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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王振华 杨武 赵晖 曾宪东 李凤新 蔡翔 王瀚昌 余浩
从加拿大进境油菜籽中随机选取船载油菜籽样品,通过特异引物的PCR扩增检测和病原菌分离鉴定,观察了油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans的发生情况。结果表明:所有来自3艘轮船的15份油菜籽样品的油菜茎基溃疡病菌PCR检测都呈阳性;随机选择的3份阳性样品的病原菌分离、鉴定与致病性测试结果证实了PCR的检测结果。
关键词：
油菜茎基溃疡病菌 检测 鉴定
[期刊] 林业科学
[作者]
廖太林 李百胜 叶建仁 纪睿 吴翠萍 安榆林 陈建东
Fusarium circinatum, the causal agent of pitch canker disease, causes several serious diseases of pines. The pathogen infects a variety of vegetative and reproductive pine structures at different stages of maturity and produces a diversity of symptoms. Long distance spread of the disease occurs when...
关键词：
松树脂溃疡病菌 分子检测 巢式PCR
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈浩 戴婷婷 吴翠萍 杨辉耀 宋必 张海峰 王源超 郑小波
[目的]传统的以ITS(内转录间隔区)为靶序列对大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora,DPC)的分子检测无法区分大豆南方茎溃疡病菌(D.phaseolorum var.meridionalis)和大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla)等近似种。笔者在大豆北方茎溃疡病菌靶标序列筛选中,发现了翻译延伸因子(translation elongation factor 1α,tef1α)序列。通过目标病原菌与其相似种比对发现,大豆北方茎溃疡病菌在tef1α序列上有很好的特异性,适合作为分子检测的靶标。[方法]基于环介导等温扩...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周大祥 熊书
[期刊] 西南农业学报
[作者]
罗怀海 舒正义 王中康 沈俊 尹勇
用浓度为１０８ｃｆｕ／ｍｌＸ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ全胞活菌免疫家兔，得到效价为１／２５６０～１／１０２４０的抗血清。应用斑点酶联法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ表明，抗血清经交叉吸收后特异性高，适宜稀释倍数为１∶１０４～１０６，检测灵敏度高可达１０４ｃｆｕ／ｍｌ。加有０．５％Ｔｗｅｅｎ２０或０．５％Ｔｗｅｅｎ８０或０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ－１００的ＴＢＳ液为适宜封闭液，酶标抗体以ＨＲＰ－ＳＰＡ较好。在检测无症样品时，与使用酶联板的ＩＭ－ＥＬＩＳＡ、ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ和ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ比较，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ快速简便，整个过程只需６小时，结果可靠。
关键词：
柑桔溃疡病菌,斑点酶联,检测技术
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
罗志萍 洪霓
选取不同浓度的柑橘溃疡病菌SOB培养液,利用载玻片进行固定、封闭、抗体结合、免疫荧光标记及荧光强度检测,以探讨免疫荧光检测技术在柑橘溃疡病菌快速检测方面的应用。结果表明,30℃下用BSA封闭2h,30℃下抗体结合1 h,荧光抗体浓度为4μg/mL,室温放置40 m in后,在荧光显微镜下可以清楚看到绿色的柑橘溃疡病菌体。该方法操作简便,检测过程仅需4 h,抗原抗体反应特异性极强,检测灵敏度可达103cfu/mL。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王凯英 高茜 严东辉
基因芯片技术因能对生物样本进行快速、高通量的定性和定量分析，而在植物病害诊断中也得到普遍的应用［１］。树木溃疡病是指引起木本植物树皮上出现溃疡腐烂等症状的病害［２］。引起杨树溃疡病的真菌种类较多，加之其无性型和有性型多样，所以，关于杨树溃疡病病原菌的报道多有不同。另外，受地理位置、寄主植物关系及分类体系的限制，迫切需要发展不依赖于常规分离培养的病原鉴定新技术。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚廷山 周常勇 胡军华 冉春 李鸿筠 刘浩强 肖田
利用微波热震惊提取固体表面柑桔溃疡病基因组DNA并加以优化,所得到的基因组DNA可作为PCR反应的模板进行16SrDNA基因有效扩增。与柑桔溃疡病基因组DNA其他抽提方法相比较,微波法更适用于该病的快速检测,具有快速、简便、费用低廉等特点,且对设备的要求不高,用特异性引物XCF/XCR可实现柑桔溃疡病菌的快速鉴定。
关键词：
柑桔溃疡病 微波 基因组DNA抽提
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王念武 王婷 沈建国 胡方平
【目的】从口岸进境番茄种子中检测番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,CMM),一直以来都受检测周期的限制,快速、特异地从种子中检测该病原细菌需要新的方法。研究在锁式探针扩增方式上,选择连接酶依赖的PCR扩增方式,并结合实时荧光PCR技术,旨在建立番茄溃疡病菌基于锁式探针技术的实时荧光PCR快速检测方法,为口岸番茄种子快速检疫提供技术支持。【方法】根据番茄溃疡病菌的一段特异基因Pat-1序列,设计锁式探针的T1和T2臂,使之与CMM的特异性片段碱基序列互补,再按照锁式探针的设计原则设计锁式探针和扩增引物以及荧光探针。试验时,先...
[期刊] 世界农业
[作者]
李丹桐 彭子芸 吴文炜 钱敏
加拿大的油菜籽产量虽然占世界油菜籽产量不到1/4,但是其出口却占到了世界贸易总量的一半以上,加拿大的油菜籽生产及出口贸易在世界上均处于领先的地位。中国的油菜籽产量占了世界的近1/3,中国应该借鉴加拿大油菜籽产业的发展经验,不断提高油菜籽产业的国际竞争力。
关键词：
加拿大 油菜籽产业 发展 启示
[期刊] 华北农学报
[作者]
田晓燕 张庆萍 王燕春 席先梅 白海
为快速检测番茄种子表面的带菌情况,以便及时有效防控番茄溃疡病,从而减少病害损失。试验用细菌基因组DNA试剂盒提取番茄溃疡病的总基因组,用通用引物进行PCR反应。以番茄溃疡病菌的DNA为模板,使用专一性引物进行PCR扩增,通过对专一性引物的筛选,最终确定了Cla F1-Cla F2为快速检测番茄溃疡病菌PCR的特异性引物。该检测方法特异性强、灵敏度高,模拟种子带菌,对浸种水的检测灵敏度达1×105CFU/m L。经PCR快速检测,22个番茄品种中只有黑贝番茄、粉红番茄和保罗塔带有番茄溃疡病菌,其余19个品种均未带菌。该方法直接对种子进行检测,不需进行病原菌分离培养,快速简便。
关键词：
番茄溃疡病菌 PCR快速检测 种子带菌
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李云锋 李祥
对柑桔溃疡菌的离体叶接种检验法进行了研究和技术规范。结果表明 ,离体叶接种法是一种效果直观可靠、操作简便易行的检验溃疡病菌的方法 ,其检测水平可达到 1.5 5× 10 3 -4 cfu/ml;其技术规范为 :供接种的柑桔品种应为甜橙类感病品种 (如脐橙 ) ,供接种的离体叶片以达到定型大小的新梢成叶最佳 ;采用针刺后滤纸片贴敷菌液接种 ,最适孵育温度为 2 8～ 32℃ ,最佳保湿方法为吸水纸保湿法。
关键词：
柑桔 溃疡病菌 离体叶接种 检测
[期刊] 林业科学
[作者]
冯小慧 张星耀 严东辉
利用真菌通用引物ITS1/ITS4,EF1-728F/EF1-986R对4种杨树溃疡病病原菌株和环境样本的核糖体DNA内部转录间隔区ITS序列和转录延伸因子EF-1α基因序列分别进行普通和多重PCR检测,再进行测序比对分析。结果表明:退火温度为55.6℃,各引物终浓度为0.2μmol·L-1,可以成功地扩增出菌株和环境样本的目的条带,并通过测序比对鉴定出多种来自培养和环境病害组织中的溃疡病病菌,多重PCR能够检测到1ng的基因组DNA。研究结果将为建立溃疡病病原多重PCR鉴定技术和以环境溃疡病病害样本为直接检测鉴定对象的高通量的基因芯片检测方法奠定基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
田璨熙 宋金秋 向晓寒 崔丽红
【目的】研究高效筛选猕猴桃溃疡病致病菌的新方法对湘西地区感染溃疡病的猕猴桃植株进行快速病菌分离与鉴定。【方法】以一年生猕猴桃枝条对不同糖浓度和氮浓度基质耐受情况为依据和柯赫氏法则来验证高效筛选病原菌方案的可行性与提取经筛选得到猕猴桃溃疡病病菌的DNA并扩增16Sr DNA进行系统发育树分析。【结果】本实验得到一高碳氮比(C∶N=10∶1)的筛选培养基,其对猕猴桃溃疡病致病菌筛选效率优于目前已报道的筛选基质;经筛选获得溃疡病致病菌为丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种,与目前已报道的丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种亲缘
[期刊] 西南农业学报
[作者]
尹良芬 马琼瑶 陈育
本文对云南昆明地区由Phomopsis amygdali侵染引起的桃树溃疡病进行了鉴定。采集受害病枝到实验室分离培养,进行形态学鉴定。结果表明:分离菌在PDA培养基上菌落灰色、绒毛状,从菌落的背面可看到有淡褐色的色素形成;分生孢子无色、子弹状、双细胞,大小为3.7μm×8.7μm。进行ITS系列分析:提取其基因组DNA,PCR扩增产物测序,对所测序列在NCBI中进行Blastn分析比对,结合在寄主植物上的症状,分离菌的生物学特性等,判断该分离病菌为桃溃疡病菌Phomopsis amygdali。最后进行回接实验,把分离到的病菌接种到健康的桃果实上,观察接种桃子发病情况及症状,比较从发病桃子上再...
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桃树 溃疡病 鉴定
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