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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
于迪 张铭暄 王喜凤
为分析北京鸭含有VHδ基因的TCRδ位点的结构、表达及进化特点,本研究通过筛选北京鸭基因组DNA的细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)文库,并对筛选到的BAC克隆进行全长测序,获得包含北京鸭第二个TCRδ位点的约136 Kb的基因组序列;深入分析北京鸭第二个TCRδ位点基因序列,发现北京鸭第二个TCRδ位点上的VHδ、Dδ和Jδ之间没有内含子序列,已在基因组水平已经完成了VDJ的重组;同线性分析显示该基因位点结构为SPPL2A-VHδ-Dδ-Jδ-Cδ-OR-OR,与鸡的第二个TCRδ位点5’端具有同线性关系;通过Q-PCR得到了北京鸭二个TCR位点上基因的组织特异表达特点;全面分析鸟类第二个TCRδ位点上各基因的进化关系,结果显示所有鸟类的祖先中已出现了第二个TCRδ位点;但在进化过程中不同鸟类Cδ基因经历了基因的丢失或者基因的复制。
关键词：
北京鸭 VHδ基因 TCRδ位点 进化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
单雪松 崔庆媛 李克鹏 王雪丽 杨雨江
用抑制性消减杂交(SSH)方法研究动物杂种相关基因表达差异。选用北京鸭、法国番鸭及其正反交F_1代,以杂种组为处理,亲本组为对照,建立肌肉组织SSH基因文库,随机选取1 000个单克隆测序,并与GenBank序列进行比对分析。结果共发现40个新ESTs,93个未知功能蛋白基因,34个已知功能蛋白基因。在34个已知功能蛋白基因中,杂种表达上调的基因有23个,杂种表达下调的有11个。研究表明杂种优势分子遗传基础复杂,涉及能量代谢、信号传导及调控、转录调控、蛋白质合成加工等基因的差异表达。
关键词：
杂种优势 抑制性消减杂交 北京鸭 番鸭
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王勇生 黄苇 侯水生 李青旺 康俊梅
为探讨IGF-1基因对北京鸭胸肌发育的影响,试验克隆了北京鸭IGF-1 cDNA的部分序列,分析了其核苷酸及编码的氨基酸序列与其他物种的同源性,并检测了IGF-1 mRNA在不同日龄北京鸭胸肌中表达的发育性变化。结果表明,克隆的鸭IGF-1 cDNA部分序列长507 bp,编码168个氨基酸,核苷酸序列与鸡、家鸭、鹌鹑、火鸡、鸵鸟、人和猪的同源性分别为98％,99％,97％,98％,96％,84％和82％,编码的氨基酸序列与家鸭、鸡、火鸡、鹌鹑、人、挪威鼠和猪的同源性分别为99％,98％,97％,97％,84％,79％和84％。表明北京鸭与家鸭的亲缘关系最近,与鸡、鹌鹁、火鸡、鸵鸟也有较近的亲...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘京国 赵晓萌 杨爱珍 师光禄
【目的】构建含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A的突变体Cry3Am,以期提高Cry3A的活化效率,增强杀虫活性。【方法】利用重叠PCR技术,构建Cry3A杀虫蛋白的突变体Cry3Am,使之在原核细胞中表达纯化突变体蛋白;将Cry3Am与饲料混合后饲喂黄粉虫,用以评价Cry3Am的杀虫活性。【结果】成功地在Cry3A杀虫蛋白结构域I的α3和α4之间加上1个α-胰凝乳蛋白酶的作用位点,并提取Cry3Am到杀虫蛋白。体外酶切试验结果表明,Cry3Am很容易地被降解为55 kD的杀虫蛋白。生测分析结果表明,Cry3Am对黄粉虫的毒力是Cry3A的2倍以上。【结论】向Cry3A中插入α-胰凝乳蛋白...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董虹 穆祥 刘凤华 张永东 许剑琴
为从北京鸭胃肠道中扩增血管活性肠肽(VIP)基因,根据鸡VIP基因(GenBank登录号X80906),设计了一对简并引物,从北京鸭腺胃、十二指肠和空肠提取总RNA,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,将从腺胃、十二指肠和空肠中扩增出的产物克隆到pGEM-Teasy载体上,导入大肠杆菌JM109,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序结果与鸡和鹅(GenBank登录号为DQ023161)的VIP基因进行同源性比较。本试验扩增到的VIP基因与已知的鸡和鹅核苷酸序列比较,同源性分别为94.61%和94.42%,氨基酸序列同源性分别为93.75%和95.71%。本试验首次成功从北京鸭腺胃、十二...
关键词：
北京鸭 血管活性肠肽 克隆 序列分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
生锡绘 董浚键 孙成飞 李武辉 胡婕 田园园 高风英 闫宁宁 杨超 卢迈新 陈刚 叶星
基于大口黑鲈(Micropterus salmoides)全长转录组数据,克隆测序获得大口黑鲈MsDmrt3 cDNA序列,其开放阅读框为1245bp,共编码474个氨基酸,含有高保守的DM结构域和DMA结构域,且DM结构域有2个保守的锌指样结合位点。蛋白三维预测结构与人(Homo sapiens)和青鳉(Oryzias latipes)的DMRT3相似。结合大口黑鲈基因组数据分析显示,MsDmrt3位于基因组7号染色体上,基因序列长3353bp,由2个外显子与1个内含子组成。进化树聚类分析显示, Ms DMRT3属于DMRT3家族,且可能与低等节肢动物Dmrt93B起源于共同的原始DMRT。对大口黑鲈14种组织以及8个发育时期的MsDmrt3基因的表达情况进行定量分析,结果显示MsDmrt3基因在成熟个体的脊髓中高表达,精巢和眼次之,但在卵巢和肝脏几乎不表达;MsDmrt3在各发育时期均有表达,在6dpf前呈逐渐上调趋势,之后逐渐下调至最低水平。本研究表明, MsDmrt3基因序列与结构具有高保守性,且具有显著的性别表达二态性,推测其与性别决定和分化有关。同时,根据MsDmrt3基因在脊椎和胚胎发育早期的高表达,推测其可能在神经系统和胚胎早期生长发育中发挥作用。本研究旨在为大口黑鲈性别决定与性别分化分子机制的深入研究奠定基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周生茂 曹家树 王玲平 向珣 韦本辉 李杨瑞 方锋学 李文嘉
【目的】阐明山药蔗糖合成酶(SuSy,EC 2.4.1.13)基因家族的成员及其功能。【方法】利用RT-PCR和RACE技术从大薯(Dioscorea alata)地下块茎中分离到1个SuSy基因(DaSuSy1)全长cDNA序列,并用DANSTAR和Clastal W等软件分析该序列的结构特征和分子进化,采用RT-PCR和Northern杂交对该基因的时空表达进行分析。【结果】DaSuSy1全长cDNA序列大小为2673bp,其中最大开放阅读框(ORF)、5'端和3'端的非翻译区分别含有2445bp、7bp和221bp,而且3'端的非翻译区含1个24nt的Poly(A+)尾;最大ORF可编码...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
原晓龙 李娟 李云琴 王毅
聚酮和非核糖体多肽的复合化合物具有独特的生理活性,它们由聚酮合酶/非核糖体肽合成酶(PKS/NRPS)催化合成。目前球孢白僵菌Beauveria bassiana中含SDR结构域的PKS/NRPS酶的生物合成机制尚不清楚,采用基因挖掘技术从球孢白僵菌基因组中分离得到1个PKS/NRPS基因(命名Bbpks2),利用生物信息学分析对其功能进行预测并检测该基因在以6.0 g·L-1麦芽提取物和3.0 g·L-1酵母提取物为基本氮源培养基,7种碳源添加物和以1.8 g·L~(-1)麦芽糖和6.0 g·L-1葡萄糖为基本碳源培养基,4种氮源添加物培养基上的具体表达情况,其中每种添加物含量为4.0 g·L-1。结果显示:Bbpks2基因长度为12 051 bp,编码4 016个氨基酸;其结构域组织顺序为KS-AT-DH-MTKR-ACP-C-A-PP-SDR,是一种含有SDR结构域的PKS/NRPS;系统进化分析发现,BbPKS2与球孢白僵菌JEF007菌株(PMB64475.1)、头状虫草Tolypocladium capitatum(PNY25600.1)等的PKS/NRPS蛋白聚在同个分支中,可能参与一种聚酮/非核糖体多肽类化合物的生物合成;比较不同氮源、碳源添加物对Bbpks2基因表达的影响,发现该基因在添加了乳糖的培养基上的表达量是其他碳源添加物的3.4倍以上,添加了牛肉浸粉的培养基上表达量是其他氮源添加物的1.3倍以上。该研究为下一步通过异源表达鉴定Bbpks2基因的具体功能,及其调控机理研究和基因资源利用奠定基础。图3参30
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭俣 刘长青 陆涛峰 佟春玲 修晓娜 关伟军 马月辉
利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
廖文艳 马得莹 刘胜旺 韩宗玺
【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
闫洪波 葛文雅 程玉豆 何近刚 关军锋
【目的】从鸭梨中克隆GAPDH基因家族,筛选合适的鸭梨内参基因。【方法】采用同源克隆的方法,克隆鸭梨GAPDH基因家族,用半定量PCR方法分析4个鸭梨GAPDH基因在鸭梨幼叶、花蕾、盛花期花瓣、幼果期果肉和成熟期果心,以及幼果期、膨大期、成熟期和褐变期果心的表达特征。【结果】从鸭梨中成功克隆出了4个GAPDH基因,分别命名为PbGAPDHa、PbGAPDHb、PbGAPDHc1和PbGAPDHc2。其中PbGAPDHa和Pb-GAPDHb是由一个共同的祖先基因倍增进化来的,主要在鸭梨的幼叶中表达,其蛋白定位在质体;而PbGAPDHc1和PbGAPDHc2是一个基因的2种拷贝形式,在鸭梨的花、幼...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐银学 葛盛芳 周玉传 赵茹茜 陈伟华 R.Grossmann 陈杰
取 33日龄高邮鸭和绍兴鸭公鸭各 32只 ,每品种分为两组 ,分别给以 2 0h和 6h光照 ,试验期 14d。试验前后称重。Northern杂交法测定垂体GHmRNA和下丘脑SSmRNA表达水平 ,放免法测定血清中生长激素 (GH)、胰岛素生长因子 1(IGF 1)、甲状腺激素 (T3 、T4 )水平。结果表明 :高邮鸭 2 0h光照时增重、GH及T4 水平显著低于 6h光照 (P
关键词：
鸭 光照制度 生长 激素 基因表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱德杰 吴亚明 陈宇龙 高泽霞
为明确鱼类咽齿发生发育的分子机制，以我国特有的经济鱼类团头鲂（Megalobrama amblycephala）为研究对象，通过团头鲂全基因组序列Blast获得团头鲂分泌型钙结合磷蛋白（secretory calciumbinding phosphoprotein,SCPP）家族基因的cDNA序列，采用实时荧光定量的方法比较分析SCPP家族基因在团头鲂咽齿发生发育关键时期第四、第五鳃弓中的表达情况，以及在1龄团头鲂不同组织中的表达情况，筛选调控咽齿发育的关键调控基因。研究结果显示，团头鲂enam、scpp1、ambn、scpp9、odam、spp1与斑马鱼具有较高同源性，进化树中距离较近；通过比对不同脊椎动物enam与odam这2个基因编码的氨基酸序列，发现在鱼类中均存在2段氨基酸序列的缺失。1龄团头鲂不同组织的SCPP家族基因定量表达结果显示，enam、scpp1、ambn、scpp9和spp1在第五鳃弓（有咽齿）和肋骨里面有很高的表达量，与其他组织中的表达水平大多存在显著性差异（P
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
吴乾锋 刘贺贺 张涛 罗俊 胡博 王继文
采用RT–PCR技术扩增和克隆鸭Myo G基因启动子,并对其启动子序列进行生物信息学分析,采用Sequenom Mass Array技术检测Cp G岛在鸭肌肉组织中的甲基化水平,用q RT–PCR检测Myo G基因的表达量。结果表明,扩增得到鸭Myo G基因启动子序列2 730 bp,对启动子序列预测后,发现存在2个Cp G岛,其中Cp G岛(–2 536–1 997 bp)存在5个转录因子结合位点和多个真核生物结构元件。甲基化检测结果表明:在鸭的个体和组织水平上,启动子甲基化率均未聚类在一起;Cp G位
关键词：
鸭 肌细胞生成素 启动子 DNA甲基化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
詹凯 杨宁 侯卓成 徐桂云 李显耀
为研究转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)与肉鸭脂肪代谢的相关性,通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)获得北京鸭TTR基因全长cDNA序列,并采用实时荧光定量PCR法对鸭TTR基因表达谱进行研究。结果显示:鸭全长TTRmRNA编码150个氨基酸的前体肽,该肽含20个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟肽;与哺乳动物相比,鸭TTR亚基N-末端序列多出的3个氨基酸Val-Ser-His,可能使鸭TTR结合甲状腺素T3的亲合力增加。定量检测结果表明,鸭TTRmRNA在脉络丛中的表达量最高,与鸡、爬行类和哺乳动物类似。本实验证实鸭TTR基因在脉络丛中的表达量比鸡更高,并首次发现TT...
关键词：
转甲状腺素蛋白 鸭 cDNA克隆 表达
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