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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙衍旭 龚小玲 邵长伟
为探究dnmt3a基因在半滑舌鳎性逆转过程中的调控作用，开发适用于半滑舌鳎的DNA甲基化编辑系统，克隆了半滑舌鳎dnmt3a基因的CDS区序列，并通过生物信息学分析其结构域特点以及进化过程中的保守性，利用qPCR分析了其在半滑舌鳎不同性别中的表达模式，探究了DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-dC处理对dnmt3a基因表达的影响。结果表明，dnmt3a基因全长3063bp，编码1020个氨基酸，包括三个核心结构域（PWWP结构域、ADDz结构域和AdoMet＿MTases超家族），dnmt3a基因结合结构域（PWWP结构域、ADDz结构域）相对保守，催化活性结构域（AdoMet＿MTases超家族）与哺乳动物和爬行动物有较大差异。基因表达模式分析表明，雌性半滑舌鳎性腺组织dnmt3a基因表达量显著高于雄性和伪雄性。5-Aza-dC处理后，dnmt3a基因表达显著升高。本研究表明dnmt3a基因在DNA 甲基化调控半滑舌鳎性别决定与分化过程中发挥重要作用，为阐明半滑舌鳎性逆转机制和实现半滑舌鳎单基因靶向DNA 甲基化编辑提供参考。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
林梦娇 陈亚东 刘洋 王磊 张天时 史萌 陈松林
为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)vstm2a基因响应细菌感染的表达特征和其蛋白功能。本研究采用实时荧光定量(RT-qPCR)检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染半滑舌鳎后免疫组织(鳃、肝脏、脾脏、肠道和肾脏)中vstm2a的相对表达特征；构建vstm2a基因原核表达重组质粒，获得重组蛋白，采用牛津杯法、细菌蛋白结合实验和siRNA沉默等，探究vstm2a蛋白在细菌入侵中的功能。结果显示：vstm2a蛋白具有跨膜结构域和Ig结构域，在细胞表面行使功能；相关免疫组织中的vstm2a基因的表达量在哈维氏弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌和无乳链球菌感染半滑舌鳎后6 h、48 h和72 h显著升高；vstm2a重组蛋白与细菌孵育后，经过低速离心与细菌共同沉淀；抑菌实验显示其显著抑制细菌的生长，并且siRNA降低vstm2a基因后，抑制了细胞因子IL-6和IL-10等基因的表达。本研究证明了vstm2a蛋白响应细菌入侵，可以识别和结合细菌，通过抑制细菌生长和激活促炎症细胞因子，对病原菌的侵染起到免疫防御作用，是一种重要的免疫蛋白。本研究有助于解析细菌粘附细胞或鱼体抵抗细菌入侵的机制，为未来的采用分子手段选育抗性品种提供一定的理论基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈学杰 陈亚东 于孟君 孙璐明 杨光 沙珍霞
ＲａｓＧＲＰ３（Ｒａｓ Ｇｕａｎｙｌ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ＲｅｌｅａｓｉｎＧ ＰＲｏｔｅｉｎ ３）是一种鸟苷酸交换蛋白，差异表达的Ｒａｓ ＧＲＰ３蛋白在疾病发生和固有免疫中发挥着重要作用。为了探究半滑舌鳎（ｃｙｎｏＧｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｒａｓ ＧＲＰ３基因组成、组织表达及免疫应答特征，根据本实验室半滑舌鳎转录组数据获得的部分Ｒａｓ ＧＲＰ３序列，采用Ｒａｃｅ（ＲａＰｉｄ－ａｍＰｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ ｄｎａ ｅｎｄｓ）技术，克隆了Ｒａｓ ＧＲＰ３基因的全长，将测序结果进行氨基酸序列比对和同源性分析：半滑舌鳎Ｒａｓ ＧＲＰ３基因全长２７５６ ｂＰ，ｏＲｆ（ｏＰｅｎ Ｒｅ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张梦倩 崔忠凯 陈张帆 徐文腾 陈松林
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长具有明显的性别二态性，性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼。鱼体肌肉占体重的40%～60%，肌肉生长是生长性状的核心，而myostatin (mstn)基因是肌肉生长发育的负调控因子，对成肌细胞的增殖具有抑制作用。本研究旨在探究肌肉生长发育过程中，mstn基因在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式及其与雌、雄鱼生长差异的关系。结果显示，在所检测的1龄鱼的9个组织中，mstn在肌肉中的表达量最高。不同发育时期的肌肉组织定量结果显示，1龄和2龄雄鱼中的表达量显著高于雌鱼(P<0.05)，而在选取的其他时期，雌、雄鱼之间的表达量不存在显著差异。原位杂交结果显示，mstn基因的表达位置在肌纤维边缘，即成肌细胞增殖分化的位置。本研究系统研究了肌肉生长发育的负调控因子mstn在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式，为深入研究半滑舌鳎雌雄生长差异的原因及其机制提供了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
李仰真 陈松林 邢贺飞 吴娅红 孙何军 王晓夏 李仲明 邵长伟
通过建立半滑舌鳎家系对其白化现象进行了初步研究。实验共建立半滑舌鳎家系17个,首先对这17个家系白化率进行了抽样统计和方差分析,并对部分家系的白化个体的眼睛异常率进行了统计;其次,选取其中白化率较高的4个家系,对白化个体和正常个体的生长情况进行了对比;最后,对白化率较高的4个家系白化个体和正常个体的抗鳗弧菌病能力进行了比较。结果发现,不同家系个体白化率有较大的差别,3号家系白化率最高,高达94.50%,15号、33号和37号家系白化率为0.00%;父本为养殖群体的家系的平均白化率最高,为19.68%,父本为野生群体的家系的平均白化率最低,为3.21%,父本为选育群体的平均白化率为7.50%,但...
关键词：
半滑舌鳎 白化 家系 鳗弧菌
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘万军 张丽燕 邵长伟 王凯琳 齐茜 陈松林 温海深
生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(growth arrest and DNA damage inducible protein 45,Gadd45)基因在胚胎发育和性别决定中起重要作用。本研究通过RACE方法在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到了1个Gadd45g同源基因,命名为Gadd45g3。该基因全长1 147 bp,编码155个氨基酸残基。氨基酸序列分析表明,半滑舌鳎Gadd45g3与其他鱼类Gadd45g-like的同源性为79%~88%,与硬骨鱼和高等脊椎动物的Gadd45g同源性为58%~67%。对多个物种的Gadd45g同源基因的CDS区进行Ka...
[期刊] 水产学报
[作者]
董晓丽 陈松林 季相山
同源克隆了半滑舌鳎Dmrt3基因的部分cDNA片段,片段长度为228bp,NJ系统发育树显示,半滑舌鳎Dmrt3基因cDNA片段与红鳍东方鲀、青鳉以及斑马鱼的Dmrt3基因cDNA片段同源性最高,首先聚为一支。实时定量分析了Dmrt3基因在半滑舌鳎雌性和雄性个体的各组织中的表达情况,以及在高温处理和甲基睾酮处理组的雌性、雄性和伪雄鱼的性腺组织中的表达。Dmrt3基因在雌性和雄性的脑、垂体、性腺、肝脏、脾脏、心脏、肾脏7个组织中都有表达,但是表达量有差异,在精巢中的相对表达量高,Dmrt3基因在精巢的表达与其它组织中的表达差异极显著(P<0.01),而在卵巢中的表达很微弱,结果预示Dmrt3基因...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
位战飞 郭华 李海龙 郑卫卫 王文文 戴欢 朱颖 刘洋 董忠典 陈松林
本研究通过ＲＡＣＥ技术在半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）中克隆得到１个ＣＤ４０同源基因。该基因Ｃ ＤｎＡ全长为２０９８ ｂｐ，开放阅读框为１０１１ ｂｐ，可编码由３３６个氨基酸组成的蛋白质。推导得到的ＣＤ４０氨基酸序列包含１个信号肽、１个跨膜结构区、２个ｎ－糖基化位点以及含４个富含半胱氨酸的保守结构区。不同物种氨基酸序列同源分析结果显示，该基因与哺乳类、两栖类以及硬骨鱼类相似性为２８％～４７％，其中与硬骨鱼类相似性较高。系统进化分析结果显示，半滑舌鳎ＣＤ４０与其他硬骨鱼类ＣＤ４０聚类为一支，哺乳类与两栖类ＣＤ４０聚类为另一支。荧光定量ｐＣＲ结果显示，ＣＤ４０在健康半滑舌．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
扶晓琴 王娜 王佳林 陈松林 赵法箴
颗粒酶(granzyme， Gzm) B是免疫炎症反应必不可少的介质，可激活半胱天冬酶3，进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列，并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示，CsGzmBl cDNA全长为923 bp，开放阅读框长度为780 bp，编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列)，5′非编码区为49 bp，3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守，由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示，CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达，其中，在脾脏中表达量最高，头肾、中肾、肝脏和鳃中次之，在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比，CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。这些结果表明，CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳淑芳 马骞 马慧 孙中之 柳学周 庄志猛
为研究半滑舌鳎雌雄个体大小和生长速度差异悬殊的分子机理,采集来自同一亲本、同一发育阶段的半滑舌鳎雄鱼和雌鱼脑垂体,分别与Affymetrix的斑马鱼基因芯片杂交,筛选差异表达基因。芯片杂交结果显示二者共有1 051个基因检测到明显的杂交信号,其中上调基因486个,下调基因561个。进一步比较雄鱼和雌鱼杂交信号的比值(Ratio值),有39个基因的Ratio值小于0.6或大于1.5,其中sh3gl1b、meis2.1、acta1、Noxa、slc25a5这5种上调基因和col1a2、klf7、acta2这3种下调基因可能与半滑舌鳎雌雄生长差异相关。这一结果为深入研究半滑舌鳎雌雄性别分化与生长调控...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李文龙 陈松林 季相山 谢明树 徐营 邓寒
采用静水压法处理半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)受精卵以抑制其卵裂并进行染色体加倍,筛选出有效的静水压处理起始时间、处理强度及其持续时间。结果表明,孵化水温(23±0.2)℃时,授精后21.5 min,采用40 MPa的静水压压力,休克处理4.5 min,四倍体诱导效果最好,鱼苗四倍体率达到68.3%。采用流式细胞仪分析了四倍体鱼苗细胞DNA含量,表明四倍体鱼苗细胞DNA含量为二倍体对照鱼苗的2倍。通过染色体制作分析表明四倍体鱼苗的染色体数为84条,而二倍体对照鱼苗的染色体数为42条。本研究采用静水压方法,在国内外首次建立了半滑舌鳎四倍体诱导方法。本项技术的建立旨在为...
关键词：
半滑舌鳎 四倍体 人工诱导 静水压
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙建华 鲍宝龙
对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行了测序调查，在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中，发现其中3个突变位点与体色白化存在显著性相关，进一步通过扩大样本验证，显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关（P0.05），而在无眼侧皮肤中的表达明显高于有眼侧皮肤（P<0.01）。在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧色素部分和非色素部分的表达水平均显著高于无眼侧（P<0.01）。此外，白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧（P<0.05），有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧白色皮肤（P<0.01），首次鉴定出与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点，为今后半滑舌鳎的体色选育提供了分子基础。
关键词：
半滑舌鳎 体色异常 白化 突变位点
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙建华 鲍宝龙
对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行测序调查，在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中发现3个突变位点与体色白化存在显著性相关，进一步通过扩大样本验证，显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关，酪氨酸酶第473的G/A位点(tyr-473-G/A)和花生四烯酸5-脂氧合酶的第1 178位的C/T位点(alox5-1178-C/T)与体色白化呈显著性相关。这3个突变位点分别位于蛋白Periplasmic＿Binding＿Protein＿type1、Tyosinase C-terminal和Lipoxygenase结构域。qRT-PCR检测表明：ertB在白化半滑舌鳎中有眼侧正常和白化皮肤表达没有显著差异，而在无眼侧皮肤的表达显著高于有眼侧皮肤；在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧正常和白化皮肤的表达水平均显著高于无眼侧；白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧，有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧正常皮肤。这些与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点可为今后半滑舌鳎的体色选育提供分子基础。
关键词：
半滑舌鳎 体色异常 白化 突变位点
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 庄志猛 柳淑芳 唐启升
Dorsalin-1是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族成员,在调控脊椎动物神经系统的发育中具有重要作用。目前,国内外有关脊椎动物Dorsalin-1的研究报道十分有限。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Dorsalin-1-like基因的cDNA序列,并分析了Dorsalin-1-like mRNA在半滑舌鳎成鱼的组织表达差异及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果表明,半滑舌鳎Dorsalin-1-like基因cDNA全长为1 961 bp,包括了153 bp的5′非翻译区(5′UTR)、编码419个氨...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
关健 柳学周 马学坤 孙中之 马甡
采用Winkler法对75d(0.2～0.3g)和35d(0.02～0.03g)的半滑舌鳎幼鱼进行了在不同温度(17、20、23℃)、不同盐度(20、25、30、35)下的耗氧率和窒息点测定。结果表明,75d组的相对耗氧率低于35d组;在同一体重组,盐度一定时,耗氧率取决于温度,即温度增高,耗氧率增大。而温度一定时,所测4个试验组中,盐度25时耗氧率最低,盐度20、30稍高,盐度35最高。75d组的窒息点高于35d组,高温度组窒息点较高,盐度25和30组的窒息点高于20和35组。
关键词：
半滑舌鳎 幼鱼 耗氧率 窒息点
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