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[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈学杰 陈亚东 于孟君 孙璐明 杨光 沙珍霞
ＲａｓＧＲＰ３（Ｒａｓ Ｇｕａｎｙｌ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ＲｅｌｅａｓｉｎＧ ＰＲｏｔｅｉｎ ３）是一种鸟苷酸交换蛋白，差异表达的Ｒａｓ ＧＲＰ３蛋白在疾病发生和固有免疫中发挥着重要作用。为了探究半滑舌鳎（ｃｙｎｏＧｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｒａｓ ＧＲＰ３基因组成、组织表达及免疫应答特征，根据本实验室半滑舌鳎转录组数据获得的部分Ｒａｓ ＧＲＰ３序列，采用Ｒａｃｅ（ＲａＰｉｄ－ａｍＰｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ ｄｎａ ｅｎｄｓ）技术，克隆了Ｒａｓ ＧＲＰ３基因的全长，将测序结果进行氨基酸序列比对和同源性分析：半滑舌鳎Ｒａｓ ＧＲＰ３基因全长２７５６ ｂＰ，ｏＲｆ（ｏＰｅｎ Ｒｅ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于孟君 孙璐明 陈亚东 陈学杰 杨光 刘洋 仇雪梅 沙珍霞
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AP-1家族转录因子c-Jun基因(Jun proto-oncogene)及其在免疫应答中的作用尚无报道。本研究根据半滑舌鳎转录组数据库中预测的c-Jun序列,通过RACE技术和PCR扩增方法获得了半滑舌鳎c-Jun基因c DNA全长2093 bp,CDS区域共981 bp,编码326个氨基酸,5'UTR区域377 bp,3'UTR区域735 bp。SMART分析显示,C-JUN蛋白具有2个结构域:AP-1家族典型结构域Jun,以及高度保守的亮氨酸拉
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李坤明 徐文腾 扶晓琴 陈松林
蛋白激酶C(PKC)广泛参与哺乳动物T、B淋巴细胞涉及的免疫反应并发挥重要作用,然而PKC在鱼类免疫过程中的作用却少有报道。本研究在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆了PKC家族的典型成员PKCα(命名为CsPKCα),并进行了分子特征和表达模式分析。CsPKCα的cDNA全长为2315 bp,其中,开放阅读框(ORF)为2013 bp。qRT-PCR分析显示,CsPKCα在各个组织中广泛表达,其中,在鳃、肝脏、皮肤和肠中具有较高的转录水平,表明CsPKCα可能在免疫过程中发挥作用。随后检测了CsPKCα在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后6种免疫相关组织(鳃、肝脏、皮肤、肠、脾脏和肾)中不同时间点的表达水平,发现细菌侵染后24 h或48 h,CsPKCα在鳃、肾脏、皮肤和脾脏中显著上调,侵染后12 h在肝中有显著性下调。研究表明,CsPKCα可能在应对哈维氏弧菌的免疫应答中发挥作用,但是否参与病原菌侵染的巨噬细胞激活以及与T、B细胞相关的信号通路还需要进一步研究。这是关于PKCα参与鱼类细菌性免疫反应的首次报道。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
位战飞 郭华 李海龙 郑卫卫 王文文 戴欢 朱颖 刘洋 董忠典 陈松林
本研究通过ＲＡＣＥ技术在半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）中克隆得到１个ＣＤ４０同源基因。该基因Ｃ ＤｎＡ全长为２０９８ ｂｐ，开放阅读框为１０１１ ｂｐ，可编码由３３６个氨基酸组成的蛋白质。推导得到的ＣＤ４０氨基酸序列包含１个信号肽、１个跨膜结构区、２个ｎ－糖基化位点以及含４个富含半胱氨酸的保守结构区。不同物种氨基酸序列同源分析结果显示，该基因与哺乳类、两栖类以及硬骨鱼类相似性为２８％～４７％，其中与硬骨鱼类相似性较高。系统进化分析结果显示，半滑舌鳎ＣＤ４０与其他硬骨鱼类ＣＤ４０聚类为一支，哺乳类与两栖类ＣＤ４０聚类为另一支。荧光定量ｐＣＲ结果显示，ＣＤ４０在健康半滑舌．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王双艳 王磊 陈张帆 崔忠凯 周茜 陈松林
本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘万军 张丽燕 邵长伟 王凯琳 齐茜 陈松林 温海深
生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(growth arrest and DNA damage inducible protein 45,Gadd45)基因在胚胎发育和性别决定中起重要作用。本研究通过RACE方法在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到了1个Gadd45g同源基因,命名为Gadd45g3。该基因全长1 147 bp,编码155个氨基酸残基。氨基酸序列分析表明,半滑舌鳎Gadd45g3与其他鱼类Gadd45g-like的同源性为79%~88%,与硬骨鱼和高等脊椎动物的Gadd45g同源性为58%~67%。对多个物种的Gadd45g同源基因的CDS区进行Ka...
[期刊] 水产学报
[作者]
董晓丽 陈松林 季相山
同源克隆了半滑舌鳎Dmrt3基因的部分cDNA片段,片段长度为228bp,NJ系统发育树显示,半滑舌鳎Dmrt3基因cDNA片段与红鳍东方鲀、青鳉以及斑马鱼的Dmrt3基因cDNA片段同源性最高,首先聚为一支。实时定量分析了Dmrt3基因在半滑舌鳎雌性和雄性个体的各组织中的表达情况,以及在高温处理和甲基睾酮处理组的雌性、雄性和伪雄鱼的性腺组织中的表达。Dmrt3基因在雌性和雄性的脑、垂体、性腺、肝脏、脾脏、心脏、肾脏7个组织中都有表达,但是表达量有差异,在精巢中的相对表达量高,Dmrt3基因在精巢的表达与其它组织中的表达差异极显著(P<0.01),而在卵巢中的表达很微弱,结果预示Dmrt3基因...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
扶晓琴 王娜 王佳林 陈松林 赵法箴
颗粒酶(granzyme， Gzm) B是免疫炎症反应必不可少的介质，可激活半胱天冬酶3，进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列，并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示，CsGzmBl cDNA全长为923 bp，开放阅读框长度为780 bp，编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列)，5′非编码区为49 bp，3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守，由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示，CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达，其中，在脾脏中表达量最高，头肾、中肾、肝脏和鳃中次之，在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比，CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。这些结果表明，CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱颖 孟亮 胡乔木 王晓夏 常亚青 陈松林
利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘万建 史成银 宋展 耿伟光 李赟 黄倢
本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和607bp的3′-UTR。CsIRF-7 cDNA编码一个由433个氨基酸残基组成的多肽。氨基酸序列比对结果表明,CsIRF-7多肽与脊椎动物IRF-7相似,存在高度保守的3个结构域:DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、干扰素相关区(IRF associated domain,IAD)和丝氨酸富含区(S...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘姗姗 张静 陈松林
为研究HIRA基因在半滑舌鳎胚胎发育中的作用及其组织差异表达,以半滑舌鳎为研究对象,采用同源克隆策略从其精巢中分离了长度为764bp的HIRA部分cDNA序列,该片段编码254个氨基酸,具有5个WD结构域。对氨基酸进行比较发现,半滑舌鳎HIRA与比较物种的氨基酸序列具有很高的同源性,与红鳍东方鲀亲缘关系最近。实时定量PCR分析发现,HIRA mRNA在多细胞期到原肠胚期的表达量较高,表明HIRA对胚胎发育起重要作用;HIRA在不同组织中表达差异显著,其中在性腺中表达最高,推测HIRA在维持性腺的功能方面有一定作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
齐茜 董忠典 张宁 邵长伟 贾晓东 温海深 陈松林
通过ＲＡＣＥ方法获得半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）ＨＨ基因家族的ｓＨＨ基因，该基因全长１ ９２２ ｂｐ，其中５′ｕＴＲ ２６６ ｂｐ，３′ｕＴＲ ３６０ ｂｐ，ｏＲＦ１ ２９６ ｂｐ，编码４３１个氨基酸，经预测该多肽的相对分子质量为４７．２８ ｋ Ｄ，理论等电点６．９５，具有ＨＨ基因家族特有的保守结构域。氨基酸序列分析表明，半滑舌鳎ｓＨＨ与牙鲆的同源性最高，为８２％，与其他鱼类同源性为７４％～８１％，与非洲爪蟾的同源性为６１％，与人和鼠的同源性为６３％～６４％。甲基化结果显示，ｓＨＨ基因在１龄卵巢中的甲基化程度普遍低于雄鱼与伪雄鱼精巢。基因表达分析显示，ｓＨＨ基因在胚．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
邢贺飞 高峰涛 张永珍 董忠典 陈松林
天然抗性相关巨噬细胞蛋白（Ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｓｉｓｔａＮｃｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｒｏｔｅｉＮ，Ｎｒａｍｐ）属于膜整合转运蛋白，具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎（ｃｙＮｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｎｒａｍｐ基因进行了克隆和表达分析，并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性（ｓｉＮｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｓＮｐ）位点进行了筛选。该基因ｃ ｄＮａ序列全长３７１７ ｂｐ，其中开放阅读框（ｏｐｅＮ ｒｅａｄｉＮｇ ｆｒａｍｅ，ｏｒｆ）１６７７ ｂｐ，所编码蛋白含有５５８个氨基酸，该蛋白具有Ｎｒ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈燕 樊琳 刘田田 刘跃中 李赞 张全启
本研究通过同源克隆和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)和转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)的c DNA全长,并分析了其在不同组织和早期胚胎发育时期的表达情况。结果表明,TRAF6 c DNA全长1956 bp,开放阅读框(ORF)为1731 bp,编码576个氨基酸。二级结构预测显示TRAF6具有保守的蛋白结构域:N端...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
沙珍霞 王娜 王启龙 徐田军 王磊 董晓丽 陈松林
髓样分化因子(Myeloid differentiation factor88,MyD88)是Toll/IL-lR家族成员,是TLR信号通路中的一个关键接头分子,在天然免疫系统中具有重要作用。迄今,在重要海水养殖鱼类半滑舌鳎中尚未见有关MyD88的研究报道。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)MyD88基因,并对其表达模式进行了初步研究。半滑舌鳎MyD88基因的cDNA全长为1612bp,其中包括132bp的5′非翻译区(UTR),590bp的3′UTR和编码285个氨基酸残基的858bp的开放阅读框(ORF)。MyD88蛋白在N端具有死亡结构域(Death D...
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