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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张志华 冯博 朱腾飞 郝先才 王倩 邵长伟 王洪岩
本研究以重要的海水养殖鱼类半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象，克隆了其白细胞介素12 (IL-12)的p35a亚基和p40c亚基的基因编码区序列，编码区长度分别为651 bp和984 bp。系统进化树分析显示，半滑舌鳎的p35a和p40c分别与其他鱼类对应的基因聚为一支。氨基酸同源性分析显示，p35a与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)相似性最高，p40c与三棘刺鱼(Gasterosteus aculeatus)相似性最高，分别为52.04%和48.67%。组织表达分析显示，p35a在鳃、脑、心和卵巢中表达量较高，p40c在肝、脾、鳃和心中表达量较高。通过哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染实验，分析了半滑舌鳎p35a、p40c及其相关基因(ifn-γ和il-10)在哈维氏弧菌感染过程中的表达模式，p35a在脾中，48 h表达显著上升(P
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
林梦娇 陈亚东 刘洋 王磊 张天时 史萌 陈松林
为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)vstm2a基因响应细菌感染的表达特征和其蛋白功能。本研究采用实时荧光定量(RT-qPCR)检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染半滑舌鳎后免疫组织(鳃、肝脏、脾脏、肠道和肾脏)中vstm2a的相对表达特征；构建vstm2a基因原核表达重组质粒，获得重组蛋白，采用牛津杯法、细菌蛋白结合实验和siRNA沉默等，探究vstm2a蛋白在细菌入侵中的功能。结果显示：vstm2a蛋白具有跨膜结构域和Ig结构域，在细胞表面行使功能；相关免疫组织中的vstm2a基因的表达量在哈维氏弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌和无乳链球菌感染半滑舌鳎后6 h、48 h和72 h显著升高；vstm2a重组蛋白与细菌孵育后，经过低速离心与细菌共同沉淀；抑菌实验显示其显著抑制细菌的生长，并且siRNA降低vstm2a基因后，抑制了细胞因子IL-6和IL-10等基因的表达。本研究证明了vstm2a蛋白响应细菌入侵，可以识别和结合细菌，通过抑制细菌生长和激活促炎症细胞因子，对病原菌的侵染起到免疫防御作用，是一种重要的免疫蛋白。本研究有助于解析细菌粘附细胞或鱼体抵抗细菌入侵的机制，为未来的采用分子手段选育抗性品种提供一定的理论基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓晓 柳学周 史宝 徐永江 王珊珊 刘芝亮 王妍妍
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基(CGα)全长cDNA(GenBank序列登录号:JQ364953)。半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽。半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点。CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60%~70%,与鲤形目鱼类CGα同源性为55%~60%。实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGαmRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史学营 徐永江 武宁宁 柳学周 杨洪军 臧坤 史宝 李存玉
为认识养殖半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞学特性，利用显微观察方法研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞的形态特征，比较了３种色素细胞在有眼侧皮肤、无眼侧正常和黑化皮肤中的数量分布特征。为进一步揭示无眼侧黑化的分子机制，克隆了半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列。结果显示，黑色素细胞较大，含黑色和棕色的色素颗粒，有树突状分枝不明显和延伸成放射状两种形态；黄色素细胞较小，含黄色素颗粒；虹彩细胞最小，含鸟粪素颗粒。半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列长９１０ ｂＰ，包括一个１１４ ｂＰ的５＇非翻译区和一个１５４ ｂＰ的３＇非翻译区，开放阅读框长度为６４２ ｂＰ，共编码２１３个氨基酸，包含ＡＣＴＨ、α．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史学营 徐永江 武宁宁 柳学周 杨洪军 臧坤 史宝 李存玉
为认识养殖半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞学特性,利用显微观察方法研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞的形态特征,比较了3种色素细胞在有眼侧皮肤、无眼侧正常和黑化皮肤中的数量分布特征。为进一步揭示无眼侧黑化的分子机制,克隆了半滑舌鳎POMC基因的c DNA序列。结果显示,黑色素细胞较大,含黑色和棕色的色素颗粒,有树突状分枝不明显和延伸成放射状两种形态;黄色素细胞较小,含黄色素颗粒;虹彩细胞最小,含鸟粪素颗粒。半滑舌鳎POMC基因的c DNA序列长910 bp,包括一个114 bp的5'非翻译区和一个154 bp的3'非翻译区,开放阅读框长度为642 bp,共编码213个氨基酸,包含ACTH、α...
[期刊] 水产学报
[作者]
李斌 徐永江 柳学周 史宝 王滨 朱学武
为了在蛋白水平上认识半滑舌鳎食欲素Ａ（ｏｒｅｘｉｎ Ａ）的摄食调控作用及机制，利用原核表达载体ｐｅＴ３２Ａ成功构建了重组半滑舌鳎ｏｒｅｘｉｎ Ａ／ｐｅＴ３２Ａ质粒，转化至大肠杆菌ＢＬ２１后经ｉｐＴＧ诱导获得了ｎ端含６个组氨酸的半滑舌鳎ｏｒｅｘｉｎＡ重组蛋白。获得的重组蛋白大小为２４．９ ｋｕ，３２℃下用１．０ ｍｍｏＬ／Ｌ的ｉｐＴＧ诱导６ ｈ目的蛋白表达量最高，占菌体总蛋白的５２．８％，并主要分泌在上清液中。ＷｅｓＴｅｒｎ ＢＬｏＴＴｉｎＧ免疫印迹表明，获得的ｏｒｅｘｉｎ Ａ重组蛋白可被６×ｈｉｓ抗体特异性识别。ｎｉ～（２＋）－ｎＴＡ亲和层析柱纯化获得了高纯度的半滑舌鳎ｏｒｅｘｉｎ Ａ重组蛋白．．．
关键词：
半滑舌鳎 食欲素 原核表达 生物活性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王秋金 肖国强 滕爽爽
泥蚶(Tegillarca granosa)作为我国常见的滩涂养殖贝类，具有较高的经济价值。以弧菌为代表的条件致病菌一直以来是困扰双壳贝类健康养殖的一大难题。为了探讨泥蚶感染弧菌过程中,c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)介导的激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)先天免疫防御通路的作用及机制,本研究采用PCR技术克隆了泥蚶JNK基因(TgJNK)的c DNA序列,并对TgJNK和TgAP-1在弧菌感染下的表达和调控关系进行了分析。结果显示, TgJNK基因c DNA全长2696 bp,开放阅读框1332 bp,编码了443个氨基酸;蛋白多重比较和邻近系统发育树分析表明, TgJNK相对保守,存在一个STKc-JNK结构域,与长牡蛎(Crassostrea gigas)和紫贻贝(Mytilus edulis)的同源相似度较高。q RT-PCR和WB结果表明TgJNK在泥蚶的鳃中表达最高。哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）的浸泡感染可显著上调TgJNK的转录水平(P
[期刊] 水产学报
[作者]
李明云 苗亮 郭晓飞 聂力 侯红红 陈炯
为了解香鱼白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的序列特征、系统发育及其与鳗利斯顿氏菌侵染的相关性,实验采用RACE-PCR方法扩增出香鱼IL-17C基因c DNA序列,并通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测了鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼各组织中IL-17C基因的表达变化。结果显示,香鱼IL-17C基因c DNA序列全长1 087 bp,含534 bp的开放阅读框,在3′端非编码区存在7个m RNA不稳定信号(ATTTA)。预测该基因编码177个氨基酸,N端19个氨基酸为信号肽
[期刊] 中国水产科学
[作者]
沙珍霞 王娜 王启龙 徐田军 王磊 董晓丽 陈松林
髓样分化因子(Myeloid differentiation factor88,MyD88)是Toll/IL-lR家族成员,是TLR信号通路中的一个关键接头分子,在天然免疫系统中具有重要作用。迄今,在重要海水养殖鱼类半滑舌鳎中尚未见有关MyD88的研究报道。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)MyD88基因,并对其表达模式进行了初步研究。半滑舌鳎MyD88基因的cDNA全长为1612bp,其中包括132bp的5′非翻译区(UTR),590bp的3′UTR和编码285个氨基酸残基的858bp的开放阅读框(ORF)。MyD88蛋白在N端具有死亡结构域(Death D...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
扶晓琴 王娜 王佳林 陈松林 赵法箴
颗粒酶(granzyme， Gzm) B是免疫炎症反应必不可少的介质，可激活半胱天冬酶3，进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列，并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示，CsGzmBl cDNA全长为923 bp，开放阅读框长度为780 bp，编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列)，5′非编码区为49 bp，3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守，由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示，CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达，其中，在脾脏中表达量最高，头肾、中肾、肝脏和鳃中次之，在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比，CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。这些结果表明，CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
陈彩芳 温海深
利用已克隆得到的半滑舌鳎P450c17-I和P450c17-Ⅱ基因cDNA全长序列,通过半定量RT-PCR技术,结合雄鱼性腺发育期、各发育期血清中睾酮(T)含量,研究了这两个基因在雄性半滑舌鳎各组织内的空间表达及在雄鱼繁殖周期中的季节性表达。结果表明,半滑舌鳎P450c17-I组织分布具有广泛性,在精巢、胃、肠、心、脾和脑内都有表达,而P450c17-II组织分布具有特异性,仅在精巢和头肾内有表达。在精巢不同发育期内,P450c17-I表达与性腺发育呈正相关,而P450c17-II表达模式则相反。推测这可能是由于在整个繁殖期,P450c17-I基因在转录水平或转录后调控半滑舌鳎性类固醇激素的生...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江
采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1(PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P<0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用。PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
戴欢 刘洋 王文文 位战飞 高进 高峰涛 李祥孔 刘洋 陈松林
为了筛选出与抗哈维氏弧菌病相关的微卫星标记并进行QTL定位,以2014年感染实验中存活率为52.22%的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)家系F1412(Family+年份+家系号)为材料,采用混合分离子分析法(bulked segregant analysis,BSA)对169个微卫星标记(SSR)进行筛选,得到1个可能与哈维氏弧菌病相关的微卫星标记scaffold479_23523。用scaffold479_23523所在的连锁群LG18上的37个SSR对94尾抗病、感病个体进行
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘姗姗 孙冰 梁卓 张静 陈松林
本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AMH基因并对其进行表达分析。该基因cDNA序列开放阅读框长为1 563 bp,编码蛋白含520个氨基酸。该蛋白含有TGF-β超家族的特征序列,包含1个AMH-N区域和TGF-β结构域,并在C端生物活性区含有9个保守的半胱氨酸残基。系统进化分析表明,半滑舌鳎AMH和所有鱼类AMH聚为一簇,与鲽形目相似性最高。实时定量结果表明,AMH基因在半滑舌鳎不同组织中有差异表达,在正常雄鱼和伪雄鱼性腺中表达量最高。胚后不同时期性腺的实时定量结果表明,性腺分化之前AMH在精巢中相对表达量较低,70 dph(days post hatchin...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
邱丽华 冯娟 江世贵 张汉华 宋林生
采用同源克隆和锚定PCR技术,从军曹鱼(RachycentroncanadiumLinnaeus)中克隆到白细胞介素1β(interleukin 1β)基因cDNA的全序列。军曹鱼IL 1β的cDNA全长1104bp,3′非编码区域(UTR)为255bp,5′UTR为108bp,开放阅读框(ORF)为741bp,编码246个氨基酸,分子量大约为27 68kD,理论等电点为5 71。同源性分析表明,该序列与其他鱼类甚至哺乳动物的IL 1β基因具有很高的相似性,并含有白细胞介素家族的签名序列(signature)。同时,利用RT PCR技术,对特异性病原刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行初步研究,...
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