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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘小凡 谢晓磊 吴咏梅 陆应林 虞德兵
[目的]本试验旨在研究c-myc基因在鸡卵泡上的表达及卵泡刺激素(FSH)对其的诱导作用，为明确c-myc在鸡卵泡发育过程中的相关机制提供理论基础。[方法]体外分离鸡小白卵泡(SWF)、大白卵泡(LWF)、小黄卵泡(SYF)、F4和F1卵泡颗粒层和膜层，检测c-myc mRNA和蛋白的表达；应用50 ng·mL~(-1)FSH处理小黄卵泡36 h,测量卵泡颗粒层的厚度和密度，检测颗粒层和膜层c-myc、标记基因和周期相关基因的表达；体外分离、培养小黄卵泡颗粒细胞，预培养16 h,用siRNA干扰c-myc 24 h后，加入50 ng·mL~(-1) FSH处理24 h,检测c-myc mRNA的表达。[结果]c-myc mRNA在等级前卵泡的颗粒层和膜层的表达水平都显著高于排卵前卵泡，卵泡的颗粒层和膜层上都有c-Myc蛋白表达。与对照组相比，FSH处理后，小黄卵泡颗粒层厚度增加约25.5%(P<0.05),密度增加约27.8%(P<0.01)。在小黄卵泡颗粒层上，FSH降低了c-myc和类固醇激素合成急性调节蛋白(star)mRNA的表达水平(P<0.05),提高了细胞增殖抗原(pcna)和周期蛋白D2(ccnd2)mRNA的表达水平(P<0.05)。[结论]FSH能诱导c-myc在鸡颗粒细胞中的表达，推测c-myc与体外培养的鸡小黄卵泡颗粒细胞的终端分化有关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘小凡 谢晓磊 吴咏梅 陆应林 虞德兵
[目的]本试验旨在研究c-Myc在鸡卵泡上的表达及FSH对c-Myc的诱导作用，为明确c-Myc在鸡卵泡发育过程中的相关机制提供理论基础。[方法]体外分离鸡小白卵泡（SWF）、大白卵泡（LWF）、小黄卵泡（SYF）、F4和F1卵泡颗粒层和膜层，检测c-Myc mRNA和蛋白的表达；应用FSH（50 ng/mL）处理小黄卵泡36 h，测量卵泡颗粒层的厚度和密度，检测颗粒层和膜层c-Myc、标记基因和周期相关基因表达；体外培养小黄卵泡颗粒细胞，敲减c-Myc 24 h后加入FSH（50 ng/mL）处理24 h，检测c-Myc 表达。[结果] c-Myc mRNA在等级前卵泡的颗粒层和膜层的表达量都显著高于排卵前卵泡，卵泡的颗粒层和膜层上都有c-Myc蛋白表达。与对照组相比，FSH增加了小黄卵泡颗粒层厚度约25.5%（P<0.05），密度约27.8%（P<0.01）。在小黄卵泡颗粒层上，FSH降低了c-Myc和类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）mRNA的表达水平（P<0.05），提高了细胞增殖抗原（PCNA）和周期蛋白D2（CCND2）mRNA的表达水平（P<0.05）。[结论]FSH能诱导c-Myc在鸡颗粒细胞中的表达，且猜测c-Myc与体外培养的鸡小黄卵泡颗粒细胞的终端分化有关。
关键词：
鸡 c-Myc基因 FSH 卵泡
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张淑君 熊远著 邓昌彦 郑嵘 蒋思文 肖森木 夏瑜 徐建祥 刘晓华 王春芳 阮征 宫时玉
分析了FSHR基因 2个位点 (FSHRA、FSHRB)的PCR -SSCP、PCR -RFLPS多态性 ,利用SAS软件分析了多态性与母猪产仔数间连锁关系。找到了 1个影响产仔数的新的变异位点FSHRB ,该位点多态性显著地影响猪产仔数性状 ,即基因型BB的产仔数显著地高于AB、AA基因型。结果显示出该位点具有作为常规选育的辅助选择的有效的分子标记潜力
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱怀森 钱庄 杨东风 刘洪林 鲍恩东
[目的]为了探讨应激对断奶母猪繁殖障碍的影响机制,本试验以促肾上腺皮质激素(ACTH)注射所致的应激模型来研究应激对断奶母猪卵泡液中类固醇激素合成及卵泡促黄体素受体表达的影响。[方法]对10头苏淮断奶母猪进行颈静脉插管手术,随机均分为对照组与ACTH处理组(n=5)。手术第3天开始以每次间隔8 h给ACTH处理组母猪注射ACTH(1 IU·kg-1),对照组母猪注射生理盐水,连续注射7 d。利用ELISA方法检测受试母猪卵泡液中类固醇激素及血浆中皮质醇的含量变化;利用荧光定量PCR测定胆固醇侧链裂解酶(C
[期刊] 水产学报
[作者]
刘淼 温海深 何峰 李吉方
为研究黄颡鱼促卵泡激素受体(FSHR)基因的克隆以及该基因在卵巢发育周期中的表达情况,实验首先采用SmartTMRace技术,获得了黄颡鱼促卵泡激素受体基因cDNA全长序列,该基因全长2 340 bp,编码661aa,具有G蛋白偶联受体超家族(G protein-coupled receptor,GPCR)的7个跨膜螺旋区(transmembrane domain)。经分析发现,得到的FSHR基因序列具有9个富含亮氨酸的重复性序列(LRRs);5个潜在的N-端糖基化位点;蛋白激酶C(proteinkinase C,PKC)磷酸化位点(403Y)位于第一个包外环,C-末端(C-terminal ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李佳宜 陆应林 刘小凡 虞德兵
[目的]以东乡绿壳蛋鸡为研究对象,从形态学和分子水平上探究高低产蛋鸡卵巢和卵泡的差异。[方法]选择高产组、低产组东乡绿壳蛋鸡各10只,采集静脉血,测定相关激素含量;屠宰采集卵巢组织,制作组织切片,观察卵巢形态结构;提取卵巢组织RNA,分别测定高产与低产蛋鸡卵巢中的细胞增殖凋亡基因、生殖调控相关转录因子基因、类固醇激素合成关键酶基因和相关激素受体基因的表达量。[结果]高产与低产蛋鸡卵巢和卵泡在形态上有明显差别:高产蛋鸡卵巢体积大,卵泡丰富,细胞排列紧密;低产蛋鸡卵巢、卵泡发育不良,细胞松散。高产蛋鸡血清中促
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李佳宜?陆应林?刘小凡?虞德兵
[目的]以东乡绿壳蛋鸡为研究对象?从形态学和分子水平上探究高低产蛋鸡卵巢、卵泡的差异?[方法]选择高产组、低产组东乡绿壳蛋鸡各10只?采集静脉血?测定相关激素含量?屠宰采集卵巢组织?制作组织切片?观察卵巢形态结构?提取卵巢组织RNA?分别测定高、低产蛋鸡卵巢中的细胞增殖凋亡基因、生殖调控相关转录因子基因、类固醇激素合成关键酶基因和相关激素受体基因的表达量?[结果]高低与低产蛋鸡卵巢及卵泡在形态上有明显差别?高产蛋鸡卵巢体积大?卵泡丰富?细胞排列紧密?低产蛋鸡卵巢卵泡发育不良?细胞松散?高产蛋鸡血清中促卵泡
[期刊] 中国农业科学
[作者]
应诗家 戴子淳 郭佳佳 施振旦
【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间点各5只鹅。屠宰时,取卵巢,观察卵泡外观形态,并分离F1-F5级卵泡基质层。试验鹅自由饮水、自由采食、自然光照。LPS处理0、24和36 h的单个F1-F5级卵泡基质层或卵泡用于基因表达分析,而其他LPS处理的每只鹅等级卵泡基质层RNA等质量混合后用于基
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘春洁 栗瑞兰 宋慧子 王兆琛 杜炜 张家新
通过分析绵羊不同直径腔卵泡中葡萄糖与生殖激素(FSH、LH和17β-E_2)含量和相关受体基因表达的相关性,阐明不同腔卵泡发育中葡萄糖和生殖激素对卵泡生殖调控的机制。根据绵羊腔卵泡不同直径划分为小卵泡组(2.0～3.4 mm)、中卵泡组(3.5～5.4 mm)和大卵泡组(>5.5 mm)3组,收集其卵泡液及颗粒细胞(GCs)。采用AnnextinV-FITC测定小、中和大卵泡中GCs凋亡情况;利用放射免疫法检测小、中和大卵泡组中葡萄糖浓度及FSH、LH和17β-E_2的含量;运用qRT-PCR技术检测小、中和大卵泡GCs中FSHR、LHR和G6Pase基因的转录水平。结果显示,不同直径绵羊腔卵泡中GCs凋亡无显著差异(P>0.05);随着腔卵泡直径的增大,卵泡液中葡萄糖浓度、FSH、LH和17β-E_2的含量均升高;同时,GCs上FSHR、LHR、G6Pase基因的转录水平极显著升高(P<0.01)。不同直径腔卵泡中,葡萄糖浓度与FSH含量均呈显著正相关,仅在大卵泡中与LH呈显著正相关(P<0.05)。另外,葡萄糖浓度与FSHR、G6Pase基因的表达量呈显著正相关,只在大卵泡中与LHR表达量呈显著正相关(P<0.05)。随着绵羊腔卵泡生长,葡萄糖与生殖激素含量和相关受体基因表达量具有显著相关性,共同参与调节卵泡发育。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈彦宏 曾申明
为分析巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)在不同直径健康猪卵泡上的表达变化规律,将收集到的90个健康母猪卵巢,通过ELISA检测不同直径卵泡液中MIF质量浓度,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白的表达水平,采用免疫荧光检测MIF在颗粒细胞中的分布情况。结果显示:1)中等直径卵泡(3～4mm)液中MIF的质量浓度(54.17±7.86ng/mL)显著高于大卵泡(>6mm,32.29±1.47ng/mL)和小卵泡(1～2mm,38.89±0.98ng/mL)(P<0.05);2)中等直径卵泡颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白质表达量也显著高于大卵泡和小卵泡的表达量(P<0.05);3)MIF也在不同直径卵泡颗粒细胞中的细胞核和细胞质表达,但多集中于细胞质中。综上,随着猪卵泡发育过程,MIF在中等直径卵泡中表达量最高。本研究为母猪卵泡发育和排卵提供新的线索。
关键词：
MIF 卵泡发育 颗粒细胞
[期刊] 水产学报
[作者]
解银洁 黄辉洋 叶海辉 巩杰 金朱兴 李少菁
卵泡抑素相关蛋白(follistatin related protein,FRP)是一种细胞外基质糖蛋白,该蛋白参与细胞增殖、迁移、组织重塑、胚胎发育、细胞间相互作用等多种生理过程。迄今甲壳动物FRP的研究尚未见诸报道。实验采用RACE技术首次克隆了拟穴青蟹FRP基因部分cDNA序列。该序列长度1 948 bp,FRP肽段含有484个氨基酸残基,包括KAZAL-FS结构域、EFh结构域和两个Ig结构域。系统进化树显示拟穴青蟹FRP基因的分子进化地位与其生物学分类地位一致。半定量PCR及荧光定量PCR结果表明,FRP基因在拟穴青蟹的胸神经团、脑和卵巢中表达。FRP基因在卵巢发育各期的表达量各不相...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王海滨 李美玲 夏国良 吕忠显 郭勇 谢辉蓉
表皮生长因子 (EGF)是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子。关于 EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的作用至今未见报道。本研究以单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和 5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标 ,利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了 EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现 :1EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵泡数和卵巢内 5个最大卵母细胞平均直径从培养第 7天起即显著高于 ITS对照组直至培养结束 ;2 EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮 ,但对雌二醇的基础分泌无影响 ;3EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王进荣 杨利国 王元兴
用人工合成人抑制素α亚基 (1 2 6Gly .Tyr)片段与KLH连接作完全抗原免疫产蛋三黄母鸡 ,用放免法测定排卵周期外周血中雌二醇和孕酮的水平 ,观察产蛋率的变化。宰杀后卵巢称重 ,各期卵泡分类计数。结果免疫组产蛋率、大白泡、小白泡和小黄泡数比对照组高 (P
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
彭家宝 汪紫嫣 杨志刚 陈阿琴
Sirtuins （SIRT）是一类NAD+依赖性Ⅲ类去乙酰化酶家族，广泛参与生物体各项生理活动，特别是在卵巢发育方面发挥着重要作用。本研究运用生物信息学方法系统分析斑马鱼（Danio rerio） SIRT家族基因的染色体分布、基因结构、氨基酸序列、蛋白基序和保守结构域、理化性质、二级结构和三级结构及系统进化关系，并探究在卵泡不同发育时期的表达变化。结果显示，斑马鱼8个SIRT基因分布于斑马鱼的8条染色体上，序列长短不一，最长为SIRT6 （140 265 bp），最短为SIRT4 （7 101 bp），编码区为3～14个不等。斑马鱼SIRT氨基酸序列相似度较低，但都具有Sir2保守结构域和保守基序。斑马鱼SIRT蛋白均为亲水性蛋白，除SIRT3外，均为不稳定蛋白。亚细胞定位预测显示，斑马鱼SIRT家族蛋白主要定位于细胞质和细胞核。系统进化分析表明，斑马鱼SIRT1、SIRT2、SIRT3.2和SIRT4与金鱼（Carassius auratus）、青鳉（Oryzias latipes）具有共线性关系。蛋白互作网络（PPI）预测发现，SIRT蛋白与雌激素受体（ESR1）、叉头盒转录因子家族（FOXOs）、热休克蛋白家族（HSPs）、超氧化物歧化酶家族（SODs）等具有相互作用。实时荧光定量PCR分析显示，在卵泡发育过程中，SIRT1和SIRT2主要在卵黄发生中期（MV）表达；SIRT3和SIRT4主要在充分生长未成熟期（FG）表达；SIRT3.2、SIRT5、SIRT6和SIRT7主要在成熟期（GVBD）表达。本研究阐明了斑马鱼SIRT基因家族进化发育关系、结构功能特征以及在卵泡发育过程中的表达规律，可为进一步研究SIRT家族在鱼类卵泡发育过程中的作用提供参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李鹏飞 孟金柱 景炅婕 毕锡麟 王锴 朱芷葳 吕丽华
【目的】通过不同生理状态牛卵泡高通量测序筛选与卵泡发育相关的基因。【方法】母牛同期发情后,B超声波连续监测并适时采集第一卵泡波出现偏差前的最大卵泡(the largest follicle at predeviation,PDF1)和第二大卵泡(the second largest follicle at predeviation,PDF2),构建RNA文库后Illumina平台测序,经数据库比对,设定参数筛选高表达基因、差异表达基因并进行GO分析,Genecards基因功能查询进一步筛选与卵泡发育直接相关的调控基因,q RT-PCR对筛选的基因进行表达量验证分析。【结果】两个转录本中共获得263个差异表达基因;GO功能聚类分析共分为三大类90组:其中生物学过程占64.4%,细胞组分占17.8%,分子功能占17.8%;获得一些重要的功能富集通路,如调控信号转导和细胞因子应答的生物途径;基因表达量分析筛选出10个高表达的上调和下调基因,获得参与雌激素合成和胎儿性别发育的CYP17A1、参与类固醇激素合成的LOC785462、细胞发育过程中调节细胞凋亡的DACH1以及调节ERK和MEK1/2信号通路的MAP3K3。Genecards功能查询共获得6个基因与卵泡发育关系较为密切,其中上调基因分别为PRSS35,PTGRF,ARID4B,GPR116;下调基因为APOA1和CPXM1;q RT-PCR结果显示,PRSS35和ARID4B在DF中的表达量显著高于SF(P<0.05),CPXM1在SF中的表达量极显著高于DF(P0.05),但其表达变化趋势与高通量测序结果相一致。【结论】转录组测序结果真实可靠,PRSS35和ARID4B在卵泡发育过程中发挥正调控作用,CPXM1在卵泡发育过程中发挥负调控作用,获得的牛卵泡发育相关基因和重要调节途径,对后期深入探讨卵泡发育调控机理的研究具有重要意义。
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