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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
陈晓艺 江帅菲 代剑峰 袁德水 Lisheng Kong 张金凤 赵健
【目的】超低温保存是植物优良种质长期保存的重要方法。本文为探究梯度预处理对超低温保存存活率的影响,以期有效保存华北落叶松胚性组织的发育潜能。【方法】本研究以华北落叶松胚性组织为材料,对超低温冷冻保存程序中预培养、冷冻处理方式、解冻方式和恢复培养等关键环节开展研究。预培养和冷冻保护共设计成4种处理,以不经过预培养和冷冻保护直接冷冻保存为对照,每个处理重复3次。【结果】结果表明:处理组合1、2、3之间虽无显著差异,但结合冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)对细胞具有一定毒害作用,高浓度的DMSO会影响后续胚性组织的恢复甚至造成细胞死亡,因此选出效果较好的超低温保存方法为:0.2、0.4 mol/L山梨醇液体梯度预处理与0.4 mol/L山梨醇+5%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保护,最佳解冻方式为37℃水浴,解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达78%;超低温保存后的胚性组织与正常增殖的胚性组织在外观及显微结构上无明显差异,且低温保存后的愈伤组织仍保持分化形成体细胞胚的能力。【结论】研究结果为华北落叶松乃至其他针叶树胚性组织的超低温保存提供了参考。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
程利红 段旭昌 张宗勤 孙宝胜
【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0℃冷浴静置、25℃室温0.6MPa抽真空和冰浴250W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37℃水浴快速、20℃流动自来水、5℃慢速和25℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑(TTC)还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王秋竹 林丽华 董文轩
研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据。试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验。结果表明:简单玻璃化法保存时,不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5~6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS...
关键词：
月季 茎尖 超低温保存 玻璃化法 存活率
[期刊] 林业科学
[作者]
陈礼光 郑郁善 李庆荣 张祝金
对不同含水量肉桂离体胚进行超低温(LN2)保存,采用不同冷冻方式、解冻方式及防冻剂预处理,并测定超低温保存前后的脱氢酶、电导率、α-淀粉酶生理生化指标。结果表明:超低温保存的技术关键是减少保存材料在脱水过程中所受的伤害,以及采用适宜的冷冻和解冻方式和添加适宜的防冻剂。防冻剂预处理可以适当提高保存含水量,增加含水量范围。肉桂离体胚没有添加防冻剂时最适宜保存含水量为30%~40%(w∶w),采用快冻快解处理。防冻剂预处理后的保存效果比没有防冻剂预处理的更佳,采用缓冻快解或快冻缓解处理较为适宜。
关键词：
肉桂 超低温保存 离体胚 含水量 防冻剂
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张亚利 尚晓倩 刘燕
为满足种质资源保存和交换以及杂交育种工作的需求,花粉超低温保存研究日渐兴起并逐步深入,保存材料从农作物、果树逐渐扩展到药用植物、园林植物等各类植物花粉.花粉超低温保存研究最初主要集中在保存技术方面,随着研究工作的深入和完善,花粉超低温保存机理的研究也逐渐展开,超低温保存花粉效果的评价,也从花粉染色法、离体萌发法,逐渐发展到田间杂交育种的实际应用.该文对20世纪80年代以来成功进行了花粉超低温保存研究的植物材料进行了总结,重点介绍了花粉超低温保存技术程序,同时对保存效果的评价及超低温保存机理的研究进展进行了综述.
关键词：
花粉 超低温保存 种质资源
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘燕 周慧 方标
为了探讨超低温保存技术广泛应用于园林花卉种子保存的可能性 ,对 18个科 47种花卉种子进行了超低温保存研究 .除了 2种花卉种子进入液氮后炸裂外 ,其余 45种花卉种子保存后都有一定发芽率 ,有些花卉种子保存后种子发芽率还高于保存前 .结果表明 ,①超低温保存技术可以广泛应用于园林花卉的种子保存 ;②花卉种子在自然含水量状态即可存于液氮中 ;③从液氮中取出后 ,采用 35～ 40℃温水浴化冻有较高的发芽率 ;④超低温保存对一些花卉种子萌发表现出促进作用
关键词：
超低温保存 种子 园林花卉 种质保存
[期刊] 林业科学
[作者]
郑郁善 陈礼光 李庆荣 林镇斌 吴擢溪
The quality character, the dehydrogenase activities and the α amylase activity of Castanea mollissima conserved materials, including the seeds and the excised embryos, were analyzed for purpose of the feasibility of long term storage associated with cryopreservation. The results showed that mo...
关键词：
板栗 含水量 超低温保存 种子活力
[期刊] 林业科学研究
[作者]
韩登媛 李旦 赵健 李慧 张金凤
以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最...
[期刊] 林业科学
[作者]
徐刚标 李美娥 郑从义 易文
本文对银杏子叶愈伤组织进行了超低温保存研究。结果表明 ,冰冻保护剂、冷冻速度对解冻后材料相对存活率影响较大 ,冻前预培养和预冻至某一温度停留一段时间也较为重要。在含高浓度山梨醇或甘露醇的培养基上预培养 2d的愈伤组织 ,用 10 %二甲基亚砜 +0 .5mol·L- 1 山梨醇作为冰冻保护剂 ,以 1℃·min- 1 速度降温 ,在 - 15℃、- 35℃分别停留 10min和 30min后 ,投入液氮中保存 1d ,细胞相对存活率可达 6 0 %以上。再培养时 ,细胞能恢复生长。
关键词：
银杏 子叶 愈伤组织 超低温保存
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郭玉琼 赖钟雄 吕柳新
采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织...
[期刊] 林业科学
[作者]
翟晓巧 程斐 朱延林
二乔刺槐叶片在添加5mg·mL-16-BA的MS培养基上诱导出愈伤组织。将愈伤组织在冻存液(MS+10%DMSO+0.5mol·L-1蔗糖)中于4℃预冷2h,置入程序降温仪以1℃.min-1的速率降温至-7℃停留1h,再以0.1℃.min-1的冷却速率将样品冷却至-20℃,平衡1h,接下来以0.3℃.min-1的冷却速率将样品冷却至-40℃投入液氮保存,是适宜的降温方法。液氮保存1天后以38℃温水浴解冻。解冻后将愈伤组织用液体培养基(MS+6-BA5mg·mL-1+30g.L-1蔗糖)洗涤后转入恢复培养基暗培养,14天后放于光照下培养。光培养3天后冻后愈伤组织上开始长出新生愈伤组织颗粒,成活率...
关键词：
二乔刺槐 愈伤组织 超低温保存 降温方法
[期刊] 林业科学
[作者]
刘剑锋 阎秀峰 程云清 李霞
高山红景天叶片在附加6-BA2mg·L-1和NAA0.5mg·L-1的改良MS培养基中诱导出愈伤组织,将愈伤组织放入10%DMSO+0.5mol·L-1山梨醇的冰冻保护剂中,4℃冰箱中放置8h,然后以1℃.min-1的降温速度降至-40℃,停留2h后投入液氮保存,在40℃水浴中化冻。冻存后的愈伤组织用液体培养基MS+6-BA2mg·L-1+NAA0.5mg·L-1反复冲洗后,转入固体培养基中进行暗培养,2周后转入光照(2000lx)培养。5周后观察到高山红景天愈伤组织呈鲜绿色,长势较为旺盛,愈伤组织存活率达到75.64%。冻存后的愈伤组织可诱导成苗。
关键词：
高山红景天 愈伤组织 植株再生
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈霜莹 常永健 赵艳华 张浡 刘瑜 章德明
将苹果、梨、桃、李和樱桃等树种的39个品种的花粉干燥至含水量10%～20%,直接投入液氮中(-196℃),经过一段时间保存后,再以40℃水浴快速化冻1min,然后鉴定其生活力和萌发力.结果表明,花粉的生活力没有明显变化,其离体萌发率与新鲜花粉相近.新鲜花粉含水量在60%左右,不宜用于液氮保存.花粉含水量是影响保存效果的关键因子之一,只要花粉含水量适宜,可以多次反复冷冻—化冻,生活力不受影响.此项技术可用于果树花粉的长期保存.
关键词：
超低温保存种质 花粉 果树
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
熊兴耀 李炎林
超低温保存是目前木本植物长期保存的理想方法。综述国内外超低温保存技术在木本植物种质资源保存方面的应用现状和超低温条件下的低温伤害及细胞超微结构改变,阐述超低温保存技术的发展及各类超低温保存技术的优缺点和影响因素,指出广谱适用性问题、保存方法的可重复性问题和可操作性问题、投入产出问题是影响超低温保存技术推广应用的主要问题,认为扩大超低温保存木本植物资源的种类、根据植物种类和外植体类型发展相应的超低温保存技术、根据保存目的合理选取保存材料及其保存方法、优先发展经济优势物种的保存技术、增加财政投入以研发新型超低温保存技术是解决上述问题的重要途径。
关键词：
木本植物 种质资源 超低温保存 低温伤害
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴永杰 赵艳华 周明德
苹果金冠品种的休眠茎尖经３种不同方法（玻璃化法、包埋－干燥法和两步降温法）超低温保存后，均获得成功，存活率达到了８３％。休眠茎尖由于经受了冬季的深冷驯化和具有较低的含水量，因而成为超低温保存的良好试材。经过玻璃化液（ＰＶＳ３：５０％甘油＋５０％蔗糖）预处理８０ｍｉｎ（２５℃条件下）后或经蔗糖溶液预培养并于无菌空气中干燥脱水至含水量３０％左右后，休眠茎尖可直接投入液氮进行超低温保存。保存后的休眠茎尖经离体培养后可直接再生植株。试验进一步验证了试材生理状态的选择是超低温保存成功的一个关键因素，这不仅可以简化超低温保存的程序，而且可以提高此方法的实用性，为早日建立植物种质的超低温保存库奠定了基础。
关键词：
苹果,休眠茎尖,超低温
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