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[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 史宝 李晓晓 徐永江 王珊珊 李晓妮
为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)人工育苗技术水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(m PR-like)基因进行研究。采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,获得全长为2 002 bp的半滑舌鳎新型膜孕激素受体的c DNA序列;二级结构分析表明,该蛋白存在7个跨膜区域;三级结构分析表明该蛋白有多个结合位点。使用MEGA4.0临位相联法和Clustal X方法对m PR-like的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析,发现半滑舌鳎m PR-like与青鳉(Oryzias latipes)和三刺鱼(Gasterosteus aculeayus)的...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史宝 柳学周 徐涛 李晓妮 徐永江 张金勇
为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析mPRL mRNA在繁殖相关组织的细胞学定位,发现mPRL mRNA分布在半滑舌鳎性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑的神经元和垂体内分散的细胞中,mPRL mR
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓妮 柳学周 史宝 徐永江 张金勇
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史宝 李晓晓 柳学周 徐永江 王珊珊 刘芝亮 王妍妍
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
柳学周 徐永江 刘乃真 曲建忠 倪娜 赵明
采用组织学方法系统研究了人工养殖条件下半滑舌鳎亲鱼卵巢的组织发育周年变化特征。结果表明,卵母细胞发育可分为6个时相,卵巢发育分为6期。卵巢不同发育时期都由不同类型的卵母细胞组成,半滑舌鳎为非同步分批多次产卵类型。周年发育过程中,6月龄前的鱼卵巢发育处于第Ⅰ期;9～12月龄卵巢可发育至第Ⅱ期;12月龄半滑舌鳎性腺可发育达到Ⅲ期,并一直保持至24月龄。3龄雌鱼达到性成熟,卵巢可发育至第Ⅳ期;随着水温和光周期的调控,卵巢发育进入成熟期(Ⅴ期),发生水合现象是卵母细胞成熟并准备排卵的信号;产卵结束后卵巢退化至第Ⅵ期,排出的卵母细胞退化吸收,以Ⅲ期卵巢越冬后,卵巢退化至Ⅱ期并持续至下一个繁殖周期。人工养...
关键词：
半滑舌鳎 卵巢发育 组织学
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江
采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1(PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P<0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用。PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料。
[期刊] 水产学报
[作者]
陈浩 吴旭干 刘智俊 成永旭
为探讨三疣梭子蟹卵巢发育过程中孕激素受体(progestin receptor,PR)的调控作用,采用免疫印迹和免疫组化方法,首次对三疣梭子蟹卵巢、肝胰腺、大颚器、Y器官、视神经节和胸神经团中的PR进行免疫识别和定位,并系统研究了卵巢发育期间PR在这些器官中的分布和变化。结果表明:(1)三疣梭子蟹视神经节中存在PR阳性条带,分子量为100 ku;(2)PR仅在早期(Ⅰ～Ⅲ期)生殖细胞胞质和后期(Ⅲ～Ⅴ期)细胞核呈强阳性,但在各期滤泡细胞中始终呈强阳性;(3)PR阳性主要存在于Ⅰ～Ⅴ期肝胰腺F细胞和Ⅲ期R细胞核中,其余肝胰腺细胞中均无PR阳性;(4)大颚器腺细胞中的PR阳性仅发现于Ⅳ期腺细胞胞质...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
晏科文 马晓东 史宝 程汉良 王重女 赵新宇
为阐明生物钟相关基因在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的作用及机制，采集性成熟半滑舌鳎不同发育期的卵巢组织提取总RNA，通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对5个核心生物钟基因Clock1a、Bmal1a、Cry1a、Cry2和Per2的编码区(CDS)序列进行克隆和序列分析。结果显示，Clock1a的CDS序列编码712个氨基酸，序列中有功能性结构域PASD1和PAS11。Bmal1a的CDS序列编码626个氨基酸构成，序列中有功能性结构域PASD3和PAS11。Cry1a和Cry2的CDS序列分别编码631个、669个氨基酸，序列中均有功能性结构域FAD7。Per2的CDS序列编码1 415个氨基酸，序列中有功能性结构域PeriodC和PAS11。通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析5个生物钟基因mRNA在性成熟半滑舌鳎卵巢不同发育期的表达特性，发现5个生物钟基因存在性腺发育周年表达规律，且在卵巢Ⅱ期和Ⅲ期相对高表达(P<0.05)，在卵巢Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期相对低表达，这说明生物钟基因对半滑舌鳎的卵巢发育成熟起到重要的调节作用。研究结果为进一步探究生物钟基因调控半滑舌鳎卵巢发育成熟的机制提供了重要参考，为提高半滑舌鳎的繁育效率提供了理论基础。
关键词：
生物钟基因 半滑舌鳎 卵巢 周年表达规律
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 柳淑芳 庄志猛 唐启升
根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSG...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 柳学周 石莹 王滨 史宝 张凯 蓝功岗
为深入认识半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生殖调控机制,研究了生长轴(GH/IGF-Ⅰaxis)对半滑舌鳎卵巢发育调控的作用及可能机制;分析了卵巢不同发育时期垂体中的生长激素(GH),脑、性腺和肝脏中的类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的表达水平变化;检测了卵巢不同发育期,血清GH、IGF-Ⅰ、雌二醇(E2)、睾酮(T)的表达水平变化,并分析了生长因子与性腺指数(GSI)、E2和T表达变化的关系。结果显示,垂体GH mRNA表达水平在Ⅳ期卵巢时显著升高,至Ⅴ期时达峰值,随后(
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
马学坤 柳学周 温海深 孙中之 徐永江
对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis Günther)早期发育过程中体表色素的分布及形态变化进行了连续观察,测量其生物学特征,同时拍摄不同发育时期体表黑色素的形态变化。在水温22～23℃,盐度31～33的条件下,半滑舌鳎完成早期变态发育约需要30d,1～15日龄主要是器官发育,16日龄进入变态期,30日龄左右变态完成。半滑舌鳎在原肠期开始出现幼体色素,以后逐渐密集,色素颗粒变大,幼体色素逐渐变成以树枝状和菊花状为主;仔鱼期体表的幼体色素对称分布,在躯干部形成相互间隔的5个色素带;在变态前期幼体色素发生至最发达时期。进入变态期后,幼体色素逐渐减少,同时有眼侧出现颗粒较小的成体色...
关键词：
半滑舌鳎 早期发育 色素变化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江 李晓妮 常亚青 王滨
运用同源克隆和ＲＡＣＥ方法获得了半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）孕酮受体膜组分１（ＰｇＲｍＣ１）的Ｃ ＤｎＡ全长序列，生物信息学分析显示，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１ Ｃ ＤｎＡ序列全长１３３５ ｂＰ，开放阅读框长５４６ ｂＰ；其编码的蛋白是单次跨膜蛋白，在ｎ端１３～３５位氨基酸残基处有一个跨膜区域。半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１氨基酸序列与青鳉（ｏＲｙｚｉＡｓ ｌＡｔｉＰＥｓ）相似性最高，达到了８２．９％；与青斑河鲀（ｔＥｔＲＡｏＤｏｎ ｎｉｇＲｏｖｉＲｉＤｉｓ）相似度为８１．２％。系统进化分析表明，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１与鳉形目和鲀形目鱼类ＰｇＲｍＣ１聚为一个分支。采用实时荧光定量Ｒｔ．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
陈晓燕 温海深 何峰 李吉方 陈彩芳 张葭人 金国雄 史宝 史丹 杨艳平
通过简并引物扩增及RACE技术,首次克隆了半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因cDNA全长序列。该基因全长3105bp,编码704个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TMhelix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。该基因编码区共有19个Ser,4个Thr和5个Tyr磷酸化位点;3个潜在的N基端糖基化位点,分别是62NISS,226NGIK和356NSTS;441T为潜在的PKC位点。基酸序列比对结果表明,半滑舌鳎FSHR含有GpHR家族的特殊信号序列,如82CCAF,481ERW,594FTD和667NPFLY,含有10个LRRs(LRR1-10)。组织表达分析表明,FSHR表达广泛,...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赖晓健 洪万树
许多研究发现某些孕激素受体介导的生物学反应较迅速,而经典的通过基因起作用的孕激素核受体介导的生物学反应都较慢,因此有学者提出生物体可能存在不通过基因起作用的孕激素受体,并研究了其结构和功能,探讨了其快速反应的机制。迄今为止,在鱼类已发现了3类可能的非基因作用的膜受体。第1类为孕激素脂联素受体家族(PAQR)的3个成员,即PAQR7(mPRα),PAQR8(mPRβ)和PAQR5(mPRγ),这些成员存在于多种硬骨鱼类中,具有和G蛋白偶联受体(GPCRs)相似的7次跨膜结构域。其中对mPRα和mPRβ的研究较多,它们可以诱导鱼类卵母细胞成熟和增强鱼类精子的活动性。第2类为孕酮受体膜组成部分(PG...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杜伟 蒙子宁 薛志勇 姜言伟 庄志猛 万瑞景
2002年8～9月在山东莱州明波水产公司养鱼场,半滑舌鳎(CynoglossussemilaevisG櫣nther,1873)亲鱼经人工诱导催熟,在亲鱼培养池中雌、雄个体同时排卵、排精并完成了自然授精。卵子受精后,对受精卵进行连续的取样,在NikonSMZ-10双筒解剖镜下观察胚胎发育的全过程。培养水温20.5～21.6℃,盐度33.50,pH7.8～8.6,受精卵1h30min细胞开始分裂,4h5min为多细胞期,5h0min为囊胚期,22h20min胚孔关闭,40h20min仔鱼开始孵出。根据本次实验以及1982年、1987年、1989年和2002年8月进行的半滑舌鳎人工孵化实验结果,应用...
关键词：
半滑舌鳎 胚胎发育 发育阈温度 有效积温
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