双酚A（BPA）是一种具有雌激素效应的塑化剂，对雄性生殖影响显著，载脂蛋白E（ApoE）对精巢中甘油三酯和胆固醇等脂质的运输过程有重要作用。本研究探讨BPA对精巢ApoE基因的影响及调控机制，以期找到BPA所引起的雄性生殖问题与脂代谢之间的潜在联系。将稀有鮈鲫暴露于BPA（15 μg/L）1、3和5周，通过实时荧光定量（qPCR）、免疫印迹（WB）及免疫荧光（IF）检测BPA对ApoE基因表达和分布的影响，通过染色质免疫共沉淀（ChIP）和DNA甲基化检测探究BPA对ApoE的调控机制。结果显示，qPCR、WB及IF结果显示BPA可以显著影响精巢ApoE基因的表达和分布。ChIP结果表明ApoE的启动子区存在一个雌激素相关受体γ（Esrrg）阳性作用位点，ApoE mRNA的表达变化与Esrrg的募集变化一致。DNA甲基化检测结果显示ApoE的启动子区处于未甲基化状态，BPA处理对其无显著影响。研究表明，BPA可以通过调控稀有鮈鲫精巢ApoE基因启动子区域的Esrrg的募集直接干扰ApoE基因表达，BPA可能通过影响稀有鮈鲫精巢脂质转运影响其生殖功能。本研究结果将为后续从脂质代谢角度探究环境内分泌干扰物对雄性生殖的影响提供参考。

【背景】脂质是生物体重要营养素之一，对于昆虫滞育、飞行、胚胎发育和能量调节至关重要。载脂蛋白（apolipophorin,apoLp）是昆虫脂蛋白颗粒的蛋白质部分，主要负责组织之间脂质转运。【目的】以世界性农业害虫飞蝗（Locusta migratoria）为研究对象，通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术对其载脂蛋白生物学功能进行分析，探究载脂蛋白在飞蝗卵巢脂质运输中的作用，为害虫防治提供新的分子靶标。【方法】利用RNAi技术，分别对羽化后第1天（1 PAE,post adult eclosion）的成虫2个载脂蛋白基因（LmapoLp-II/I和LmapoLp-III）进行dsRNA注射，以ds GFP为对照，每头注射15μg dsRNA；分别解剖羽化后第4、6、8天的卵巢进行观察；取羽化后第8天的卵巢，以EF1α作为内参基因，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测沉默效率；利用脂质组学技术测定并分析对照和沉默LmapoLp-II/I后飞蝗卵巢脂代谢物差异，采用OPLS-DA模型的差异倍数（FC）、P值和VIP值相结合的方法筛选差异脂质；制备冰冻切片，利用Bodipy染色技术对沉默LmapoLp-II/I后飞蝗卵巢中性脂质的含量和分布进行观察；利用甘油三酯（triglyceride,TG）测定试剂盒，对沉默LmapoLp-II/I后飞蝗卵巢总甘油三酯含量进行测定。【结果】与对照组相比，分别注射ds LmapoLp-II/I和ds LmapoLp-III后，卵巢中靶基因的表达量均可被显著抑制，沉默效率分别为80.84%和92.89%；注射ds LmapoLp-II/I的飞蝗卵巢发育迟缓，而注射ds LmapoLp-III的飞蝗卵巢与对照组相同，均能够正常发育逐渐变大，颜色由白色逐渐变黄。沉默LmapoLp-II/I后，脂质组学分析共检测到1 166种上调代谢物和1 384种下调代谢物，其中20种甘油三酯显著下调；此外，总甘油三酯测定及Bodipy染色结果显示，卵巢总甘油三酯含量和中性脂质含量均较对照组显著降低。【结论】飞蝗LmapoLp-II/I是影响卵巢发育的主要载脂蛋白基因，其参与卵巢脂质的积累和运输。研究结果可为基于脂质运输基因为靶标的害虫防治提供理论依据。

稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)是我国特有的一种小型鲤科鱼类,目前已作为一种新型模式生物应用于实验研究。运用普通PCR方法克隆得到一段长6 299 bp的序列,序列分析发现编码区与稀有鮈鲫卵黄蛋白原cDNA序列相似性为100%。再参考6 299 bp序列5'端设计两对特异性引物,进行基因组步移,获得长度为1 285 bp的序列。经过序列拼接后得到7 573 bp的序列,分析发现其中含卵黄蛋白原基因全序列长度为6 595 bp卵黄蛋白原基因上游调控序列长度为978 bp。进一步分析开放性阅读框得知:稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因含有26个外显子和25个内含子,编码1 299个氨基酸序列,C...

稀有鮈鲫是一种新型的模式实验鱼,具有利用转基因技术培育开发成为观赏性鱼类的潜在可能。本实验采用PCR方法,从稀有鮈鲫基因组DNA中分离得到大小为1584bp的β肌动蛋白(β-actin)基因片段。序列分析表明,该片段包括长为1507bp的启动调控区和77bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为109bpβ-actin基因上游调控序列,不翻译的外显子1和内含子1。上游调控序列中含有TATAbox,CAATbox和CArGbox等与转录活性密切相关的作用元件,并且在稀有鮈鲫β-actin基因第一个内含子中也含有1个CArG调控元件。将该启动子片段克隆到绿色荧光表达载体(pAcGFP1-1)上,...

角蛋白18是角蛋白的一种,属于S型角蛋白,是在哺乳动物和两栖类动物胚胎发育中第一个表达的中间纤维蛋白。根据已发表的人、爪蟾及斑马鱼角蛋白18 DNA序列,通过DNAman同源性比较获得保守序列,并从中设计二对引物。从稀有鲫基因组中PCR扩增得到2 779 bp的角蛋白18的DNA序列片段;通过基因组步移,分别获得该基因的上游和下游序列片段;最后将获得的全基因片段克隆至质粒载体pMD19-T进行序列测定检验。结果显示所克隆的稀有鲫角蛋白18基因全长3 765 bp。对该基因进行NCBI的Blastn同源性比较分析,表明稀有鲫同斑马鱼比较角蛋白18 DNA序列存在73.6%同源相似性;同时对...

设定基温(23℃),研究了温度骤变(23℃→35℃、37℃、39℃→23℃)条件下不同的处理时间对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)不同发育阶段的胚胎和仔鱼的影响,以期为评估温排水对鱼类的影响提供基础资料。结果表明,稀有鮈鲫不同发育阶段的胚胎和仔鱼均能耐受温度骤变(23℃→35℃→23℃),与对照组(23℃)没有产生显著性差异;但当温度骤变为(23℃→37℃、39℃→23℃)时,随着骤变温度的升高以及处理时间的延长,不同发育阶段的胚胎和仔鱼畸死率升高,耐受能力表现出较大差异。其中,眼黑期>肌肉效应期>胚孔封闭期;混合营养期>外源性营养期>内源性营养期。

通过对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)进行单次电刺激和连续电刺激,探讨了电刺激对稀有鮈鲫精子寿命的影响。结果显示:稀有鮈鲫精子寿命具有日节律现象;单次电刺激能显著提高精子寿命,且3 h后达到峰值;隔天一次的连续电刺激也能显著提高精子寿命。

运用石蜡切片技术和扫描电镜技术对稀有鮈鲫（Ｇｏｂｉｏｃｙｐｒｉｓ ｒａｒｕｓ）鳃结构进行观察，并采用浓度为２ ｍＧ／Ｌ的ｃｄ ｃＬ＿２水溶液对稀有鮈鲫进行急性毒理实验。结果显示：稀有鮈鲫具４对鳃，由鳃耙、鳃弓、鳃丝及鳃小片组成。鳃的各个部位表面均有上皮细胞覆盖；鳃耙和鳃弓具味蕾，鳃弓上还具不同类型的黏液细胞；相邻鳃小片的上皮细胞间也分布有黏液细胞，在鳃小片基部有氯细胞着生。鳃丝表面有不规则凹陷和微嵴，具沟、坑、孔等结构；鳃小片两面均呈凹凸状。在２ ｍＧ／Ｌ的ｃｄ ｃＬ＿２水溶液暴露下，鳃受到损伤，发生鳃小片充血呈球状，鳃上皮水肿、脱落，黏液细胞增多等现象；并随时间延长受损程度加重。

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)和肝脂酶(Hepatic lipase,HL)的表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,本研究采用荧光定量PCR技术检测LPL和HL基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及m RNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因m RNA表达量的影响。结果显示,LPL和HL基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达,且LPL和HL m RNA表达量呈上升变化。葡萄糖组LPL和HL m RNA表达量呈上升变化,维生素C组也呈上升变化。...

脂蛋白脂酶是脂质代谢的关键酶,主要催化乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯水解。产生供组织利用的脂肪酸和单酰甘油。笔者综述了LPL基因的结构、功能、表达调控以及基因突变的研究进展。

研究了不同水体、盐度(NaCl溶液)和pH对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子活力的影响,并测定了精子的大小、密度。结果显示:稀有鮈鲫精子头部长(1.246±0.083)μm,宽(1.053±0.172)μm,尾长约(37.21±2.536)μm;精子密度为(4.623±0.170)×109 ind./mL;精子活力以江水中最高;精子生存的最适NaCl浓度为0.55%,此溶液中精子的快速运动时间,有效运动时间及寿命分别为(36.04±2.55)s、(50.57±2.69)s和(87.83±9.02)s;精子在pH为8.0的蒸馏水中活力最强,此时精子的快速运动时间,有效运动时间及...

为探究稀有鮈鲫MHC Ⅱβ基因的分子特征及其表达特点，采用PCR扩增技术获得了稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）MHC Ⅱβ cDNA序列810 bp，包括开放阅读框（ORF）759 bp，编码252个氨基酸。生物信息分析表明，MHC Ⅱβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXXG结构，与其他亲缘鱼类的一致性为51.78%～80.56%，其编码的蛋白质分子包括1个信号肽、1个MHC Ⅱβ（β-1）结构域、1个IGc1（β-2）结构域和1个跨膜螺旋区域。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明，MHC Ⅱβ在脾脏表达量最高，头肾、鳃、皮肤表达量较高。人工感染鲁氏耶尔森菌后，6 h时头肾表达呈极显著上调，肝脏在12 h开始出现极显著上调，皮肤在24 h和48 h表达极显著，鳃在6～24 h表达极显著，脾脏则是在6 h出现极显著下调，于96 h接近对照组表达水平。初步研究表明，MHC Ⅱβ在鱼类抵御细菌感染的免疫反应中发挥着重要作用，为进一步揭示稀有鮈鲫MHC家族的功能提供了参考依据。

为了研究鳜(Siniperca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列。鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089bp,其中开放阅读框(ORF)为1548bp,编码515个氨基酸。鳜HL基因cDNA全长为1964bp,其中ORF为1494bp,编码497个氨基酸。进化树分析显示,鳜LPL与HL基因与其他脊椎动物的LPL、HL基因各自聚集成簇。对鳜基因组进行PCR获得鳜LPL与HL全基因组DNA序列,与其他脊椎动物基因结构相似,鳜LPL基因由10个外显子和9个内含子组成,全长7392bp;...

控制水域电压为７５ Ｖ，电流２８０ ｍ Ａ，持续电刺激５ ５００ ｍｓ左右，电刺激的作用强度是使鱼既能达到休克昏迷状态又能在几分钟内苏醒。通过对１月龄的稀有鮈鲫（Ｇｏｂｉｏｃｙｐｒｉｓ ｒＡｒｕｓ）进行电刺激，观察电刺激对其性腺发育及性成熟后繁殖的影响，以期为渔政部门评价电捕鱼行为对鱼类资源的影响提供参考。结果表明，电刺激１次组、电刺激３次组和电刺激５次组可以促进雌雄鱼的生长和性腺发育，连续电刺激组对雄鱼的生长和性腺发育影响不大却会抑制雌鱼的生长和性腺发育；电刺激１次组、电刺激３次组和电刺激５次组对性成熟后雌雄鱼的繁殖没有产生显著差异，而连续电刺激组对性成熟后雄鱼的繁殖没有产生显著差异，却会造．．．

利用微创手术检查的方法对人工养殖西伯利亚鲟的卵巢发育期进行鉴别,根据卵巢发育期将西伯利亚鲟分为Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期和Ⅵ期共5个实验组。对5个实验组血清脂蛋白脂酶(LPL)活性及血脂含量进行测定,并对其之间的关系进行分析。结果表明:随着卵巢发育,血清LPL活性、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、甘油三酯(TG)呈"先上升,后下降"的趋势,其中LPL在Ⅴ期达到最高值,VLDL-C、TG均在Ⅳ期达到最高值;总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)随卵巢发育表现为上升趋势。血清TG与LPL呈正相关关系。