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[期刊] 中国农业科学
[作者]
雷红涛 庞杰 贺丽苹 杨金易 孙远明 秦毅兰 梁明标
【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐圣 张怡萍 韩召军 吴敏
[目的]利用灰飞虱Laodelphax striatellus基因组和转录组数据鉴定灰飞虱G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor， GPCR）基因。[方法]构建灰飞虱基因组和转录组本地数据库，以黑腹果蝇Drosophila melanogaster和豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的GPCR基因为参照序列进行本地BLAST，去除冗余和不含有多跨膜螺旋结构的序列后获得灰飞虱GPCR基因；利用NCBI CD-Search对灰飞虱GPCR序列进行跨膜结构域分析，利用Clustal W进行序列比对，用MEGA 6软件构建灰飞虱GPCR系统发育树。[结果]鉴定了114个灰飞虱GPCR基因，它们分属于A、B、C和D这4个家族。灰飞虱A家族的GPCR数量最多，尤其是其中的神经肽和蛋白激素受体亚家族的基因数量达55个。与黑腹果蝇的GPCR相比，灰飞虱GPCR不仅种类丰富，而且有基因重复和可能的缺失现象。[结论]灰飞虱具有较为全面的GPCR系统，本研究完善了灰飞虱GPCR基因的信息，为进一步研究灰飞虱GPCR的功能奠定了基础。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王振东 孙仓
将引起人类腹泻主要病原物小球状病毒(Small round structured virus;SRSV)编码抗原蛋白基因的全长序列1605bp,导入来自三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus;ClYVV)侵染性全长cDNA克隆的侵染性植物病毒表达载体pClYVV/CP/W基因组的NIb/CP基因之间,构建了重组病毒克隆pClYVV-NV1.6。用上述重组病毒克隆接种蚕豆植物,表现了与野生型ClYVV相同的症状。从发病叶中提取总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)对上述重组病毒克隆的转录进行了检测,结果表明,外源基因在F4子代病毒基因组中仍然稳定存在。从发病叶中提取总...
关键词：
植物病毒载体 小球状病毒 抗原蛋白 表达
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
韩长志 薄淑文
植物病原丝状真菌G蛋白偶联受体（GPCR）在实现外界信号感知和传递过程中发挥着重要作用。基于GPCR蛋白所具有的典型7个跨膜保守结构域及非典型保守结构域，通过总结前人已报道的候选GPCR的同源比对方法，对其跨膜结构域数量预测方法及跨膜结构蛋白数据库进行对比，明确TOPCONS是目前开展GPCR跨膜结构域预测的较好方法。选择NCBI数据库中223个不同真菌的GPCR蛋白序列开展TOPCONS和TMHMM对比分析，结果显示，2种软件对GPCR的跨膜结构域数量预测结果不尽相同，TOPCONS预测结果的准确度较高；进一步对上述GPCR蛋白序列的氨基酸数目进行分析，明确具有7个跨膜结构域的GPCR蛋白氨基酸数目为200～1 406个。该研究可为进一步开展植物病原丝状真菌GPCR蛋白的结构预测及其功能研究提供参考。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
白根本 王沙生 沈昕 李金克
用可溶性总蛋白质电泳方法研究表明 :①密叶杨与胡杨 3个杂种类型之间的相似性最大 ,其次是杂种与亲本胡杨较相似 ,杂种与亲本密叶杨相似性很小 .②盐胁迫条件下 ,NaCl处理诱导出 91 .0kD ,5 5 .4kD和 46 .4kD三条谱带 ,同时抑制了 5 2 .9kD ,48.5kD和 2 5 .8kD三条谱带 ,说明胡杨对盐胁迫有积极的响应 .③从诱导的 3条蛋白出现的时间看 ,5 5 .4kD和 46 .4kD两条谱带在低盐浓度 (0 .5 %NaCl)和短时间 (2 4h)处理就已出现 ,90 .0kD这条谱带在 0 .5 %盐处理 72h和大于 1 %盐处理 2 4h才出现 .由...
关键词：
胡杨 杂种鉴定 抗盐
[期刊] 水产学报
[作者]
梁旭方 王琳 马旭
The regulation of energetic efficiency through the physiological uncoupling of oxidative phosphorylation may be a common strategy developed early in evolution.Uncoupling protein families are transporters in mitochondrial inner membrane.There are five UCP homologs in mammalian genome.UCP1-3 are close...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈如敬 周伦江 吴学敏 车勇良 王晨燕 王隆柏 黄晓凤 严山 刘玉涛 魏宏
【目的】建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。【方法】将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
谷瑞升 刘群录 陈雪梅 蒋湘宁
对蛋白提取方法进行改良并引用毛细管等电聚焦技术，不仅大大降低了木本植物体内次生代谢物质对双向电泳结果的干扰，明显改善了分析效果，而且又经济、快捷，获得了分析木本植物蛋白较好的双向电泳方法．在对毛白杨叶片和胡杨组织分析中获得较满意的结果．
关键词：
木本植物 蛋白 双向电泳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李旺 何万领 丁轲 李元晓 曹平华 赵龙妹
【目的】研究发酵、酶解和物理处理方式对豆粕大豆抗原蛋白分解和酸溶蛋白含量的影响,为筛选合适的豆粕加工处理方式提供依据。【方法】采用4因素3水平正交试验设计,研究菌种组合、发酵水分、发酵温度和发酵时间对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响,确定最佳发酵方案。采用4因素3水平正交试验计,研究蛋白酶用量、酶解水分、酶解温度和酶解时间对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响,确定最佳酶解方案。采用单因素试验研究烘焙(温度设置为160,200,240℃)、微波(火力设置为小火、中火、高火)和蒸汽蒸制(时间设置为15,20,25 min)对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响。【结果】豆粕发酵最优方案:以枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母作为发酵菌种、发酵水分40%、35℃发酵72 h,该方案所得的发酵豆粕酸溶蛋白含量为17.36%,且抗原蛋白分解较好。豆粕酶解最优方案:蛋白酶添加量为0.3%、水分含量为60%,40℃酶解48 h,该方案所得酶解豆粕酸溶蛋白含量为8.76%,且抗原蛋白分解效果较好。与未经处理的对照相比,烘焙、微波和蒸汽处理的豆粕酸溶蛋白含量均显著升高(P<0.05),且不同处理方式间差异显著(P0.05)。微波对豆粕抗原蛋白分解最好,烘焙和蒸汽对抗原蛋白也有一定的降解作用。【结论】发酵、酶解和物理处理均能提高豆粕酸溶蛋白含量,降低豆粕中的抗原蛋白。
关键词：
豆粕 抗原蛋白 酸溶蛋白 酶解 发酵
[期刊] 水产学报
[作者]
杨美圆 陈海兵 黄彦超 缪栋 王军琦 侯英雪 包卫洋
为了阐明紫贻贝幼体附着变态的内在机理,在天然诱导物-微生物膜的诱导参照下,通过使用G蛋白偶联受体(GPCRs)和信号通路的活化剂与抑制剂初步研究了其对该物种幼体附着变态过程的调控作用。结果显示,GPCRs活化剂Gpp[NH]p与抑制剂GDP-β-S没有诱导和抑制活性,表明可能非GPCRs的其他细胞反应过程参与了紫贻贝幼体的附着变态。腺苷酸环化酶/环腺苷酸(AC/cAMP)信号通路相关、理论上具有诱导活性的6种神经性试剂,除了磷酸二脂酶抑制剂(IBMX)外,其他在10-8~10-3M浓度下48、72 h后都没有活性,并且高浓度下表现出较高的神经性药物毒性。IBMX仅在10-4M浓度72 h后呈现...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨笑笑 杨兴淼 刘亚林 曹瑞兵
[目的]制备日本脑炎病毒prM蛋白的特异性单克隆抗体，对进一步了解prM的结构和功能、开发特异性检测方法以及JEV prM蛋白的功能研究奠定基础。[方法]将prM基因克隆至原核表达载体pET-32a，诱导表达并纯化prM重组蛋白，随后将其免疫小鼠，通过细胞融合和亚克隆得到分泌抗prM单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备腹水并进行效价测定，通过Western blot和IFA验证其特异性，并进行空斑中和试验测定其中和活性，利用原核表达多段截短体蛋白确定单克隆抗体抗原表位并进行保守性分析，将其初步应用于感染检测及亚细胞定位分析。[结果]经细胞融合和三次亚克隆后成功获得1株能稳定分泌抗prM单克隆抗体的细胞株，命名为4H6，所制备的腹水效价可达到1∶1638400，经鉴定该抗体重链属于IgG2b，轻链为κ型。Western blot以及IFA试验均证明该抗体具有良好的特异性。空斑减少中和试验显示4H6不具备中和活性。通过表达截短蛋白鉴定出4H6所识别的抗原表位位于30GENRCWVRAIDVGYMC45，结合生物信息学分析发现该表位位于prM蛋白表面且在JEV不同毒株之间高度保守，有利于抗原抗体的直接接触。并成功将4H6初步应用于JEV感染检测及prM蛋白亚细胞定位分析。[结论] 成功制备1种高效且特异性的JEV prM蛋白单克隆抗体，抗原表位识别区位于pr，为分析prM蛋白在病毒复制过程中的生物学功能以及与其他病毒蛋白（如E蛋白或宿主分子）之间的相互作用提供有效工具。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李佳 陆秀君 梅梅 孙晓梅 张晓林
［目的］探索一套适用于银杏种胚蛋白的双向电泳体系，为研究银杏种胚在不同发育阶段的表达差异蛋白提供基础。［方法］分别从蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ法、Ｔｒｉｚｏｌ提取法和ＴＣＡ－丙酮－酚法）、裂解液中的尿素浓度（６ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、７ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、８ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、９ ｍｏｌ·ｌ～（－１））蛋白上样量（１ ５００μｇ、１ ６５０μｇ、１ ８００μｇ）和分离胶浓度（１０％、１２．５％、１５％）四个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行分析，筛选出适宜双向电泳的条件。［结果］采用ＴＣＡ－丙酮－酚法提取银杏种胚蛋白，在裂解液中尿素浓度为８ ｍｏｌ·ｌ～（－１．．．
关键词：
银杏 种胚 蛋白质 双向电泳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
寇亚楠 马良友 罗莹 王希春 吴金节
【目的】研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法。【方法】首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。【结果】建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15mi...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高梅 张国权 魏益民 张继澍 党娇 王秋娟
为了进一步对小麦醇溶蛋白A-PAGE电泳的鉴定方法进行标准化,比较了凝胶浓度、缓冲体系及其pH值对电泳分辨率的影响,并初步筛选出了适合作为醇溶蛋白电泳标准样品的国内小麦品种。结果表明,丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺2个单体的交联百分浓度(C)为4.0%,总百分浓度(T)为6%,缓冲体系为甲酸-甘氨酸(pH3.0)混合体系的A-PAGE电泳效果较好;通过国内40个小麦品种与加拿大硬红春麦Marquis的R24、R50、R79标准条带相比较,确定荔丰3号可以作为国内小麦醇溶蛋白电泳的标准样品。
[期刊] 林业科学
[作者]
岳红妮 吴云锋 史英姿
Paulownia witches'-broom disease which was caused by the paulownia witches'-broom phytoplasma(PaWB) is one of the severest diseases in paulownia production.Antigenic membrane protein(Amp) gene was cloned from Paulownia plants infected with Paulownia witches'-broom phytoplasma in Shaanxi Province.The...
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