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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王勇生 黄苇 侯水生 李青旺 康俊梅
为探讨IGF-1基因对北京鸭胸肌发育的影响,试验克隆了北京鸭IGF-1 cDNA的部分序列,分析了其核苷酸及编码的氨基酸序列与其他物种的同源性,并检测了IGF-1 mRNA在不同日龄北京鸭胸肌中表达的发育性变化。结果表明,克隆的鸭IGF-1 cDNA部分序列长507 bp,编码168个氨基酸,核苷酸序列与鸡、家鸭、鹌鹑、火鸡、鸵鸟、人和猪的同源性分别为98％,99％,97％,98％,96％,84％和82％,编码的氨基酸序列与家鸭、鸡、火鸡、鹌鹑、人、挪威鼠和猪的同源性分别为99％,98％,97％,97％,84％,79％和84％。表明北京鸭与家鸭的亲缘关系最近,与鸡、鹌鹁、火鸡、鸵鸟也有较近的亲...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董虹 穆祥 刘凤华 张永东 许剑琴
为从北京鸭胃肠道中扩增血管活性肠肽(VIP)基因,根据鸡VIP基因(GenBank登录号X80906),设计了一对简并引物,从北京鸭腺胃、十二指肠和空肠提取总RNA,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,将从腺胃、十二指肠和空肠中扩增出的产物克隆到pGEM-Teasy载体上,导入大肠杆菌JM109,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序结果与鸡和鹅(GenBank登录号为DQ023161)的VIP基因进行同源性比较。本试验扩增到的VIP基因与已知的鸡和鹅核苷酸序列比较,同源性分别为94.61%和94.42%,氨基酸序列同源性分别为93.75%和95.71%。本试验首次成功从北京鸭腺胃、十二...
关键词：
北京鸭 血管活性肠肽 克隆 序列分析
[期刊] 水产学报
[作者]
陶敏 刘少军 钟欢 周毅 宋灿 张纯 刘筠
为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列。结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李学梅 吴兴兵 王旭歌 朱永久 杨德国
根据鲤科鱼类同源序列设计并合成了长鳍吻(Rhinogobio ventralis)应激因子HSP70、抗体IgM、抑炎性因子IL-10和促炎性因子IL-1b基因特异引物,以长鳍吻皮肤组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得长度分别为412、463、520和217 bp的上述4种免疫因子基因cDNA部分序列。同时通过RT-PCR比较患小瓜虫病长鳍吻和对照组长鳍吻皮肤和肠道组织中各免疫因子的表达差异,结果显示:在皮肤组织中,IgM和IL-10在感染组鱼体中表达量显著高于对照鱼(P
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林亚秋 郑玉才 吉红
根据鲤热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)序列(AY120894)设计并合成一对引物,以草鱼(Cteno-pharyngodon idella)肝胰脏组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得草鱼HSP70基因cDNA部分序列,并进行了组织表达差异性研究。结果显示:所获为序列为480 bp,获得GeneBank登陆号为FJ483832。序列测序结果显示,HSP70扩增序列与鲤、斑马鱼、鲋的同源性为:93%、91%、93%。另外,所获序列HSP70在草鱼脂肪、肌肉、肠、脑、粘液、性腺、鳔、肝胰脏、心脏、脾脏、鳃、鳍12个组织的表达存在差异,HSP70在草鱼这12个组织...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王晓玉 纪锋 徐黎明 赵景壮 刘淼 曹永生 尹家胜
采用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从哲罗鲑（ＨｕＣＨｏ Ｔａｉｍｅｎ）肝脏的总Ｒｎａ中扩增出胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｉＧＦ－Ⅰ）的Ｃ Ｄｎａ开放阅读框（ｏＰｅｎ ＲｅａＤｉｎＧ ＦＲａｍｅ，ｏＲＦ）序列，运用软件对其进行生物信息学分析，并利用荧光实时定量ＰＣＲ技术检测了哲罗鲑成鱼不同组织中ｉＧＦ－Ⅰ ｍＲｎａ的表达情况。结果显示，ｉＧＦ－Ⅰ基因的Ｃ Ｄｎａ开放阅读框为５７３ ｂＰ，编码１９０个氨基酸，蛋白质等电点为９．２１，氨基酸结构由信号肽、ｂ、Ｃ、ａ、Ｄ结构域及ｅ肽组成；氨基酸序列与其他鲑科鱼类具有较高的同源性，其中与北极红点鲑的ｉＧＦ－Ⅰ同源性最高（９９．２％）；组织表达分析显．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘姗姗 张静 陈松林
为研究HIRA基因在半滑舌鳎胚胎发育中的作用及其组织差异表达,以半滑舌鳎为研究对象,采用同源克隆策略从其精巢中分离了长度为764bp的HIRA部分cDNA序列,该片段编码254个氨基酸,具有5个WD结构域。对氨基酸进行比较发现,半滑舌鳎HIRA与比较物种的氨基酸序列具有很高的同源性,与红鳍东方鲀亲缘关系最近。实时定量PCR分析发现,HIRA mRNA在多细胞期到原肠胚期的表达量较高,表明HIRA对胚胎发育起重要作用;HIRA在不同组织中表达差异显著,其中在性腺中表达最高,推测HIRA在维持性腺的功能方面有一定作用。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵永贞 陈秀荔 杨春玲 彭敏 何苹萍 陈晓汉
为研究病毒感染凡纳滨对虾血细胞黏连因子基因表达量的变化,进而研究该因子在对虾先天免疫系统中的作用,利用RACE方法克隆凡纳滨对虾血细胞黏连因子cDNA序列,并通过荧光定量PCR方法分析其在病毒感染前后不同组织中的表达情况。成功获得了长度为1529 bp的Peroxinectin基因部分cDNA编码序列,3’端含有一段长度为319 bp的非翻译区,推测血细胞黏连因子部分序列编码402个氨基酸。凡纳滨对虾血细胞黏连因子的氨基酸序列高度保守,在线比对发现其氨基酸序列与斑节对虾和中国明对虾相似性达到90%,而与锯缘青蟹有87%的相似性。通过荧光定量PCR技术检测IHHNV感染前后血细胞黏连因子基因表达...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘珊 李冰 张成锋 魏可鹏 朱健
为了解Na+-K+-ATPase α1基因的分子结构及其在建鲤盐度调控过程中起到的作用,采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)的方法分离克隆了建鲤(Cyprinus carpio var.jian)Na+-K+-ATPase α1基因全长cDNA,得到3 397 bp的全长cDNA,包括3 081 bp的开放阅读框(ORF),232 bp的5-末端非编码区(UTR)以及219 bp的3-末端非编码区(UTR)。对推测的该基因氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示:建鲤与其他鱼类该基因的氨基酸序列相似度为90.22%~95.52%,与斑马鱼(Danio rerio)相似度最高(95.52%),与...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杜宝文 杨公社 孙超
根据Genbank已登录的细胞因子信号转导抑制因子(SOCS-2)基因序列同源区设计1对引物,从8月龄健康雄性八眉猪肾脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪SOCS-2基因;用CLUSTAL W软件进行同源性分析,利用半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR技术检测八眉猪各组织中SOCS-2 mRNA的表达量。结果表明,猪SOCS-2基因cDNA全长克隆成功(Genbank登录号为EF121242);家猪SOCS-2基因与澳洲野猪、人、小鼠、大鼠SOCS-2核苷酸同源性分别为99%,94%,91%,89%,SOCS-2蛋白氨基酸序列同源性分别达到100%,95%...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姬改革 朱春红 陶志云 刘宏祥 宋迟 李慧芳
［目的］本文旨在探讨ＩＧＦ－Ⅰ和ＭＳＴＮ基因在鸭胚胸肌成肌细胞的表达规律。［方法］以生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验对象，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测鸭１３、１５、１７、１９、２１和２３胚龄时胸肌成肌细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ的表达情况，并进行品种间比较。［结果］ＩＧＦ－Ⅰ与ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ表达都呈先升后降的趋势，都存在１７胚龄的表达高峰，１９胚龄之后，表达显著下调并持续至２３胚龄；高邮鸭ＩＧＦ－ⅠＭＲＮＡ的表达比金定鸭多了１３胚龄的表达高峰，且在１３胚龄时，２个基因的表达量都是高邮鸭极显著高于金定鸭（Ｐ
关键词：
鸭 胚胎 成肌细胞 IGF-Ⅰ MSTN
[期刊] 水产学报
[作者]
朱炳林 李俊 方维焕 李肖梁
MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)是多数TLRs(Toll like receptor,TLRs)信号转导过程中的关键接头分子。研究根据MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)TIR结构域(Toll-like/IL-1 receptor domain)保守区设计简并引物,通过PCR扩增,成功地从中华鳖脾脏cDNA中扩增出351bp的目标序列。测序后经结构域和序列比较分析,扩增片段为中华鳖的MyD88 TIR结构域。该序列与大黄鱼、鸡等脊椎动物的MyD88的TIR结构域序列同源性和相似性...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周敏 李莹 沈栩 徐海平 张成广 张细权
【目的】对鹌鹑血管活性肠肽1型受体(vasoacitve intestinal peptide type 1 receptor,VIPR-1)cDNA全长基因进行克隆及分析,为鹌鹑的分子育种提供基础资料。【方法】通过比较基因组学,采用RT-PCR和RACE技术,获得鹌鹑了VIPR-1 cDNA全长序列;通过生物学软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了比对;采用实时定量PCR方法检测了VIPR-1在8个组织中的表达。【结果】鹌鹑VIPR-1的cDNA全长2 427 bp,包含了1 341 bp的开放性阅读框,编码446个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的鹌鹑VIPR-1编码区序列与鸡该编码区序列存在...
[期刊] 水产学报
[作者]
祁晓翔 李文娟 尚朝 周子睿 尚攀 施志仪
为了发掘更多三角帆蚌具有ＥＦ－ｈａｎｄ结构域的功能基因及其蛋白质，本研究运用ＲａＣＥ－ＰＣＲ技术，克隆得到了三角帆蚌包含ＥＦ－ｈａｎｄ结构域钙结合蛋白１基因（ＥＦ－ｈａｎｄ ＣａｌＣｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ－Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＰＲｏｔＥｉｎ １，ＥＦＣｂ１）的Ｃ ｄｎａ全长并进行了生物信息学分析；通过ＲＥａｌ－ｔｉｍＥ Ｑ－ＰＣＲ技术，分析了ＥＦＣｂ１基因在三角帆蚌１０个组织，以及内脏团、外套膜插核后不同时间点的时空表达特点。结果表明三角帆蚌ＥＦＣｂ１基因Ｃ ｄｎａ序列全长９８１ ｂＰ，ｏＲＦ为５３１ ｂＰ，编码１７６个氨基酸残基，５＇－ｕｔＲ ２３９ ｂＰ和３＇－ｕｔＲ ２１．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张 涓 陈思思 何玉慧 黄金海 刘小玲 陈孝煊 袁改玲
从团头鲂（Megalobrama amblycephala）中克隆出β-防御素1（maBD-1）基因，检测该基因在组织中的分布，及在病原菌感染后该基因表达量的变化情况。将maBD-1基因重组到pGEX-KG原核表达载体上，构建重组质粒pGEX-KG-maBD-1，重组质粒经转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达，将融合蛋白免疫日本大耳白兔，制备该融合蛋白的多克隆抗体，并检测血清效价。 结果表明：maBD-1基因ORF全长为204 bp，编码67个氨基酸。该基因在组织中广泛分布，病原菌感染后头肾和脾脏组织maBD-1基因表达量显著上调。经间接酶联免疫分析（ELISA）获得的抗血清效价为1∶3 2...
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团头鲂 maBD-1 克隆 表达
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