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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
柳晓利 董辉 丛斌 张柱亭 冮爽
为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Taq聚合酶)4水平进行筛选。结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果。同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,M...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
付海滨 丛斌 褚栋
以松毛虫赤眼蜂为试材,研究了单头赤眼蜂DNA的提取方法以及SSR反应体系的的主要成分对SSR扩增结果的影响。结果表明:在20μL PCR反应体系中,Mg2+的最适浓度为2.0mmol.L-1,dNTP的最适浓度为2.0mmol.L-1,引物的最适浓度为0.8μmol.L-1,Taq聚合酶的最适浓度为1.0U。利用此反应体系,对13个松毛虫赤眼蜂地理品系进行SSR反应,用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物,不同品系间DNA谱带多态性丰富。
关键词：
赤眼蜂 简单序列重复 反应体系
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
董辉 柳晓利 钱海涛 丛斌
以松毛虫赤眼蜂为试验材料,对SSCP分子标记体系的电泳条件、温度、变性时间、上样缓冲液等诸多影响因素进行了研究。结果表明:4℃恒温,7W恒功率下,上样缓冲液中不添加甘油、用量为PCR产物体积的0.5~3.5倍,变性温度95℃或98℃,变性时间10~15min,电泳缓冲液为1×TBE,电泳16h,为SSCP分子标记体系最佳的条件组合。
关键词：
赤眼蜂 SSCP 反应体系
[期刊] 林业科学研究
[作者]
赵敏 冯颖 和锐 陈晓鸣 冀焕红
采用CTAB法、改进SDS-蛋白酶K法、SDS-饱和氯化钠法和提取试剂盒对喙尾琵甲的肌肉、虫卵和幼虫进行DNA提取,比较了DNA的提取和保存质量,并对AFLP试验的酶切时间、预扩增产物稀释倍数和选择性扩增引物量等关键因子进行试验和优化。结果表明:4种方法对肌肉组织提取的DNA质量都较好;3种传统方法提取的DNA的保存时间长于试剂盒提取的DNA;使用EcoRⅠ/M seⅠ内切酶组合,10 UEcoRⅠ和2 UM seⅠ分两步各酶切2 h,T4连接酶3 h连接后,以20倍稀释的预扩增产物和5 ng/35 ng的E+3/M+3引物量进行选择性扩增,建立了喙尾琵甲AFLP分子标记体系。
[期刊] 世界农业
[作者]
李宏科
赤●眼●蜂●利●用●研●究●概●况湖南省植物保护研究所李宏科１８３３年，Ｗｅｓｔｗｏｄ以广赤眼蜂（Ｔｒｉｃｈｏｇｒａｍｍａｅｖａｎｅｓｃｅｎｓ）为模式种建立赤眼蜂属，时至今日，赤眼蜂的研究已有１６０余年的历史。赤眼蜂属遍布全球五大洲，是害虫生物防治中...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
潘丽梅 朱建华 秦献泉 彭宏祥 卢美英
应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系(反应总体积20μl):1×Buffer缓冲液(含适量Mg2+),1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70~80 ng/μl,退火温度53~54℃。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨秀梅 瞿素萍 王丽花 崔光芬 彭绿春 王继华
以百合鳞片为材料,采用改良的CTAB法获得了高质量的基因组DNA。通过影响PCR反应各因子的优化,建立了适合百合的RGA-PCR反应体系:25μl体系中含30 ng模板DNA、2.5 mmol/L MgCl2、0.2 mmol/L dNTPs、0.6μmol/L引物及1.5 UTaq酶。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,44℃退火1 min,72℃延伸2 min,40个循环;最后72℃延伸7 min。利用该体系对35个百合品种进行RGA-PCR,表明该反应体系具有较好的稳定性和可靠性。
关键词：
百合 DNA提取 RGA-PCR
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
朱品红 李志辉 杨模华
为建立适宜于赤皮青冈ISSR分析的扩增体系,以赤皮青冈叶片基因组DNA为材料,采用单因素和正交设计相结合的方法系统地测试模板DNA、Mg2+、引物、磷酸碱基脱氧核苷(dNTPs)浓度,Taq DNA聚合酶用量和退火温度这6个因素对ISSR-PCR反应结果的影响。综合分析表明:优化后的最佳反应体系为20μL反应总体系中,含20 ng模板DNA,2.5 mmoL/L Mg2+,0.2 mmoL/L dNTPs,1.0 U Taq DNA聚合酶,0.2μmoL/L引物;UBC 808号作引物最佳退火温度为59.3℃。这一优化体系的建立为进一步开展赤皮青冈遗传多样性的ISSR分析奠定了基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
徐建华 杨虹琦 杨程 周冀衡 段凤云 陈信波 詹莜国 赵世浩
以8个烤烟栽培品种为试验材料,对烟草基因组DNA的提取方法进行比较,并对建立烟草SRAP-PCR反应体系的影响因子设置梯度试验.结果显示:改进的CTAB法能较好地满足烟草基因组DNA的提取,在20μLSRAP-PCR的反应体系中,DNA模板40ng、Mg2+1.5mmol/L、dNTP0.25mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq聚合酶1.5U,8个烤烟品种的扩增多态性高,带型清晰,差异明显.
关键词：
烟草 DNA提取 SRAP 优化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
单丽丽 陆瑞菊 王亦菲 孙月芳 陆惠丽 黄剑华
以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA.电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol/LdNTPs,2.25mmol/LMg2+,1.0μmol/L引物,1.5ng/μL模板DNA.
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨清 苏光荣 韩蕾 王正良 孙启祥 彭镇华
用改进的CTAB法,在提取液中加入2%PVP(V/V)和2%β-巯基乙醇,提取到了高质量的基因组DNA,OD260/OD280在1.7～1.9之间,蛋白质、多酚类、色素、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。通过对版纳甜龙竹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程中各关键因素的比较研究,建立了优化的AFLP分子标记体系,得到了清晰的AFLP银染指纹图谱,试验结果重复性好。从64对MseI和PstI引物中筛选出8对扩增效果好的引物,利用筛选出8对引物对30份材料进行分析,共扩增出256条多态性带,获得32490个扩增位点,有13289个位点具有多态性,平均每对引物获得4061.25个扩...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李元喜 戴华国 姜金林 符文俊 孙智婵
观察研究了以米蛾卵和亚洲玉米螟卵为寄主时 ,玉米螟赤眼蜂 (Trichogrammaostriniae)、拟澳洲赤眼蜂(T confusum)、松毛虫赤眼蜂 (T dendrolimi)等 3种赤眼蜂的寄生发生及羽化情况。结果发现 :以米蛾卵为寄主时 ,3种赤眼蜂的寄生发生率均为 10 0 % ,其中寄生卵粒数、子代蜂数及子代蜂的羽化率以松毛虫赤眼蜂最高 ;蜂的死亡率以玉米螟赤眼蜂最高 ,达 10 4 2 % ,且死于预蛹期以前的蜂所占比例显著高于拟澳洲赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂。以亚洲玉米螟卵为寄主时 ,玉米螟赤眼蜂的寄生发生率和寄生卵粒数显著高于其它两种蜂 ,松毛虫赤眼蜂的寄生发生率显著低于其...
关键词：
亚洲玉米螟 米蛾 赤眼蜂 寄主适合性
[期刊] 林业科学研究
[作者]
郑婷婷 林萍 王开良 姚小华 杨水平
Camellia oleifera is one of the important oil tree species in south China,and C.oleifera industry is quickly developed with the support of the national policies in recent years.The disorder of C.oleifera varieties is one of the key issues restricting the development of C.oleifera industry.Because of...
关键词：
油茶 SRAP 正交设计 体系优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
史红丽 韩明玉 赵彩平
建立适宜桃基因组DNA的SRAP-PCR扩增体系,为桃基因图谱的构建和分子标记打下基础。以桃基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从dNTPs、Mg2+、Taq酶、引物、模板5种因素4个水平对桃SRAP-PCR反应体系进行优化,所建立的体系为25μL:dNTPs为0.12 mmol/L,Mg2+为4 mmol/L,Taq酶2 U,引物为0.3 mmol/L,模板DNA50ng。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性l min,35℃复性l min,72℃延伸l min,5个循环;94℃变性l min,50℃复性l min,72℃延伸l min,35个循环,72℃延伸10 min。
关键词：
桃 SRAP 优化 正交试验
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高丽 杨波
以春兰为材料,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素如模板DNA、dNTPs、MgCl2、primer、TaqDNA聚合酶的浓度及引物退火温度、反应循环数进行了探讨,确立了适合春兰ISSR-PCR分析的最佳反应体系和PCR扩增参数:在15μL反应体系中含1×buffer,0.2 mmol/L dNTPs,2.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L引物,0.3 UTaqDNA聚合酶,20 ng模板DNA。PCR扩增程序:94℃预变性2.5 min;94℃变性45 s,48~58℃退火(退火温度随引物不同而定)45 s,72℃延伸2 min,35个循环;72℃延伸5 min。
关键词：
ISSR 春兰 反应体系 遗传多样性
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