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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱业培 王玮 吕青骎 钱行 徐幸莲 周光宏
［目的］制备鼠抗牛血清白蛋白（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ，ｂｓａ）单克隆抗体，在此基础上建立可用于定量检测动物过敏原ｂｓａ含量的间接竞争酶联免疫检测方法（ｉＣ－ｅｌｉｓａ）。［方法］采用ｂｓａ纯品为抗原免疫ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗ｂｓａ单克隆抗体，并对其特异性进行鉴定；在此基础上，建立ｂｓａ间接竞争ｅｌｉｓａ检测方法，并对其分析条件进行优化。［结果］采用自行制备的特异性抗ｂｓａ单克隆抗体，建立间接竞争ｅｌｉｓａ检测方法，优化得到最佳反应条件：抗原最佳包被浓度为０．２５μｇ·ｍ ｌ～（－１），单抗最佳工作浓度为１∶３２ ０００，酶标二抗最佳工作浓度为１∶１０ ．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王玮 滕爽 朱业培 徐幸莲 周光宏
[目的]建立一种表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,用于快速、准确、灵敏、定量检测动物过敏原牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)。[方法]将鼠抗BSA单克隆抗体偶联于SPR生物传感器芯片表面,监测BSA与抗体结合后芯片表面的变化,并基于SPR技术建立快速检测微量BSA的新方法,确定其检出限和最佳线性范围,并进行重复性验证和初步应用。[结果]抗体的偶联水平为18 000,对BSA具有良好的亲和能力;BSA质量浓度在6.25400 ng
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
布冠好 郑喆 郑海 罗永康
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05~1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
寇亚楠 马良友 罗莹 王希春 吴金节
【目的】研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法。【方法】首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。【结果】建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15mi...
[期刊] 水产学报
[作者]
高红艳 赵金龙 王雅晴 蒋秋燕 黄玉浩 林洪 李振兴
为实现甲壳类水产品主要过敏原的快速检测，实验使用凡纳滨对虾原肌球蛋白（TM）作为检测靶标，构建了胶体金免疫层析检测方法。使用天然TM分别免疫SD大鼠和新西兰大白兔制备多克隆抗体，以40 nm胶体金标记的鼠多抗作为检测抗体，以兔多抗为捕获抗体，基于双抗体夹心原理组装免疫层析试纸条，并应用于市售食物样品的检测。结果表明，组建的免疫层析试纸条可在5 min之内显示结果，视觉检出限为10 ng/mL，对虾、蟹、克氏原螯虾及美洲螯龙虾等甲壳类水产品的特异性高，但与蛤蜊、扇贝存在微弱的交叉反应；在不含甲壳类水产品的市售食品中的加标回收率为81%～126%，准确性良好；试纸条的批内、批间变异系数低于15%，市售实际食物样品的检测结果与食物过敏原标签一致。研究表明，该方法具有高灵敏度与检测特异性，可在多种基质与商业化食物样品中实现甲壳类过敏原的有效检测，具有较强的实际应用价值。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
庞文静 付明哲 张琪 何亚鹏 许信刚
【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化复性,并进行Western-blot鉴定。用复性后的N蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清中PPRV抗体水平的间接ELISA检测方法,并对其进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后用该方法对临床样品进行检测,检验其应用效果。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭楠 刘建峰 梁运祥 葛向阳
采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
闫瑞杰 张云飞 刘玲玲 张红垒 王亚宾 胡慧
【目的】制备猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白及其多克隆抗体,建立检测PDCoV N蛋白抗体的间接ELISA方法。【方法】从PDCoV CH-01毒株中扩增N全基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-PDCoV-N,转入BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组N蛋白,并对该蛋白的反应原性进行鉴定。诱导表达的N蛋白经镍柱纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。同时用镍柱纯化后的N蛋白作为包被抗原,建立PDCoV的间接ELISA检测方法,对该方法的特异性、重复性和稳定性进行检测,并利用该方法对河南部分地区猪场送检的165份临床猪血清样本进行PDCoV抗体检测。【结果】成功克隆了1 026 bp的N基因,构建了重组表达载体pET-28a-PDCoV-N,经诱导表达后获得了重组N蛋白,其相对分子质量约42.9 ku,Western blot分析表明所表达的蛋白可与抗PDCoV全病毒猪阳性血清发生反应。制备的PDCoV N蛋白多克隆抗体经Western blot检测表明,该抗体具有特异性;间接免疫荧光试验测定该多克隆抗体在ST细胞上的最佳使用稀释度为1∶200。以N蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法,确定最佳的反应条件如下:抗原2μg/mL在4℃过夜包被,10 g/L BSA在37℃下封闭2 h,血清(1∶80稀释)37℃孵育1 h,酶标二抗(1∶6 000稀释)37℃孵育1 h,TMB在37℃下显色15 min;待检血清OD_(450)值≥0.272判定为阳性。特异性试验结果显示,该包被抗原与其他猪常见病毒的阳性血清均无交叉反应,批内和批间重复试验变异系数均小于5%。用间接ELISA法对来自河南不同地区的165份血清样本进行检测,结果表明各地样本PDCoV抗体阳性率平均为53.94%。【结论】成功表达了PDCoV N蛋白,制备了其多克隆抗体,建立了PDCoV间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,可用于临床猪血清中PDCoV抗体的检测。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈如敬 周伦江 吴学敏 车勇良 王晨燕 王隆柏 黄晓凤 严山 刘玉涛 魏宏
【目的】建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。【方法】将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
温靖 于佳梁 李丹 包福祥
为建立一种针对牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotrachetitis virus,IBRV）的早期快速检测方法，并能判定免疫后是否再次发生感染，本研究利用原核表达IBRV gB蛋白，并通过SDS-PAGE和Western blot检测gB蛋白的表达，并初步建立基于gB蛋白检测IBRV的间接ELISA方法。结果表明：1）对IBRV标准阳性血清，本试验方法的最低检测限度为1∶4 096，说明建立的gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性。2）该方法对其他4种常见的牛疫病阳性血清检测均为阴性，不存在交叉反应，表明该方法具有良好的特异性。3）在对200头牛的临床样品的检测中，该方法与IDEXX(IBRV gB X3)抗体检测试剂盒符合率高达97.5%。综上，本研究建立的gB-ELISA检测方法敏感性高，特异性好，该方法为开发一种在感染早期快速对疾病进行诊断，并可以判定疫苗免疫后是否再次发生IBRV感染的试剂盒奠定基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石径 周亚迪 罗永康 江米足
研究牛乳蛋白过敏儿童血清中对4种主要乳蛋白过敏原的抗体特异性情况。采用间接酶联免疫吸附法测定乳过敏儿童血清中4种乳蛋白过敏原特异性IgE抗体。结果显示,乳过敏儿童血清中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的特异性IgE比例较高,特异性IgE阳性率分别可达44.3%和39.3%,其次α-酪蛋白和β-酪蛋白特异性IgE阳性率为31.2%和36.1%。研究结果表明,乳过敏儿童对4种乳蛋白过敏原都有一定比例的特异性IgE抗体,其中α-LA和β-LG的阳性率较高,是乳蛋白过敏儿童的主要过敏原蛋白,大部分乳过敏儿童不止对1种乳
关键词：
牛乳蛋白 过敏儿童 特异性IgE 过敏原
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
高兴军 郭明 李兵 郭建忠 李铭慧
采用荧光光谱法和紫外光谱法研究了5种二价金属离子与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,通过生物大分子猝灭反应机制和结合位点模型研究发现锌离子Zn2+,镍离子Ni2+,钴离子Co2+和钙离子Ca2+均可导致牛血清白蛋白内源荧光猝灭,Zn2+,Ni2+和Co2+离子半径处在正常范围,能有效进入牛血清白蛋白结合位点与牛血清白蛋白结合形成超分子配合物,使牛血清白蛋白的二级结构发生改变,主要表现为静态猝灭。Ca2+离子半径较大,受空间位阻影响不能有效进入结合位点对BSA二级结构影响较小,不能与BSA形成配合物,表现为动态猝灭;而Mg2+由于大的水合半径阻碍了Mg2+与牛血清白蛋白的有效碰撞,使电子或能量的...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
苏晓鸥 乔俊文 赵德明 杨利峰 周向梅 尹晓敏 杨建民
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完...
[期刊] 华北农学报
[作者]
顾昀 周晓丽 袁秀芳 杜晓莉 徐丽华 李军星 方维焕 王一成
为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复...
关键词：
猪流行性腹泻病毒 重组N蛋白 ELISA
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