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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于孟君 孙璐明 陈亚东 陈学杰 杨光 刘洋 仇雪梅 沙珍霞
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AP-1家族转录因子c-Jun基因(Jun proto-oncogene)及其在免疫应答中的作用尚无报道。本研究根据半滑舌鳎转录组数据库中预测的c-Jun序列,通过RACE技术和PCR扩增方法获得了半滑舌鳎c-Jun基因c DNA全长2093 bp,CDS区域共981 bp,编码326个氨基酸,5'UTR区域377 bp,3'UTR区域735 bp。SMART分析显示,C-JUN蛋白具有2个结构域:AP-1家族典型结构域Jun,以及高度保守的亮氨酸拉
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
邢贺飞 高峰涛 张永珍 董忠典 陈松林
天然抗性相关巨噬细胞蛋白（Ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｓｉｓｔａＮｃｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｒｏｔｅｉＮ，Ｎｒａｍｐ）属于膜整合转运蛋白，具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎（ｃｙＮｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｎｒａｍｐ基因进行了克隆和表达分析，并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性（ｓｉＮｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｓＮｐ）位点进行了筛选。该基因ｃ ｄＮａ序列全长３７１７ ｂｐ，其中开放阅读框（ｏｐｅＮ ｒｅａｄｉＮｇ ｆｒａｍｅ，ｏｒｆ）１６７７ ｂｐ，所编码蛋白含有５５８个氨基酸，该蛋白具有Ｎｒ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
颜慧 曾艳 公光业 陈亚东 陈松林 刘洋 沙珍霞
microRNA(mi RNA)是一类内源性、长度约为22个核苷酸的非编码小单链RNA分子,由具有发夹结构的70-90个碱基的单链RNA前体经过Dicer酶加工而成。本研究使用荧光实时定量PCR(Quantitative Real-Time PCR,q RT-PCR)方法,研究了mi RNA-223(mi R-223)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)各健康组织、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后各时间点的免疫组织以及不同病原类似物刺激后头肾细胞中的表达模式。结果显示,mi R-223在半滑舌鳎各组织中均有表达,在头肾中表达量最高,在脑和血液中的表达量...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李斌 柳学周 徐永江 史宝 朱学武
采用解剖学、组织切片、电镜观察和2种染色技术研究了半滑舌鳎(Cynoglossus semilavis)消化道的组织结构特征。半滑舌鳎消化道可分为口咽腔、食道、食道胃、前肠、后肠5部分,观察了各部分消化道的显微和超微结构,测定了消化道各部分的黏膜褶皱数、黏膜褶皱高度、肌肉层(纵肌和环肌)厚度、黏液细胞相对密度等指标。结果显示,半滑舌鳎不具备结构特征明显的胃,摄食后,食道后部与肠道连接部形成一个囊状膨大结构,称之为食道胃;食道前部开始出现杯状黏液细胞,整个食道以Ⅲ型黏液细胞为主,食道胃中黏液细胞以Ⅲ型为主,
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈学杰 陈亚东 于孟君 孙璐明 杨光 沙珍霞
ＲａｓＧＲＰ３（Ｒａｓ Ｇｕａｎｙｌ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ＲｅｌｅａｓｉｎＧ ＰＲｏｔｅｉｎ ３）是一种鸟苷酸交换蛋白，差异表达的Ｒａｓ ＧＲＰ３蛋白在疾病发生和固有免疫中发挥着重要作用。为了探究半滑舌鳎（ｃｙｎｏＧｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）Ｒａｓ ＧＲＰ３基因组成、组织表达及免疫应答特征，根据本实验室半滑舌鳎转录组数据获得的部分Ｒａｓ ＧＲＰ３序列，采用Ｒａｃｅ（ＲａＰｉｄ－ａｍＰｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ ｄｎａ ｅｎｄｓ）技术，克隆了Ｒａｓ ＧＲＰ３基因的全长，将测序结果进行氨基酸序列比对和同源性分析：半滑舌鳎Ｒａｓ ＧＲＰ３基因全长２７５６ ｂＰ，ｏＲｆ（ｏＰｅｎ Ｒｅ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
高进 马佳璐 刘洋 邵长伟 贾晓东 陈松林
Ｓｏｘ（ＳＲＹ－Ｒｅｌａｔｅｄ ＨＭＧ－ｂｏｘ）基因家族是在动物体内发现的一类编码转录因子的基因家族，广泛参与了动物生长发育、理化反应，特别是性别决定和分化等过程。本研究采用生物信息学方法，利用Ｓｏｘ基因高度保守的ＨＭＧ－ｂｏｘ区序列作为种子序列，检索半滑舌鳎（ＣＹｎｏＧｌｏＳＳｕＳ ＳｅＭｉｌａｅｖｉＳ）基因组注释的蛋白数据库，共鉴定分离出２３个Ｓｏｘ基因。并在全基因组水平对半滑舌鳎Ｓｏｘ基因家族进行了保守结构域序列、进化、基因结构、染色体定位及基因表达模式的系统分析。结果显示，通过保守结构域分析发现了半滑舌鳎Ｓｏｘ基因家族除ＣＳｅ Ｓｏｘ３２外，皆存在一段９个氨基酸残基（ＲＰＭｎａＦＭｖＷ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李坤明 徐文腾 扶晓琴 陈松林
蛋白激酶C(PKC)广泛参与哺乳动物T、B淋巴细胞涉及的免疫反应并发挥重要作用,然而PKC在鱼类免疫过程中的作用却少有报道。本研究在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆了PKC家族的典型成员PKCα(命名为CsPKCα),并进行了分子特征和表达模式分析。CsPKCα的cDNA全长为2315 bp,其中,开放阅读框(ORF)为2013 bp。qRT-PCR分析显示,CsPKCα在各个组织中广泛表达,其中,在鳃、肝脏、皮肤和肠中具有较高的转录水平,表明CsPKCα可能在免疫过程中发挥作用。随后检测了CsPKCα在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后6种免疫相关组织(鳃、肝脏、皮肤、肠、脾脏和肾)中不同时间点的表达水平,发现细菌侵染后24 h或48 h,CsPKCα在鳃、肾脏、皮肤和脾脏中显著上调,侵染后12 h在肝中有显著性下调。研究表明,CsPKCα可能在应对哈维氏弧菌的免疫应答中发挥作用,但是否参与病原菌侵染的巨噬细胞激活以及与T、B细胞相关的信号通路还需要进一步研究。这是关于PKCα参与鱼类细菌性免疫反应的首次报道。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 朱学武 柳学周 史学营 史宝 王滨 李斌
为研究黑色素富集激素基因(MCH)表达调控与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)无眼侧黑化性状的关系,通过分子克隆获得了半滑舌鳎pMCH2,通过NCBI获得了pMCH1 cDNA序列,分析了pMCH mRNA的组织表达特性,探索了脑垂体和皮肤中的p MCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系。结果显示,pMCH1 cDNA序列长476 bp,编码134个氨基酸,与鲽形目、鲤形目和鲈形目鱼类的pMCH1氨基酸聚为1个进化分支。pMCH2 cDNA序列全长为626 bp,编码147个氨基酸
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 柳学周 张凯 武宁宁 刘芝亮 李春广
为在蛋白水平认识半滑舌鳎类胰岛素生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）的生理功能，将ＩＧＦ－Ⅱ成熟肽序列克隆到原核表达载体ｐ ＥＴ－２８ａ中，成功构建了重组半滑舌鳎ＩＧＦ－Ⅱ／ｐ ＥＴ２８ａ质粒，导入到Ｅ．ｃｏｌＩ Ｂｌ２１（ＤＥ３）菌株后经ＩｐＴＧ诱导，获得了大小为１１．４ ｋ Ｄａ的重组ＩＧＦ－Ⅱ蛋白，Ｎ端含６个组氨酸，可特异性地被６×ＨＩｓ抗体识别。重组ＩＧＦ－Ⅱ蛋白在最优诱导条件３７℃诱导２ Ｈ，目的蛋白表达量占重组表达菌总蛋白的４３．７％，重组蛋白主要以包涵体存在。将获得的重组蛋白包涵体经变性、纯化和复性后，获得了纯化的ＩＧＦ－Ⅱ重组蛋白，其可在体外显著促进人乳腺癌ＭＤａ２３１细胞的增殖，表明ＩＧ．．．
关键词：
半滑舌鳎 IGF-Ⅱ 原核表达 生物活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 柳学周 张凯 武宁宁 刘芝亮 李春广
为在蛋白水平认识半滑舌鳎类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的生理功能,将IGF-Ⅱ成熟肽序列克隆到原核表达载体p ET-28a中,成功构建了重组半滑舌鳎IGF-Ⅱ/p ET28a质粒,导入到E.coli BL21(DE3)菌株后经IPTG诱导,获得了大小为11.4 k Da的重组IGF-Ⅱ蛋白,N端含6个组氨酸,可特异性地被6×His抗体识别。重组IGF-Ⅱ蛋白在最优诱导条件37℃诱导2 h,目的蛋白表达量占重组表达菌总蛋白的43.7%,重组蛋白主要以包涵体存在。将获得的重组蛋白包涵体经变性、纯化和复性后,获得了纯化的IGF-Ⅱ重组蛋白,其可在体外显著促进人乳腺癌MDA231细胞的增殖,表明IG...
关键词：
半滑舌鳎 IGF-Ⅱ 原核表达 生物活性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
位战飞 郭华 李海龙 郑卫卫 王文文 戴欢 朱颖 刘洋 董忠典 陈松林
本研究通过ＲＡＣＥ技术在半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）中克隆得到１个ＣＤ４０同源基因。该基因Ｃ ＤｎＡ全长为２０９８ ｂｐ，开放阅读框为１０１１ ｂｐ，可编码由３３６个氨基酸组成的蛋白质。推导得到的ＣＤ４０氨基酸序列包含１个信号肽、１个跨膜结构区、２个ｎ－糖基化位点以及含４个富含半胱氨酸的保守结构区。不同物种氨基酸序列同源分析结果显示，该基因与哺乳类、两栖类以及硬骨鱼类相似性为２８％～４７％，其中与硬骨鱼类相似性较高。系统进化分析结果显示，半滑舌鳎ＣＤ４０与其他硬骨鱼类ＣＤ４０聚类为一支，哺乳类与两栖类ＣＤ４０聚类为另一支。荧光定量ｐＣＲ结果显示，ＣＤ４０在健康半滑舌．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王凯琳 胡乔木 陈松林
通过对半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）进行全基因组及转录组测序，预测了一个半滑舌鳎性别相关基因ＣｓＦＲ２，目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究ＣｓＦＲ２基因的功能，本研究从蛋白层面入手，构建了原核表达载体ｐ ｅＴ－３２ａ－ＣｓＦＲ２，转化到大肠杆菌ｅ．Ｃｏｌｉ进行诱导表达，用Ｈｉｓ ＴＲａｐ进行蛋白纯化，ｓＤｓ－ｐａｇｅ电泳检测诱导及纯化产物，并将表达纯化的ＣｓＦＲ２蛋白注射１龄半滑舌鳎精巢。由于ＣｓＦＲ２是一个性别相关基因，因此无法通过免疫反应来直接检测其蛋白活性，本研究通过不同时间点取样检测半滑舌鳎其他性别相关基因Ｃｙｐ１９ａ和Ｆｏｘｌ２的表达量变化，来．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王凯琳 胡乔木 陈松林
通过对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)进行全基因组及转录组测序,预测了一个半滑舌鳎性别相关基因CSFR2,目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究CSFR2基因的功能,本研究从蛋白层面入手,构建了原核表达载体p ET-32a-CSFR2,转化到大肠杆菌E.coli进行诱导表达,用His Trap进行蛋白纯化,SDS-PAGE电泳检测诱导及纯化产物,并将表达纯化的CSFR2蛋白注射1龄半滑舌鳎精巢。由于CSFR2是一个性别相关基因,因此无法通过免疫反应来直接检测其蛋白活性,本研究通过不同时间点取样检测半滑舌鳎其他性别相关基因Cyp19a和Foxl2的表达量变化,来...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王滨 柳学周 刘权 赵明 徐永江 史宝
为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untransl
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史学营 徐永江 武宁宁 柳学周 杨洪军 臧坤 史宝 李存玉
为认识养殖半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞学特性，利用显微观察方法研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞的形态特征，比较了３种色素细胞在有眼侧皮肤、无眼侧正常和黑化皮肤中的数量分布特征。为进一步揭示无眼侧黑化的分子机制，克隆了半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列。结果显示，黑色素细胞较大，含黑色和棕色的色素颗粒，有树突状分枝不明显和延伸成放射状两种形态；黄色素细胞较小，含黄色素颗粒；虹彩细胞最小，含鸟粪素颗粒。半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列长９１０ ｂＰ，包括一个１１４ ｂＰ的５＇非翻译区和一个１５４ ｂＰ的３＇非翻译区，开放阅读框长度为６４２ ｂＰ，共编码２１３个氨基酸，包含ＡＣＴＨ、α．．．
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