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[期刊] 中国科学技术大学学报  [作者] 赵世玉   赵刚  
近年来由于肿瘤和非肿瘤因素的影响,对女性生育力保存的需求越来越高,满足这些需求将会是未来几年的一个热门话题。卵母细胞的冷冻保存是实现女性生育力保存的一个可行的选择,在哺乳动物基因库和人类卵母细胞库方面已经取得了重大进展。本文系统介绍卵母细胞低温保存的研究历史和玻璃化保存技术,重点介绍保存中使用的玻璃化载体。此外,我们还总结了卵母细胞玻璃化保存的基本原理,讨论了玻璃化对于卵母细胞质量的影响,并且提出了改善卵母细胞低温保存效率的一些策略。最后,我们对卵母细胞低温保存技术进行了总结,并对其发展前景进行了展望。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 张德福  朱良成  刘东  芮荣  汤琳琳  项智峰  
目的本研究试图通过比较猪卵母细胞超低温冷冻保存方法、冷冻承载工具、冷冻卵母细胞的类型,从而有效地保存猪卵母细胞;方法利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞,以台盼蓝染色、二乙酸荧光素(FDA)染色鉴定卵母细胞冷冻后的成活率,以体外成熟和体外受精鉴定卵母细胞冷冻后的发育能力,研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对猪卵母细胞的冷冻效果。结果(1)程序化法冷冻保存中,9%乙二醇(EG),10%二甲基亚砜(DMSO),10%甘油(Gly)均对猪MII期卵母细胞有冷冻保护作用,极显著高于对照组(FDA染色成活率33.8%,25.8%,23.5%vs2.5%,P<0.01),且以9%EG的效果最好,显著高于另外两组(...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 蔡令波  王锋  
比较从不同卵巢卵泡直径获得的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并研究其冷冻保存效果。结果表明 :在体外成熟培养液中添加 10 % (体积分数 ,下同 )ECS的成熟率 (72 86 % )显著高于添加 10 %NCS (6 2 2 1% ) (P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李青旺  于永生  江中良  王立强  胡建宏  常万存  
采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ,二步法冷冻效果显著优于一步法 (P
[期刊] 华北农学报  [作者] 李晟阳  罗光彬  张晓华  何丽华  姚汝强  纪英卓  郭建华  
探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 戴建军  芮荣  武彩红  葛立军  卢庆  
旨在探讨提高猪GV期卵母细胞冷冻保存效率的可能途径。将EDS、EFS40和ES冷冻保护液用作卵母细胞冻前、冻后程序的处理,但不冷冻,比较3种冷冻保护剂对猪GV期卵母细胞的毒性作用;采用ES液作玻璃化液,比较常规细管法、OPS法和电镜铜网法3种冷冻载体对猪GV期卵母细胞的冷冻效果;并以ES液作玻璃化液,OPS管为冷冻载体,将猪GV期卵母细胞分5组,即对照组、CB+离心处理组、直接冷冻组、CB+冷冻组、CB+离心+冷冻组进行对比处理,比较各处理卵母细胞的冻后存活率与发育率。结果表明,在不同冷冻保护液中,以ES液组合作为玻璃化冷冻液时的毒性作用最低,与对照组间无明显差异(P>0.05);在3种冷冻载...
[期刊] 华北农学报  [作者] 黄承俊  郭林林  孙守强  林峰  刘海军  
为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 刘红林  范必勤  陈宜峰  汪河海  
昆明鼠卵母细胞hCG注射后18 ̄19h用体积分数为7%的乙醇作用5 ̄6min,能够获得较为理想的激活效果,激活率高达90%。乙醇激活处理时,卵丘细胞以及细胞外Ca\+\{2+\}、Mg\+\{2+\}的有无对卵子的激活效果均无显著影响。37℃下激活处理与30℃下相比,激活率无显著差异,但卵子碎裂率显著提高。性成熟前小鼠超排的卵子虽然也能被激活,但激活率低于成熟后小鼠超排的卵子。哺乳动物卵母细胞成熟分裂抑制剂NaF和IBMX不能抑制乙醇处理卵的孤雌激活,但显著地抑制了激活卵子的卵裂。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李裕强  张琇  安志兴  张涌  
 比较了Ionomycin(离子霉素)和乙醇及其与其他物质的组合激活牛卵母细胞的效果,并研究了去核时间、细胞松弛素B、末期去核等对去核效率的影响。结果表明,配合使用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)或放线菌酮(CHX)可显著提高Ionomycin或乙醇激活牛卵母细胞的效率,Ionomycin+6-DMAP激活的牛孤雌胚在8/16细胞之后的发育率明显高于乙醇+6-DMAP(或CHX)。牛卵母细胞的去核在成熟培养20h或之前进行效果较好,此时有较高比率的卵母细胞中第一极体与染色体位置靠近。牛卵母细胞在不含细胞松弛素B的操作液中可进行去核,但所得核移植胚胎的卵裂率明显下降,而对8/16细胞胚之后的发育...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 赵晓娥  武浩  王勇胜  刘凤军  鲁进  张涌  
 探讨了显微操作条件的改善对山羊卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)的影响。结果表明,将精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度从10%(10g/L)降低到8%和5%后,ICSI胚的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率、桑葚胚率和囊胚率随PVP浓度的下降而上升;PVP浓度为5%和10%时,正常卵裂率分别为69.6%和58.5%(P<0.05),桑葚胚率分别为45.6%和35.2%(P<0.05),囊胚率分别为26.9%和16.9%(P<0.05),表明含5%PVP的精子操作液更有利于ICSI胚的发育。显微注射时将卵母细胞第一极体置于相当于时钟6点的位置与12点位置相比,ICSI胚的分裂率没有差异,而正...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 华再东  郑新民  魏庆信  许厚强  刘西梅  李莉  
通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:改良TCM199(mTCM199)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 曹鸿国  刘俊平  张涌  
 对小鼠卵母细胞进行孤雌激活用于单性生殖研究。取成年昆明白小鼠进行超数排卵,乙醇激活,同小鼠输卵管上皮细胞共培养并添加mM16培养基培养至早期囊胚阶段,移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,换成ES细胞培养液继续培养,分离消化ICM,重新接种,对分离出的ES样细胞集落进行分离培养鉴定。结果显示,小鼠卵母细胞激活率为96.99%,2-细胞发育率为93.17%,桑椹胚发育率为80.33%,囊胚发育率为73.22%。小鼠孤雌激活囊胚中分离的ES样细胞集落具有一系列ES细胞所特有的特征,如呈现出岛屿状形态,碱性磷酸酶染色为阳性,体外能够自发分化成上皮样或单个散在分布的细胞等。试验证明,小鼠孤雌胚中可以分离出...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 霍道坦  陶勇  王勇  权青  田宁宁  成志军  章孝荣  
为研究猪卵母细胞发生早期卵巢上细胞的凋亡情况,制作妊娠33、40、46、54、61 d母猪胎儿卵巢的石蜡切片,并进行荧光染色。结果发现,母猪妊娠到33 d时,胎猪卵巢上即可见原始生殖细胞和卵原细胞的凋亡,随着妊娠时间的延长,凋亡也逐渐增加,妊娠33、40、46、54和61 d母猪胎儿卵巢上卵原细胞的凋亡率分别为3.13%、4.32%、5.50%、9.43%和11.10%,同时,颗粒细胞的凋亡率则分别为8.89%、12.45%、14.74%、17.96%和22.81%。结果说明,在猪胎儿卵母细胞发生早期,即开始发生了卵原细胞和颗粒细胞的凋亡,且有逐渐增加的趋势。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 朱桂玉  冯书堂  李吉涛  牟玉莲  潘登科  郭炳冉  
【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 黄德宝  胡建宏  李青旺  冯涛  丁海荣  杨智青  董文素  
将132个猪卵巢按重量分为A、B和C3个级别,用抽吸法结合切剖法采集卵母细胞,研究卵巢重量与3个级别卵母细胞质量的相关性。结果表明:当卵巢重量>4.000g时,A级卵母细胞的数量与卵巢重量呈负相关(rA=-0.2770);当卵巢重量在2.000~4.000g时,A级卵母细胞的数量与卵巢重量呈正相关(rA=0.3827),且差异极显著(P<0.01),无论单个卵巢获得的卵母细胞总数,还是A级卵母细胞的比例,均明显高于其他重量的卵巢;当卵巢重量≤2.000g时,A级卵母细胞的数量与卵巢重量有一定的正相关性。研究结果表明,在采集猪卵巢卵母细胞时,建议采集重量在2.000~4.000g的卵巢,以获得较...
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