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[期刊] 华北农学报
[作者]
武峻新 畅志坚
以南瓜矮生和蔓生的自交系为材料,通过对影响南瓜AFLP反应体系中的关键因素(如DNA的提取方法、酶切和连接反应时间、预扩增产物稀释倍数和银染检测方法等)进行研究,结果表明,采用加入PVP和β-巯基乙醇后的改良CTAB提取法获得的南瓜嫩叶基因组DNA质量较好;5.5 h可以满足酶切和连接反应;酶切连接产物稀释5倍,预扩增产物稀释30倍,可以满足试验要求。应用该体系,对96对引物进行筛选,在南瓜矮生和蔓生自交系间获得的引物扩增出了重复性好、清晰的南瓜矮生和蔓生的自交系多态性条带。为进一步进行南瓜矮生基因定位奠定了良好的基础。
关键词：
南瓜 矮生 AFLP体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
张桂华 杜胜利 鞠秀芝 韩毅科 马德华 王鸣
以24个不同类型的黄瓜高代自交系为试材,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于黄瓜的AFLP反应体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以300 ng为宜,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,选择性扩增引物的选择性碱基的数目以“2+3”组合为宜。采用优化好的体系,引物组合P12M12在供试材料中共扩增出稳定清晰的带纹35条,其中多态性带4条。
关键词：
黄瓜 扩增片断长度多态性 DNA指纹图谱
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙涌栋 李贞霞 张兴国 陈碧华 李新峥
以黄瓜为研究材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜黄瓜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,适用于黄瓜dscDNA的酶切组合为TaqI和VspI,dscDNA酶切用量为300 ng,用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,作为选择性扩增模板的预扩增反应产物的适宜稀释倍数为30倍。
关键词：
黄瓜 cDNA-AFLP 分析体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
王惠哲 李淑菊 霍振荣 管炜
对影响黄瓜枯萎病菌AFLP技术体系的多种因素作了探讨,得到了1种适合于黄瓜枯萎病菌AFLP分析的优化体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以100 ng(25μL体系)为宜,预扩增产物的稀释倍数以20倍为宜。采用优化好的体系,以21个不同地区的黄瓜枯萎病菌菌株为试材,引物组合E15/M65在21个菌株中共扩增出稳定清晰的带纹452条,各菌株扩增带分布较均匀,扩增带最少的为13条,最多的32条。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王大玮 李煜 周玮 李周岐
【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结...
关键词：
杜仲 AFLP 体系优化 引物筛选
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
祝军 王涛 李光晨 赵玉军 张文 周爱琴
以 12个苹果砧木基因型为试材 ,建立了扩增酶切片段长度多态性 (AFL P)分析体系。对其分析过程中 DNA提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用 P32 M6 4引物构建了供试苹果砧木基因型的 AFL P指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带 10 5条 ,多态性带 6 7条 (占 6 3.8% ) ,条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。讨论了 AFL P分析的影响因素
关键词：
AFLP分析 DNA指纹图谱 苹果
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李升康 熊远著 邓昌彦
以大白等 6个猪品种为试验材料 ,建立了家猪扩增酶切片段长度多态性 (AFLP)分析体系 ,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了检测。用E39M 4 8引物组合构建了供试猪的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。
关键词：
AFLP DNA指纹 猪
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
季士治 王伟继 雷霁霖 孔杰
本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。
关键词：
AFLP 大菱鲆 反应体系
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
蒋燕锋 斯金平 黄华宏 程龙军
以厚朴Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明:①采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00mmol·L-1,三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)最佳浓度为0.225mmol·L-1,Taq DNA聚合酶最佳用量为16.67nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗...
关键词：
中草药 厚朴 扩增片段长度多态性 中药材
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
郭金剑 池伟 赵鑫珠 王丽 曾燕如 张秋月
以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料,利用改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法与CTAB裂解-硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP(扩增片段长度多态性)分析体系进行了摸索。结果表明:"!改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;#"采用EcoR I/MseⅠ酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;&%适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT+M-CAT,E-ACT+M-CTG,E-ACG+M-CAT,E-ACG+M-CTG。扩增产物经60 g.L-1变性聚丙...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 连森阳 傅星源 王光瑛 李昂
以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt II-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoRⅠ/MseⅠ分步酶切cDNA各2 h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1%琼脂糖电泳及6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示,番鸭脑垂体总RNA的提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.番鸭cDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础.
关键词：
番鸭 cDNA-AFLP 体系建立
[期刊] 西南农业学报
[作者]
彭敏 陈晓汉 陈秀荔 蒋伟明 黎铭 李咏梅
为了将AFLP技术应用到企鹅珍珠贝相关研究中,以企鹅珍珠贝为材料,采用SDS-CTAB改进法DNA提取高质量的基因组DNA,通过对AFLP双酶切体系?连接体系?预扩增体系及选择性扩增体系中关键因素进行优化,建立了适用于企鹅珍珠贝的AFLP反应体系。同时以3个企鹅珍珠贝地理群体为材料,采用新建立AFLP反应体系从256对引物组合中筛选出10对多态性高的AFLP引物组合,说明建立的优化体系可用于企鹅珍珠贝的AFLP分析。
关键词：
企鹅珍珠贝 AFLP 反应体系 条件优化
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
马洪双 夏新莉 尹伟伦
以胡杨为研究材料,建立适用于胡杨抗逆研究的cDNA-AFLP反应体系,对影响反应体系的关键因素(RNA提取、内切酶组合、预扩增体系、选择性扩增体系)进行了探索和优化。结果表明:通过改进后的CTAB法能成功获得高质量的RNA;EcoRⅠ/MseⅠ的组合4.5h内将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物直接用于预扩增;稀释10倍的预扩增产物作为模板用于选择性扩增;通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定,经RT-PCR检测,证明优化后的cDNA-AFLP技术差异显示的结果可以准确反映基因在植物体中差异表达的真实情况,并利用该技术成功筛选出42对可以获得带型丰富且重复性好的...
关键词：
胡杨 cDNA-AFLP 抗逆机制
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨清 苏光荣 韩蕾 王正良 孙启祥 彭镇华
用改进的CTAB法,在提取液中加入2%PVP(V/V)和2%β-巯基乙醇,提取到了高质量的基因组DNA,OD260/OD280在1.7～1.9之间,蛋白质、多酚类、色素、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。通过对版纳甜龙竹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程中各关键因素的比较研究,建立了优化的AFLP分子标记体系,得到了清晰的AFLP银染指纹图谱,试验结果重复性好。从64对MseI和PstI引物中筛选出8对扩增效果好的引物,利用筛选出8对引物对30份材料进行分析,共扩增出256条多态性带,获得32490个扩增位点,有13289个位点具有多态性,平均每对引物获得4061.25个扩...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘小俊 李跃建 张知仪 刘独臣 房超 梁根云
利用一对种间可杂交材料印度南瓜P1和中国南瓜P2,成功将中国南瓜丛生性状转入印度南瓜。初步分析表明,该丛生性状在印度南瓜中的形态表现和遗传规律与在中国南瓜中一样;它对印度南瓜的蔓生和半丛生性状呈完全显性关系。获得的丛生印度南瓜材料通过进一步研究和改良,可解决生产上存在的印度南瓜早熟、优质,但单产的问题,也可为丛生印度南瓜育种提供一条新途径。
关键词：
南瓜 丛生性状 种间转育
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