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[期刊] 草业科学
[作者]
周志湘 韩烈保 晁跃辉 张铁军
SGR (stay green regulation)基因是植物体内叶绿素代谢的关键调控基因,在调控植物衰老进程中发挥着重要的作用。本研究利用从日本结缕草(Zoysia japonica)中分离的ZjSGR基因,通过农杆菌介导的方法,完成对匍匐剪股颖(Agrostis stolonifera)的转基因操作。经过诱导、分化、生根、炼苗及土培过程,最终获得了19株再生匍匐剪股颖植株。PCR方法检测证实:其中15株再生匍匐剪股颖植物为转化阳性;RT-PCR分析表明:15株转基因匍匐剪股颖能够转录表达ZjSGR基因;利用荧光定量RT-PCR技术筛选ZjSGR基因高水平表达的转基因植株,结果显示:10号、13号、15号表达水平最高。选择这3株表达水平最高的转基因植株,进行生理生化分析,结果显示:转基因匍匐剪股颖叶绿素含量明显降低,净光合速率显著下降,可溶性糖及丙二醛含量与野生型植株相比有所提高。以上结果表明,ZjSGR基因在匍匐剪股颖中过量表达,能够通过促进叶绿素的降解加速植物的衰老。
关键词：
ZjSGR 匍匐剪股颖 衰老 叶绿体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵静媛 陈发棣 滕年军 陈素梅
【目的】探讨地被菊株型匍匐性的遗传控制,并寻找与匍匐性连锁的RAPD标记,为匍匐型地被菊新品种选育、分子标记辅助育种和匍匐性相关基因的克隆奠定基础。【方法】以盆栽小菊品种‘早意大利红’为母本,地被菊品种‘03(6)-12’为父本构建F1群体,从F1中选取株型表现为匍匐、直立和中间型的单株各1株,分别自交,构建F2群体,并以选取的3个类型F1单株为母本与‘03(6)-12’回交,构建BC1群体。以主枝分枝角度作为株型划分依据,统计每个群体中不同株型分离比,推测地被菊株型控制相关基因特点。此外,以F1分离群体为试材,采用集团分离分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA)构建株...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
夏宏蕾 王蕾 方朝储 王敏艳 刘万鹏 沈澄 张进
【目的】河湖库塘清淤底泥用于草皮等高经济价值园林绿化植物生产，既能有效解决挤占耕地与破坏耕层问题，又能协同解决底泥等有机固体废弃物的处理难题。【方法】通过混料设计，按照底泥最大消耗原则，设置底泥、沼渣、生物质炭3种原料用量比例(体积比)分别为50%≤底泥≤100%、0≤沼渣≤50%、0≤生物质炭≤10%，共13个处理，同时设置耕作土为对照组，测定匍匐剪股颖‘本特A-4’Agrostis stolonifera ‘PENN A-4’生长指标(生物量干质量、叶绿素、根系活力)和生理指标(可溶性糖、丙二醛、抗氧化保护酶)，明确河道底泥为主料的基质代替传统耕作土种植匍匐剪股颖‘本特A-4’的可行性和适宜性。【结果】与耕作土(对照)相比，混料基质中3种原料比例(体积比)底泥为75.00%、沼渣为20.00%、生物质炭为5.00%时，匍匐剪股颖‘本特A-4’地上部分和地下部分干质量分别显著提高了58.53%和17.19%(P<0.05)，根系活力极显著提高了近1倍(P<0.01)，但匍匐剪股颖‘本特A-4’叶绿素a、b质量分数分别均极显著降低了约20.00%(P<0.01)。另外，混料基质使匍匐剪股颖‘本特A-4’超氧化物歧化酶活性极显著升高28.66%(P<0.01)，对植株体内可溶性糖质量分数、丙二醛质量摩尔浓度及过氧化氢酶活性和过氧化物酶活性影响不显著。【结论】以底泥为主料，掺混适当比例的生物质炭、沼渣的基质代替耕作土种植匍匐剪股颖‘本特A-4’是可行的，掺混的沼渣能够有效提高匍匐剪股颖‘本特A-4’地上部分生物量和根系活力，生物质炭可有效提高匍匐剪股颖‘本特A-4’地下部分生物量。图5表4参25
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨先冬 刘伟 曹利霞 李孝辉 陆怡 傅雪琳
为了探究SSSL-B50和华粳籼74(HJX74)株高差异的原因，利用SSSL-B50与HJX74回交构建F_2群体进行株高性状遗传分析与基因定位。结果显示，F_1植株表现为高秆；260个单株组成的F_2群体株高出现分离，高秆植株与半矮秆植株分离比例符合3∶1(χ~2=0.18<3.84),说明SSSL-B50高秆性状为显性性状，受1对显性等位基因控制。利用IciMapping软件对F_2进行连锁分析，将SSSL-B50携带的高秆基因定位在1号染色体代换片段上的标记S18和X161之间38.38～39.07 Mb。候选基因筛选分析发现，定位区间内存在着“绿色革命”基因座位SD1。对展颖野生稻、SSSL-B50及HJX74进行SD1基因测序及序列比对，发现HJX74的CDS序列与展颖野生稻、SSSL-B50相比有280 bp的缺失，导致氨基酸编码提前终止。qRT-PCR结果表明，SD1表达量在SSSL-B50茎秆的第2,3,4节均显著高于HJX74。此外，与前人报道结果相比，展颖野生稻SD1基因编码的氨基酸序列发生了2处改变(E100G、Q339R)。研究结果弄清楚了展颖野生稻单片段代换系SSSL-B50高秆性状受SD1调控，同时从展颖野生稻鉴定到了SD1的新等位型SD1~(Glu)。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶春秀 赵增强 张国丽 于航 庄振刚 谢宗铭
【目的】本文研究了蛋白激酶类基因在甜瓜白粉病抗性中的抗性机理。【方法】以不同抗性的甜瓜为材料,根据植物蛋白激酶类基的同源序列设计引物,采用RT-PCR方法获得该基因的中间部分序列,通过RACE法获得c DNA完整序列,将其命名为CmPKC。【结果】该基因全长约为2914 bp,开放阅读框为2493 bp,编码831个氨基酸。蛋白序列进化分析表明,CmPKC蛋白与香瓜蛋白激酶同源性最高。实时荧光定量PCR分析表明在不同抗性材料上相对表达量变化趋势不同,在抗性材料上表达丰度出现的时间较感病材料早,且在不同材料上相对表达量变化趋势与已报道的一个甜瓜感病相关MLO家族基因一致,推测所获得的基因也可能与感病相关,且属于早期应答基因;转基因烟草鉴定初步表明该基因可能还参与生长发育过程,具有促进开花的功能。【结论】将为更加深入探索其功能及在白粉病抗性通路中及生长发育过程中所起的作用奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈小云 余心怡 张仕杰 屠煦童 章镇 渠慎春
[目的]研究‘南通小方柿’(Diospyros kaki Linn.‘Nantongxiaofangshi’)乙醇脱氢酶基因DkADH1的功能,阐明其在柿果脱涩过程中的作用。[方法]构建了DkADH1基因植物双元表达载体,通过农杆菌介导法将该基因转入番茄中。以转基因和非转基因番茄株系的不同组织为材料,钨酸钠-钼酸钠比色法测定可溶性单宁含量,并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测原花青素(PA)合成途径相关基因的表达情况。[结果]经PCR和RT-PCR检测,获得了3个转DkADH1基因番茄株系。过量表达DkADH1基因的转基因番茄植株的叶片、花、果实中可溶性单宁含量均显著低于非转基因番茄植...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱洪云 旦巴次仁
【目的】探讨藏鸡NDV的毒力和F基因的遗传进化特征。【方法】从采集的藏鸡病料中分离鉴定NDV,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致死指数(ICPI)来确定分离株的毒力。采用RT-PCR方法克隆藏鸡NDV分离株F基因,测序后进行序列分析,并进行进化分析。【结果】共分离鉴定出F5、FX10、F20、F74、F75、F17、F72、FH2等8株NDV,其中F17、F72、FH2为强毒株,其余5株为弱毒株。8株病毒F基因ORF均为1 662bp,编码553个氨基酸,强毒株ORF编码产物含有12个半胱氨酸残基,弱毒株有13个半胱氨酸残基,比强毒株在27位(强毒株C27变为R27)多了...
关键词：
藏鸡 新城疫病毒 F基因
[期刊] 中国农业科学
[作者]
史毅 牛奎举 马晖玲
【目的】确定匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera)接种立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)后基因种类和表达量在转录水平的变化规律,明确草坪草病原菌侵染响应的关键基因。【方法】匍匐翦股颖生长14 d后采用麦粒培养物接种立枯丝核菌,接种3 d后选取感病叶片和未接种叶片提取RNA,进行转录组高通量测序,然后利用生物信息学分析,用Trinity组装匍匐翦股颖转录组,以组装子为参考,以|log2(fold change)|>1,q-value
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈立凯 黄明 刘永柱 王慧 陈志强 郭涛
【目的】通过对一份航天诱变水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）开颖半不育突变体Ｏｈｓｓ（Ｏｐｅｎ－ｈｕＬＬ ｓｅｍｉ－ｓｔｅｒｉＬｉｔｙ）进行形态特性调查、遗传分析和基因定位，筛选候选基因，为下一步基因克隆和功能分析奠定基础。【方法】以籼稻品种航恢七号为材料，通过＂神舟八号＂飞船搭载，诱变获得一份水稻开颖半不育突变体Ｏｈｓｓ。对其进行形态特征解剖观察，分析颖花器官发育突变特点。调查突变体和野生型的花粉可育率、自然结实率和套袋自交结实率，对其育性进行鉴定。随机选取５个成熟单株，考察穗部谷粒相关性状并进行统计分析。通过覆盖全基因组的ｓｓｒ分子标记检测，解析空间诱变的分子变异效应。以航恢七号、Ｆｒ．．．
[期刊] 草业科学
[作者]
王彬彬 李秋果 于景金 杨志民
为研究外源物对匍匐剪股颖(Agrostis stolonifera)盐胁迫的缓解作用，以匍匐剪股颖品种‘L-93’为研究对象，通过盆栽试验探究盐胁迫下叶面喷施硫酸钾(K_2SO_4)、抗坏血酸(As A)和甜菜碱(GB)对草坪质量(TQ)、叶片相对含水量(RWC)、电解质渗漏率(EL)、丙二醛(MDA)含量、离子含量和抗氧化物酶活性的影响。结果表明，盐胁迫显著降低了‘L-93’的TQ、RWC和抗氧化酶活性(P 0.05)，总体效果不如K_2SO_4和As A。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈蒙 刘海峰
为探究5GT基因在山葡萄花色苷合成过程中的表达规律及作用,以山葡萄(Vitis amurensis)为材料,利用RT-PCR技术克隆山葡萄5GT基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为GU237133),将该基因命名为Vam5GT并对该蛋白进行生物信息学分析预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测Vam5GT基因在山葡萄8个不同转色时期的表达规律,将克隆获得的Vam5GT基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli Bl2(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。并构建表达载体pC5GT并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化。结果显示:克隆获得的Vam5GT cDNA全长1 497 bp,开放阅读框1 347 bp,编码448个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为49.84 ku,等电点为5.23,是不稳定蛋白。该基因属于UDPGT超基因家族,不包含信号肽。Vam5GT在山葡萄花后4周的果皮中表达丰度最高,其他时期表达逐渐下降;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,在含50 mg/L Kanomycin的培养基上对拟南芥T_0代种子进行筛选,先后得到2个阳性幼苗,转化率为0.05%。对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵曾强 韩泽刚 李会会 李潇玲 张析 张薇
为了进一步验证ＧｈＷＲＫＹ４４（登录号：ＫＪ８０１８０７）基因在烟草异位表达后的功能，构建了Ｃａ ＭＶ３５Ｓ启动子调控、ＮｏＳ为终止子的棉花抗枯萎病相关基因（ＧｈＷＲＫＹ４４）的过表达载体；电击法将其导入农杆菌ＧＶ３１０１，菌液ＰＣＲ筛选鉴定阳性菌株，采用农杆菌介导法转化烟草；Ｔ０转化植株经卡那霉素筛选、ＰＣＲ检测后，随机从转基因Ｔ０中选取５株进行ＲＴ－ＰＣＲ检测，均为阳性株，说明ＧｈＷＲＫＹ４４基因不仅整合到烟草基因组中而且还能正常转录。对过表达ＧｈＷＲＫＹ４４基因的转基因烟草Ｔ１株系进行实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）分析。结果表明，在正常生长情况下，ＰＲ５和ＮＰＲ１的表达量在转ＧｈＷ．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
庞宏东 向林 赵凯歌 李响 杨楠 陈龙清
为研究蜡梅SAMT基因的调控功能,利用农杆菌介导法将其转入烟草中。经PCR方法对转基因烟草进行检测,结果显示:16株转化植株中有15株扩增出了目的条带,进一步的RT-PCR检测结果表明,阳性植株均发生了正确转录。对转基因烟草植株和未转基因对照植株进行植株大小、叶片形态、花色、花瓣大小以及花期进行观察,均未发现有明显差异。采用顶空固相微萃取以及气相色谱--质谱技术(HS-SPME-GC-MS)对转基因烟草鲜花进行花香成分分析,结果表明,转CpSAMT基因烟草中有较高含量的苯甲醇、己烯醇、芳樟醇、石竹烯和苯甲醛等成分,但未能检测到水杨酸甲酯和苯甲酸甲酯成分。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王秀红 史向远 白建荣 孙毅 刘惠民
利用农杆菌介导法将一个新型抗草甘膦基因导入玉米优良再生材料Hi-II中,分析基因在T0转化及后代的遗传情况,结果表明,在15株T0转基因植株中有10株,经PCR初步检测呈阳性;T1转基因植株用2%草甘膦进行抗筛选性后,4个穗行符合3∶1的遗传分离比,3个穗行符合1∶1的遗传分离比。对35个T2转基因植株以株系为单位混收进行PCR检测,结果表明,有32个T2株系表现阳性。对籽粒色泽纯度高且呈阳性的株系依次进行田间草甘膦涂抹、PCR和RT-PCR检测,结果显示,田间草甘膦筛选效果明显,植株全部存活,选10株PCR呈阳性的植株进行RT-PCR检测,9株出现1.2 kb的目的条带,说明抗草甘膦基因能够...
关键词：
抗草甘膦基因 玉米 遗传分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄胜雄 胡尚连 孙霞 曹颖 卢学琴 蒋瑶
【目的】4CL是木质素生物合成途径中的关键合成酶,通过对4CL基因的遗传进化分析,为其研究和利用提供理论依据。【方法】利用生物信息学手段,对4CL基因完整cDNA和编码氨基酸序列进行数据挖掘,利用Mega软件、ExPASy的Prosite数据库、NCBI的Conserved Domains数据库,进行4CL基因核酸和蛋白质水平上的遗传进化分析。【结果】构建了4CL基因的系统发生树,揭示出植物中的4CL基因聚类与植物分类大体一致,主要以基因家族的形式存在,但基因家族中部分基因存在着结构和功能的分化,4CL基因中存在着GC含量偏高和偏低两大类基因。4CL基因编码的氨基酸序列保守区高度相似,但是在单...
关键词：
木质素 4CL基因 遗传进化分析
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