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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王珊珊 柳学周 史宝 温海深 徐永江 李晓晓 刘芝亮 王妍妍
从半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis Günther脑垂体中提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术首次克隆得到半滑舌鳎促滤泡激素(FSH)基因全长cDNA序列。半滑舌鳎FSH cDNA全长为541bp,开放阅读框为393bp,编码130个氨基酸(GenBank序列登录号:JQ277933)。发现一个N-糖基化位点:24~27NTT。与其他脊椎动物的FSH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明,半滑舌鳎FSH与鲽形目和鲈形目鱼类FSH同源性为42%~49%,与鲤形目和高等脊椎动物FSH同源性为27%~31%。用MEGA 4.0软件构建了NJ树,获得的进化树表明,半滑舌鳎FSH与其...
[期刊] 水产学报
[作者]
陈晓燕 温海深 何峰 李吉方 陈彩芳 张葭人 金国雄 史宝 史丹 杨艳平
通过简并引物扩增及RACE技术,首次克隆了半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因cDNA全长序列。该基因全长3105bp,编码704个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TMhelix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。该基因编码区共有19个Ser,4个Thr和5个Tyr磷酸化位点;3个潜在的N基端糖基化位点,分别是62NISS,226NGIK和356NSTS;441T为潜在的PKC位点。基酸序列比对结果表明,半滑舌鳎FSHR含有GpHR家族的特殊信号序列,如82CCAF,481ERW,594FTD和667NPFLY,含有10个LRRs(LRR1-10)。组织表达分析表明,FSHR表达广泛,...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘万建 史成银 宋展 耿伟光 李赟 黄倢
本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和607bp的3′-UTR。CsIRF-7 cDNA编码一个由433个氨基酸残基组成的多肽。氨基酸序列比对结果表明,CsIRF-7多肽与脊椎动物IRF-7相似,存在高度保守的3个结构域:DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、干扰素相关区(IRF associated domain,IAD)和丝氨酸富含区(S...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓晓 柳学周 史宝 徐永江 王珊珊 刘芝亮 王妍妍
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基(CGα)全长cDNA(GenBank序列登录号:JQ364953)。半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽。半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点。CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60%~70%,与鲤形目鱼类CGα同源性为55%~60%。实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGαmRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘姗姗 孙冰 梁卓 张静 陈松林
本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AMH基因并对其进行表达分析。该基因cDNA序列开放阅读框长为1 563 bp,编码蛋白含520个氨基酸。该蛋白含有TGF-β超家族的特征序列,包含1个AMH-N区域和TGF-β结构域,并在C端生物活性区含有9个保守的半胱氨酸残基。系统进化分析表明,半滑舌鳎AMH和所有鱼类AMH聚为一簇,与鲽形目相似性最高。实时定量结果表明,AMH基因在半滑舌鳎不同组织中有差异表达,在正常雄鱼和伪雄鱼性腺中表达量最高。胚后不同时期性腺的实时定量结果表明,性腺分化之前AMH在精巢中相对表达量较低,70 dph(days post hatchin...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史宝 李晓晓 柳学周 徐永江 王珊珊 刘芝亮 王妍妍
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘姗姗 张静 陈松林
为研究HIRA基因在半滑舌鳎胚胎发育中的作用及其组织差异表达,以半滑舌鳎为研究对象,采用同源克隆策略从其精巢中分离了长度为764bp的HIRA部分cDNA序列,该片段编码254个氨基酸,具有5个WD结构域。对氨基酸进行比较发现,半滑舌鳎HIRA与比较物种的氨基酸序列具有很高的同源性,与红鳍东方鲀亲缘关系最近。实时定量PCR分析发现,HIRA mRNA在多细胞期到原肠胚期的表达量较高,表明HIRA对胚胎发育起重要作用;HIRA在不同组织中表达差异显著,其中在性腺中表达最高,推测HIRA在维持性腺的功能方面有一定作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
董晓丽 陈松林 季相山
同源克隆了半滑舌鳎Dmrt3基因的部分cDNA片段,片段长度为228bp,NJ系统发育树显示,半滑舌鳎Dmrt3基因cDNA片段与红鳍东方鲀、青鳉以及斑马鱼的Dmrt3基因cDNA片段同源性最高,首先聚为一支。实时定量分析了Dmrt3基因在半滑舌鳎雌性和雄性个体的各组织中的表达情况,以及在高温处理和甲基睾酮处理组的雌性、雄性和伪雄鱼的性腺组织中的表达。Dmrt3基因在雌性和雄性的脑、垂体、性腺、肝脏、脾脏、心脏、肾脏7个组织中都有表达,但是表达量有差异,在精巢中的相对表达量高,Dmrt3基因在精巢的表达与其它组织中的表达差异极显著(P<0.01),而在卵巢中的表达很微弱,结果预示Dmrt3基因...
[期刊] 水产学报
[作者]
朱颖 孟亮 胡乔木 王晓夏 常亚青 陈松林
利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 朱学武 柳学周 史学营 史宝 王滨 李斌
为研究黑色素富集激素基因(MCH)表达调控与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)无眼侧黑化性状的关系,通过分子克隆获得了半滑舌鳎pMCH2,通过NCBI获得了pMCH1 cDNA序列,分析了pMCH mRNA的组织表达特性,探索了脑垂体和皮肤中的p MCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系。结果显示,pMCH1 cDNA序列长476 bp,编码134个氨基酸,与鲽形目、鲤形目和鲈形目鱼类的pMCH1氨基酸聚为1个进化分支。pMCH2 cDNA序列全长为626 bp,编码147个氨基酸
[期刊] 中国水产科学
[作者]
邓思平 陈松林
在脊椎动物中,许多基因参与了性腺的分化和性别的决定过程,Doublesex and mab-3-related transcription factor1(Dmrt1)编码了一个具有DM框的转录因子,在哺乳类、鸟类、两栖类、爬行类和鱼类中与雄性性腺的分化和形成有关,是一种目前已知从无脊椎动物到人最保守的性别分化相关基因。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2~3倍,为了探索半滑舌鳎的性别决定机理,培育全雌苗种,实现单性养殖,本研究采用同源克隆策略,从半滑舌鳎精巢中获得Dmrt1α cDNA全长1149bp,其中包...
关键词：
半滑舌鳎 Dmrt1α cDNA 克隆
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘万军 张丽燕 邵长伟 王凯琳 齐茜 陈松林 温海深
生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(growth arrest and DNA damage inducible protein 45,Gadd45)基因在胚胎发育和性别决定中起重要作用。本研究通过RACE方法在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到了1个Gadd45g同源基因,命名为Gadd45g3。该基因全长1 147 bp,编码155个氨基酸残基。氨基酸序列分析表明,半滑舌鳎Gadd45g3与其他鱼类Gadd45g-like的同源性为79%~88%,与硬骨鱼和高等脊椎动物的Gadd45g同源性为58%~67%。对多个物种的Gadd45g同源基因的CDS区进行Ka...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
齐茜 董忠典 张宁 邵长伟 贾晓东 温海深 陈松林
通过ＲＡＣＥ方法获得半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）ＨＨ基因家族的ｓＨＨ基因，该基因全长１ ９２２ ｂｐ，其中５′ｕＴＲ ２６６ ｂｐ，３′ｕＴＲ ３６０ ｂｐ，ｏＲＦ１ ２９６ ｂｐ，编码４３１个氨基酸，经预测该多肽的相对分子质量为４７．２８ ｋ Ｄ，理论等电点６．９５，具有ＨＨ基因家族特有的保守结构域。氨基酸序列分析表明，半滑舌鳎ｓＨＨ与牙鲆的同源性最高，为８２％，与其他鱼类同源性为７４％～８１％，与非洲爪蟾的同源性为６１％，与人和鼠的同源性为６３％～６４％。甲基化结果显示，ｓＨＨ基因在１龄卵巢中的甲基化程度普遍低于雄鱼与伪雄鱼精巢。基因表达分析显示，ｓＨＨ基因在胚．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
邢贺飞 高峰涛 张永珍 董忠典 陈松林
天然抗性相关巨噬细胞蛋白（Ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｓｉｓｔａＮｃｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｒｏｔｅｉＮ，Ｎｒａｍｐ）属于膜整合转运蛋白，具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎（ｃｙＮｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｎｒａｍｐ基因进行了克隆和表达分析，并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性（ｓｉＮｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｓＮｐ）位点进行了筛选。该基因ｃ ｄＮａ序列全长３７１７ ｂｐ，其中开放阅读框（ｏｐｅＮ ｒｅａｄｉＮｇ ｆｒａｍｅ，ｏｒｆ）１６７７ ｂｐ，所编码蛋白含有５５８个氨基酸，该蛋白具有Ｎｒ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
扶晓琴 王娜 王佳林 陈松林 赵法箴
颗粒酶(granzyme， Gzm) B是免疫炎症反应必不可少的介质，可激活半胱天冬酶3，进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列，并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示，CsGzmBl cDNA全长为923 bp，开放阅读框长度为780 bp，编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列)，5′非编码区为49 bp，3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守，由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示，CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达，其中，在脾脏中表达量最高，头肾、中肾、肝脏和鳃中次之，在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比，CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。这些结果表明，CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。
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