.9%；胡椒碱处理后番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量低于对照组，细胞膜透性增强，番茄灰霉病菌菌丝变细、节间拉长、干瘪并坍塌。综上，胡椒碱可以有效抑制番茄灰霉病菌的生长，研究结果为新型植物源农药开发及番茄灰霉病防治提供了理论基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李少华 仲嘉伟 莫海波 刘素琪 李生才 曹挥
通过活性物质跟踪的方法,研究了问荆中的活性成分对番茄灰霉病菌的抑菌活性,结果表明:3种溶剂提取物中,氯仿提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,EC50分别为0.52和0.21mg/mL;对氯仿提取物萃取分离得到的4种不同溶剂萃取物中,乙酸乙酯组分对灰霉病菌菌丝和孢子萌发的抑制效果最佳,EC50分别为0.37和0.28mg/mL;经柱层析分离得到的12个流分中,L9流分的抑制菌丝生长作用最强,EC50为0.22mg/mL,L9流分处理灰霉病菌后发现菌丝生长稀疏,菌体细胞膜渗透性增大,电镜图片显示菌丝变形,有瘤状突起。因此,问荆提取物对灰霉病菌具有很强的抑制效果,为新型植物源农药的开...
关键词：
问荆 活性物质 番茄灰霉病菌 抑菌作用
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
生吉萍 罗云波
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
田宏现 苑平 王曼玲 刘艺 李菁 夏新界 谭晓风
为建立猕猴桃ACC氧化酶反义基因功能研究技术平台并通过生物技术改良猕猴桃,从海沃德猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.var.deliciosa‘Hayward’)叶片中提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,并以此为模板,扩增得到ACC氧化酶(ACO)基因片段约1 kb,经限制性内切酶图谱分析,组建亚克隆并进行测序,其开放阅读框长957 bp,编码319个氨基酸,与其他已公布的ACC氧化酶cDNA的核苷酸(AB003514.1)及氨基酸序列(BAA21541.1)同源率分别高达94.0%和95.6%,证明所克隆的cDNA序列的准确性。构建该基因的反义表达载体,并通过...
[期刊] 林业科学
[作者]
谷岱霏 严善春 李志强
【目的】研究植物源成分氧化苦参碱对台湾乳白蚁纤维素酶活性的抑制作用,为探讨氧化苦参碱在白蚁预防与控制方面的应用提供依据。【方法】在室内条件下[温度(26±1)℃,相对湿度65%±5%,黑暗无光照),供试台湾乳白蚁经饥饿处理2天后,用1%氧化苦参碱溶液处理滤纸后饲喂,分别于饲喂6 h、12 h、1天、3天、5天、7天收集台湾乳白蚁消化道,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,还原糖法测定比较白蚁消化道的滤纸酶活性(FPA)及内切β-1,4-葡聚糖酶(EG)、β-葡萄糖苷酶(BG)和纤维二糖水解酶(CBH)的比活力
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