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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
孙宇轩 张梦倩 李璐 魏敏 徐文腾
动物中普遍存在性别生长二态性，这种现象在海水鱼中更为明显。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼，雌性个体的生长速度比雄性快2～4倍。本研究旨在探究rimoc1基因在半滑舌鳎雌雄鱼中的表达差异及与性别和生长的关系。实时定量和原位杂交结果显示，rimoc1在雄性组织中未检测到表达，而在雌性组织中表达量最高的是卵巢和肌肉，在卵巢中表达相对稳定，在1.5和3 yph的水平有所增加。在细胞系中通过siRNA干扰敲除rimoc1后，发现生长相关基因igf1、性别分化相关基因sox9b和foxl2的表达水平显著降低，而sox9a的表达升高。启动子活性分析显示，rimoc1启动子可能受到C/EBPdelta、Sox2和c-Jun等转录因子的调控。我们推测，rimoc1可能在半滑舌鳎的性别分化和生长中发挥重要作用，这为深入研究半滑舌鳎的性别生长二态性提供了基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张梦倩 崔忠凯 陈张帆 徐文腾 陈松林
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长具有明显的性别二态性，性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼。鱼体肌肉占体重的40%～60%，肌肉生长是生长性状的核心，而myostatin (mstn)基因是肌肉生长发育的负调控因子，对成肌细胞的增殖具有抑制作用。本研究旨在探究肌肉生长发育过程中，mstn基因在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式及其与雌、雄鱼生长差异的关系。结果显示，在所检测的1龄鱼的9个组织中，mstn在肌肉中的表达量最高。不同发育时期的肌肉组织定量结果显示，1龄和2龄雄鱼中的表达量显著高于雌鱼(P<0.05)，而在选取的其他时期，雌、雄鱼之间的表达量不存在显著差异。原位杂交结果显示，mstn基因的表达位置在肌纤维边缘，即成肌细胞增殖分化的位置。本研究系统研究了肌肉生长发育的负调控因子mstn在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式，为深入研究半滑舌鳎雌雄生长差异的原因及其机制提供了基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳淑芳 马骞 马慧 孙中之 柳学周 庄志猛
为研究半滑舌鳎雌雄个体大小和生长速度差异悬殊的分子机理,采集来自同一亲本、同一发育阶段的半滑舌鳎雄鱼和雌鱼脑垂体,分别与Affymetrix的斑马鱼基因芯片杂交,筛选差异表达基因。芯片杂交结果显示二者共有1 051个基因检测到明显的杂交信号,其中上调基因486个,下调基因561个。进一步比较雄鱼和雌鱼杂交信号的比值(Ratio值),有39个基因的Ratio值小于0.6或大于1.5,其中sh3gl1b、meis2.1、acta1、Noxa、slc25a5这5种上调基因和col1a2、klf7、acta2这3种下调基因可能与半滑舌鳎雌雄生长差异相关。这一结果为深入研究半滑舌鳎雌雄性别分化与生长调控...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 庄志猛 柳淑芳 唐启升
Dorsalin-1是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族成员,在调控脊椎动物神经系统的发育中具有重要作用。目前,国内外有关脊椎动物Dorsalin-1的研究报道十分有限。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Dorsalin-1-like基因的cDNA序列,并分析了Dorsalin-1-like mRNA在半滑舌鳎成鱼的组织表达差异及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果表明,半滑舌鳎Dorsalin-1-like基因cDNA全长为1 961 bp,包括了153 bp的5′非翻译区(5′UTR)、编码419个氨...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
邓思平 陈松林
在脊椎动物中,许多基因参与了性腺的分化和性别的决定过程,Doublesex and mab-3-related transcription factor1(Dmrt1)编码了一个具有DM框的转录因子,在哺乳类、鸟类、两栖类、爬行类和鱼类中与雄性性腺的分化和形成有关,是一种目前已知从无脊椎动物到人最保守的性别分化相关基因。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2~3倍,为了探索半滑舌鳎的性别决定机理,培育全雌苗种,实现单性养殖,本研究采用同源克隆策略,从半滑舌鳎精巢中获得Dmrt1α cDNA全长1149bp,其中包...
关键词：
半滑舌鳎 Dmrt1α cDNA 克隆
[期刊] 水产学报
[作者]
李虎 陈四清 刘海金 姜宏波 王美玉
为研究半滑舌鳎养殖群体幼鱼阶段的性比变化,实验用分子标记法鉴定半滑舌鳎遗传性别,用组织切片方法鉴定表型性别,并比较了表型雌雄的生长差异。结果发现,在半滑舌鳎幼鱼阶段,在遗传性别上,雌雄所占比例约为1∶1,差异不显著(P>0.05)。在表型性别上,雌雄比例约为1∶3,差异极显著(P
关键词：
半滑舌鳎 性比 形态差异 伪雄鱼
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王天姿 王娜 胡乔木 邵长伟 陈松林
CSW3基因序列来源于半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组测序项目,是经过筛选得到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因CSW3的表达与应用,构建了半滑舌鳎雌性特异CSW3基因重组表达载体,通过大肠杆菌进行了体外重组表达,对基因表达产物进行分离纯化,并通过蛋白转染的方法研究了纯化的蛋白对几个性别相关基因的影响。结果显示,雌性特异CSW3重组蛋白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺foxl2、sox9a、amh这3种性别相关基因的表达水平具有显著影响,能够引起雌性相关基因foxl2表达上调、雄性相关基因sox9a和amh表达下降。从蛋白水平对雌性相关基因CSW3...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王天姿 王娜 胡乔木 邵长伟 陈松林
ＣＳＷ３基因序列来源于半滑舌鳎（ＣｙｎｏｇｌｏＳＳｕＳ ＳｅｍｉｌａｅｖｉＳ）全基因组测序项目，是经过筛选得到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因ＣＳＷ３的表达与应用，构建了半滑舌鳎雌性特异ＣＳＷ３基因重组表达载体，通过大肠杆菌进行了体外重组表达，对基因表达产物进行分离纯化，并通过蛋白转染的方法研究了纯化的蛋白对几个性别相关基因的影响。结果显示，雌性特异ＣＳＷ３重组蛋白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺ｆｏｘｌ２、Ｓｏｘ９ａ、ａｍｈ这３种性别相关基因的表达水平具有显著影响，能够引起雌性相关基因ｆｏｘｌ２表达上调、雄性相关基因Ｓｏｘ９ａ和ａｍｈ表达下降。从蛋白水平对雌性相关基因ＣＳＷ３．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈燕 樊琳 刘田田 刘跃中 李赞 张全启
本研究通过同源克隆和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)和转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)的c DNA全长,并分析了其在不同组织和早期胚胎发育时期的表达情况。结果表明,TRAF6 c DNA全长1956 bp,开放阅读框(ORF)为1731 bp,编码576个氨基酸。二级结构预测显示TRAF6具有保守的蛋白结构域:N端...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江 李晓妮 常亚青 王滨
运用同源克隆和ＲＡＣＥ方法获得了半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）孕酮受体膜组分１（ＰｇＲｍＣ１）的Ｃ ＤｎＡ全长序列，生物信息学分析显示，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１ Ｃ ＤｎＡ序列全长１３３５ ｂＰ，开放阅读框长５４６ ｂＰ；其编码的蛋白是单次跨膜蛋白，在ｎ端１３～３５位氨基酸残基处有一个跨膜区域。半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１氨基酸序列与青鳉（ｏＲｙｚｉＡｓ ｌＡｔｉＰＥｓ）相似性最高，达到了８２．９％；与青斑河鲀（ｔＥｔＲＡｏＤｏｎ ｎｉｇＲｏｖｉＲｉＤｉｓ）相似度为８１．２％。系统进化分析表明，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１与鳉形目和鲀形目鱼类ＰｇＲｍＣ１聚为一个分支。采用实时荧光定量Ｒｔ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张红 陈松林 刘洋 温海深 朱颖
从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组序列中获得肿瘤抑制基因WT1a的部分序列,然后利用RACE技术克隆了WT1a基因的全长,运用组织学方法,对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察,并分析了该阶段WT1a的表达特征。克隆结果显示,WT1a基因cDNA全长为1 886 bp,开放阅读框(ORF)长为1 470 bp,编码490个氨基酸,并且包含KTS三肽,5′-UTR和3′-UTR分别长为245 bp和171 bp。在ORF末端发现2个微卫星(SSR)序列和2个跨膜螺旋区域,而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示,WT1a基因的保守性很高,与人的同源性高...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡乔木 王凯琳 陈松林
通过分析半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Dmrt1重组蛋白注射卵巢后基因表达调控,探讨Dmrt1在半滑舌鳎性别决定与分化中的功能。实验利用原核表达系统(Pet-32a)对半滑舌鳎Dmrt1基因进行重组表达,并通过亲和层析纯化获得了重组目的蛋白(Pet-32-dmrt1)。重组蛋白注射卵巢后实时定量PCR分析结果显示,Cyp19a和Foxl2在6~24 h内两基因表达量均显著下调,Sox9a基因表达量在6~24 h内有显著上调,但48 h后3个基因的表达量逐渐恢复正常表达水平。研究结果证实,Dmrt1重组蛋白具有生物活性,且对性别相关基因表达调控具有一定的影响,在性别决定...
[期刊] 水产学报
[作者]
朱颖 孟亮 胡乔木 王晓夏 常亚青 陈松林
利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 柳淑芳 庄志猛 唐启升
根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSG...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘万军 张丽燕 邵长伟 王凯琳 齐茜 陈松林 温海深
生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(growth arrest and DNA damage inducible protein 45,Gadd45)基因在胚胎发育和性别决定中起重要作用。本研究通过RACE方法在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到了1个Gadd45g同源基因,命名为Gadd45g3。该基因全长1 147 bp,编码155个氨基酸残基。氨基酸序列分析表明,半滑舌鳎Gadd45g3与其他鱼类Gadd45g-like的同源性为79%~88%,与硬骨鱼和高等脊椎动物的Gadd45g同源性为58%~67%。对多个物种的Gadd45g同源基因的CDS区进行Ka...
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