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[期刊] 华北农学报
[作者]
苏岭 李绍戊 王荻 刘红柏 卢彤岩 尹家胜
依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中HSP70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中HSP70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼HSP70的研究提供了基础数据,也为将HSP70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
许生友 陈兴勇 姜润深 耿照玉
研究优质黄羽肉鸡热应激期间肝脏和下丘脑组织中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因mRNA的动态表达规律,为揭示该类型优质鸡种热应激反应机理提供参考。64日龄Anak 40(♂)×岭南黄(♀)杂交后代母鸡置于(38±1)℃恒温室内进行持续热应激处理,采取荧光定量PCR方法分别测定热应激起始(0 h)、热应激后12、24、36、48和60 h肝脏和下丘脑组织中HSP70 mRNA的表达水平。随着热应激时间的延长,肝脏和下丘脑组织中HSP70 mRNA表达水平均显著上升,至热应激36 h时表达水平达高峰值,约为应激起始表达水平的7倍,差异显著(P<0.05);...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周朝伟 胡续雯 雷骆 刘晓庆 任胜杰 杨旻珉 曹高祥 陈国梁 邓星星 李岩 李路宽
本研究旨在探讨热应激对银鲫(Carassius auratus gibelio)生化指标及肝脏HSP70 mRNA表达的影响,选取平均体重为(72.8±10.1) g的银鲫,分别在热应激前(25℃,对照组)、热应激后(32℃,0 h、2 h、6 h、10 h)和恢复适温后6 h (25℃,恢复组)的条件下,测定机体血浆乳酸(LD)、血浆葡萄糖(Glu)、肝糖原(Gly)、己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和肝脏HSP70 m RNA表达量变化。研究表明,实验组乳酸含量从热应激开始至恢复期,差异始终不显著(P>0.05);实验组血浆葡萄糖水平在热应激后0 h、2 h、6 h,极显著高于对照组(P0.05);己糖激酶活力在热应激后2 h,显著高于对照组(P>0.05);丙酮酸激酶活力在热应激后6h,极显著高于对照组(P0.05)。本研究为进一步探究银鲫的高温应激作用机制及调控机理提供参考数据,同时,也为银鲫养殖和育种等生产实践提供相应参考依据。
关键词：
银鲫 热应激 生化指标 HSP70
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李玉保 鲍恩东 王志亮 赵茹茜
目的探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。方法根据HSP90、HSP70和GAPDHmRNA序列,设计并合成引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90mRNA转录水平的改变。结果经1、2、4、6和10h的运输应激后,组织中HSP70mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激到10h时HSP70mRNA的转录水平升到最高,肝脏和心脏组织中HSP70mRNA的转录水...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
缪凌鸿 戈贤平 谢骏 刘波 潘良坤 周群兰 陈汝丽
为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50%的日粮,每组3个重复。在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量。结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P<0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
廉红霞 卢德勋 高民
试验选用84头10 kg左右杜洛克×长白×大约克(DLY)三元杂交阉公猪,随机分成2组,组内设6个重复,每个重复7头猪,研究了在NRC(1998)标准(对照组)、荣昌猪(GB 7223-1987)饲养标准(试验组)2种饲粮条件下营养水平对DLY猪生长肥育期背最长肌I MF含量、HSL及FAS mRNA表达量和血液激素含量的影响。结果表明:降低饲粮营养水平可降低35、80及110 kg DLY猪血清胰岛素含量和35及80 kg猪生长激素含量;同时可升高20、50及110 kg DLY猪血清肾上腺素含量和35、50及110 kg DLY猪胰高血糖素含量。各阶段试验组背最长肌肌内脂肪含量均高于对照组...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
钱焜 温海深 迟美丽 倪蒙 张冬茜 丁玉霞
对花鲈(Lateolabrax japonicas)成鱼腹腔注射促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A3)和人体绒毛膜促性腺激素(HCG),利用放射性免疫激素测定方法(RIA)检测了花鲈血清中类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)在注射后6、12、24、48 h内的变化情况,同时还利用荧光实时定量PCR技术检测了花鲈肝脏中IGF-1和类胰岛素生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factor-binding protein 1,IGFBP-1)mRNA的相对表达量的变化情况。结果表明,注射LHRH-A3的花鲈血清中IGF-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
廉红霞 卢德勋 高民
【目的】克隆猪cDNA,作为猪LPLmRNA定量检测的标准品,建立检测方法。【方法】用RT-PCR,从猪背最长肌的总RNA中逆转录扩增LPL的cDNA,将纯化的LPLcDNA与pGM-T载体进行连接,转化宿主菌TOP10,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析,对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测。纯化质粒并检测260nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。【结果】建立了猪LPLmRNA实时定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为1×103～1×1010拷贝,阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(R2=0.9...
[期刊] 水产学报
[作者]
强俊 杨弘 王辉 徐跑 柒壮林 何杰
以吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和红罗非鱼为研究对象,饲养100d后,进行海豚链球菌(2.95×108CFU/mL)感染试验,分析攻毒前后各品系罗非鱼的血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达量的变化规律。另从各桶中取20尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点的累积死亡率。结果表明,感染海豚链球菌96h后,吉富罗非鱼和新吉富罗非鱼对病原较为敏感,累积死亡率分别达到36.67%和38.33%;埃及尼罗罗非鱼对病原敏感性较差,试验期间未见死亡。吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼和红罗非鱼血清皮质醇和葡萄糖水平以及肝脏HSP70 mRNA的表达量在攻毒后明显提高,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶与溶...
[期刊] 水产学报
[作者]
彭章晓 江敏 吴昊 何琳 杨李
采用反相高效液相色谱分离、紫外检测器检测,建立了鲫血液、肌肉、肝胰脏、肾脏及性腺组织中伊维菌素(IVM)残留的检测方法。将匀浆后的鲫组织用乙酸乙酯提取,离心后取上清液于45℃下氮气吹干,用甲醇-水(4∶1,V/V)混合液溶解残渣,加正己烷,漩涡振荡后离心,取下清液经0.22μm的滤膜过滤后,进样20μL进行分析,检测波长为245nm,外标法定量。结果表明:伊维菌素在血浆和肌肉中的检出限分别为7.5μg/L和7.0μg/kg;肌肉、肝胰脏、肾脏及性腺中IVM为0.025～1.00mg/kg,血液中为0.025～1.00mg/L时,色谱峰峰高与浓度呈良好的线性相关。各组织中IVM的平均回收率为(9...
关键词：
鲫 伊维菌素 检测 高效液相色谱
[期刊] 华北农学报
[作者]
李绍戊 王荻 苏岭 刘红柏
选用4种中草药方剂AH、CD、Ⅳ和APS,每日按体质量的3%混饲鲫鱼30 d。采用实时荧光定量RT-PCR方法,监测适温(18℃)及热刺激(28℃)1 h后的鲫鱼脑及肝脏中HSP 70表达水平变化。试验结果表明,对照组鲫鱼体内2种组织中HSP 70的表达量在热刺激条件下均有不同程度的升高,且适温和热应激条件下,鲫鱼肝脏组织中HSP 70表达量均明显高于脑组织。而AH组、IV组和APS组热刺激后HSP 70 mRNA含量升高,但CD组热刺激后HSP 70 mRNA转录水平降低,且在肝脏中表达水平降低极为显著。4种方剂中尤以补血养气为主要功能的AH方剂在鲫鱼肝脏中对HSP 70表达水平有极大的促进...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张李文 陈慧君 王超 张绍波 王盛琪 张博 敖英男 齐智利
为确定酵母铬和二氢吡啶是否能缓解围产期奶牛热应激，将24头体质量和胎次相近的围产期荷斯坦奶牛随机分为3组，饲养于环境温湿指数（THI）高于68的热应激条件下，对照组饲喂基础日粮，酵母铬组和二氢吡啶组饲喂基础日粮的同时饲喂8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）的二氢吡啶，试验周期为40d，观测酵母铬和二氢吡啶对围产期奶牛热应激反应的影响。结果显示：(1)酵母铬组和二氢吡啶组奶牛与对照组奶牛在呼吸频率上无显著差异（P>0.05）。(2)各组奶牛血清中血糖和胆固醇含量在产前第7天与产后第3天均无显著差异。二氢吡啶组奶牛产前第7天血清中甘油三酯含量显著降低（P<0.05）。(3)与对照组比较，酵母铬组和二氢吡啶组产前、产后血清中Na+、K+、Cl-的浓度均无显著差异（P>0.05），各组在产前、产后血清中碱性磷酸酶和肌酸激酶的含量也均未出现显著变化（P>0.05）。(4)酵母铬组、二氢吡啶组与对照组奶牛血清中热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)mRNA表达量没有明显差异（P>0.05）。以上结果表明，热应激条件下，在围产期奶牛日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对血液生化指标和HSP70 mRNA表达量均无显著影响，说明日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对缓解围产期荷斯坦奶牛热应激无明显效果。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵圣国 王加启 张春刚 卜登攀 刘光磊 张春林 章玉涛 周凌云
为了探讨免疫刺激后昆明小白鼠乳腺pIgR基因mRNA转录和特异性IgA含量变化。选择48只健康受孕昆明小白鼠,分为A、B、C、D组,分别于分娩后第4天注射灭菌生理盐水、Lipase+灭菌生理盐水、空ISCOM和Lipase+LTB+ISCOM,每组注射12只,并于分娩后第8天和12天采集小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳和血浆中的特异性IgA含量,用Real Time-PCR检测小鼠乳腺中pIgR基因的相对转录水平。结果表明,免疫刺激对小鼠血浆中特异性IgA的含量无显著性影响(P>0.05),但是免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳中特异性IgA含量显著高于8 d乳中的特异性...
关键词：
pIgR mRNA IgA 乳腺
[期刊] 中国水产科学
[作者]
明建华 谢骏 刘波 何义进 周群兰 潘良坤 俞菊华 徐跑
采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏热休克蛋白70(HSP70)基因全长cDNA序列,共2224bp,包括135bp5′非翻译区、1932bp阅读框以及157bp3′非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码643个氨基酸,分子量计算值为70.53kD,理论等电点为5.25。该HSP70基因在翻译区不含内含子,符合诱导型HSP70的特征。团头鲂HSP70氨基酸序列中含有HSP70家族的3个签名序列以及细胞质特异性调控基序EEVD等。同源性分析表明,团头鲂HSP70氨基酸序列与斑马鱼等脊椎动物的相似性高...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张丽 韩兆玉
为研究日粮中添加不同剂量甜菜碱对夏季热应激奶牛生产性能和HSP70及其mRNA表达的影响,根据年龄、胎次、泌乳期、产奶量相近的原则选取32头荷斯坦奶牛,随机均分为4组,对照组(C)不添加甜菜碱,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在日粮中添加10、15和20 g·d-1甜菜碱。结果表明:试验期牛舍平均温湿指数(THI)为78.68;试验Ⅱ和Ⅲ组奶牛产奶量比对照组和试验Ⅰ组显著提高(P<0.05);试验Ⅱ组乳糖含量显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅰ和Ⅲ组显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组乳蛋白率显著高于对照组(P<0.05);试验后期试验Ⅱ组奶牛外周血HSP70含量与对照组相比显著降低(P<...
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