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[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚艳丽 胡小文 邢淑莲 徐磊 张树珍 刘洋
本文以高粱超氧化物歧化酶基因（ＮＣＢＩ登录号为ＸＭ ００２４４５６２６．１）Ｃ ＤＮＡ序列为探针，对甘蔗ＥＳＴ数据库进行同源检索、筛选和拼接，通过分子克隆和序列分析验证，获得了１个割手密铜锌超氧化物歧化酶基因全长Ｃ ＤＮＡ序列（ＳＳ ＳＯＤ－１Ａ，ＧＥＮＥ ＢＡＮｋ登录号为ｋＪ００２５７１）。序列全长７０３ Ｂｐ，由６２４ Ｂｐ的开放读码框，３６ Ｂｐ的５’非翻译区和４３ Ｂｐ的３’非翻译区组成，编码２０７个氨基酸。氨基酸保守结构域分析表明，该蛋白序列具有铜锌超氧化物歧化酶保守结构域，属于ＳＯＤ家族。氨基酸同源性分析发现，割手密ＳＳ ＳＯＤ－１Ａ蛋白序列与鹰嘴豆、高粱、玉米等物种同源关系较近。
关键词：
割手密 超氧化物歧化酶 基因克隆 PCR
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚艳丽 胡小文 邢淑莲 徐磊 张树珍 刘洋
本文以高粱超氧化物歧化酶基因(NCBI登录号为XM 002445626.1)c DNA序列为探针,对甘蔗EST数据库进行同源检索、筛选和拼接,通过分子克隆和序列分析验证,获得了1个割手密铜锌超氧化物歧化酶基因全长c DNA序列(Ss SOD-1a,Gene Bank登录号为KJ002571)。序列全长703 bp,由624 bp的开放读码框,36 bp的5’非翻译区和43 bp的3’非翻译区组成,编码207个氨基酸。氨基酸保守结构域分析表明,该蛋白序列具有铜锌超氧化物歧化酶保守结构域,属于SOD家族。氨基酸同源性分析发现,割手密Ss SOD-1a蛋白序列与鹰嘴豆、高粱、玉米等物种同源关系较近。
关键词：
割手密 超氧化物歧化酶 基因克隆 PCR
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张静文 张力文 严云香 常义 陈艳 李欣勇
【目的】铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)在保护细胞和组织免受氧化损伤方面起重要作用。对滨海植物草海桐盐胁迫诱导的Cu/Zn-SOD进行克隆和序列分析，为揭示草海桐适应盐碱环境提供理论依据。【方法】以盐胁迫的草海桐为材料，运用RACE技术克隆草海桐Cu/Zn-SOD,命名为SsCSD,采用生物信息学方法进行序列分析，构建pBinGlyRed-SsCSD重组质粒。【结果】通过RACE技术获得SsCSD基因全长共1148 bp,其最大开放阅读框(ORF)为687 bp,编码228个氨基酸。氨基酸保守结构域分析表明，该序列具有铜锌超氧化物歧化酶保守结构域，属于SOD家族。生物信息学分析表明其定位于叶绿体中，氨基酸序列分析显示其与已知植物叶绿体Cu/Zn-SOD的氨基酸残基高度同源。同时将SsCSD基因与植物表达载体pBinGlyRed进行重组，并成功转入农杆菌GV3101中。【结论】草海桐铜锌超氧化物歧化酶氨基酸序列与同源物种相似度高，在进化上高度保守，对进一步通过转基因验证该酶生物学功能具有重要意义。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱海生 刘建汀 陈敏氡 李永平 王彬 张前荣 叶新如 林珲 温庆放
【目的】克隆丝瓜铜/锌超氧化物歧化酶Cu/Zn-SOD基因家族,并分析其序列特征、表达情况及其在丝瓜褐变中的作用,为进一步揭示丝瓜褐变的发生机理提供科学依据,为丝瓜品种遗传改良奠定基础。【方法】通过转录组测序和RT-PCR方法获得丝瓜Cu/Zn-SOD基因家族的c DNA序列,采用生物信息学方法分析氨基酸序列,利用荧光定量PCR技术研究Cu/Zn-SOD基因家族在不同组织及褐变条件下的表达情况。采用氮蓝四唑(NBT)光还原法测定总超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用福林-酚比色测定总酚含量。【结果】获得了3
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田燚 马增艳 常亚青
以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA。该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67bp,3′端非编码区216bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白。该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽。其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的...
关键词：
仿刺参 MnSOD 基因克隆 序列分析
[期刊] 林业科学
[作者]
李琳玲 程华 许锋 王燕 姜德志 程水源
利用RACE技术首次从银杏中克隆得到铜锌型超氧化物歧化酶基因(GbCuZnSOD)的cDNA序列。GbCuZnSOD的cDNA全长为783bp。基因内部含有1个长度为642bp开放阅读框,编码长度为213个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为21.95ku,等电点为6.82。三维结构预测结果显示,GbCuZnSOD含有3个转角环和8个β折叠构成桶状的活性中心。GbCuZnSOD氨基酸序列与其他植物的CuZnSOD具有很高的相似性。进化树分析结果表明GbCuZnSOD和其他物种的CuZnSOD源自于相同的祖先。信息学分析显示,得到的GbCuZnSOD属于叶绿体SOD。Southern杂交证实,Gb...
关键词：
银杏 CuZnSOD基因 表达分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曾秀存 孙万仓 孙佳 许耀照 方彦 史鹏辉 杨刚 孔德晶 武军艳 刘自刚
【目的】了解SOD酶蛋白家族Fe-SOD在超强抗寒冬油菜中的表达情况及其在低温胁迫下的作用。【方法】采用RT-PCR技术克隆超强抗寒白菜型冬油菜陇油7号Fe-SOD的cDNA序列。对该序列进行生物信息学分析,采用半定量以及相对定量RT-PCR研究Fe-SOD在低温胁迫下的表达模式,采用氮蓝四唑(NBT)光还原法测定冬油菜叶片和根中的总SOD酶活性。【结果】获得Fe-SOD,GenBank登录号为KF178713,该基因cDNA片段全长645 bp,包含一个639 bp完整的开放阅读框,编码212个氨基酸的蛋白质,与白菜(Chiifu)的蛋白质氨基酸序列同源性高达99%。该基因编码的酶蛋白是1个...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
肖俊 许亮清 胡向萍 程周玉 胡宝庆 简少卿 阳钢 文春根
超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a+Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScC
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王继庆 任毅 时晓磊 王丽丽 张新忠 苏力坛·姑扎丽阿依 谢磊 耿洪伟
【目的】小麦籽粒超氧化物歧化酶活性对小麦面粉色泽和营养品质具有重要影响,挖掘与小麦籽粒超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性显著关联位点及候选基因,为揭示小麦籽粒SOD活性的遗传机理和小麦面粉色泽的遗传改良奠定基础。【方法】采用氮蓝四唑(nitro-blue tetrazolium,NBT)光化还原法对3个环境下种植的212份普通小麦品种(系)进行SOD活性检测,结合90K SNP芯片的16 705个高质量SNP标记对小麦籽粒SOD活性进行全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS),并对稳定遗传的显著关联位点进行候选基因的挖掘。【结果】不同环境下,各小麦品种(系)间的SOD活性表现出丰富的表型变异,变异系数为4.34%—5.23%,相关系数介于0.60—0.90(P
[期刊] 水产学报
[作者]
王小龙 宋青 王志勇 韩芳
锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是一种含金属辅基的抗氧化酶,广泛存在于各种需氧生物中,能将氧自由基快速歧化为分子氧(O_2)和过氧化氢(H_2O_2)。本研究首次获得了黄姑鱼MnSOD基因的cDNA序列,其全长958 bp,包括47 bp的5′端非编码区(untranslated region,UTR)、233 bp的3′UTR和678 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码225个氨基酸残基(aa)。氨基酸序列分析显示,MnSOD含有一条信号肽序列(1～27 aa),4个Mn结合位点(His 53、101、190和Asp 186)和一条保守的锰/铁SOD特征序列(186～193 aa)。系统进化树分析显示,黄姑鱼MnSOD在进化上与大黄鱼最近,并与其他鱼类(斜带石斑鱼、暗纹东方鲀、牙鲆、斑马鱼和日本鳗鲡)聚为一支。荧光定量PCR检测显示,MnSOD基因在所检测的11个黄姑鱼组织/器官中均有表达,其中心脏中表达量最高,其次为脑、肝脏、鳃、中肾、肠、胃、头肾、肌肉和鳔,在脾脏中表达量最低。氨氮和亚硝态氮对黄姑鱼的急性毒性实验显示,黄姑鱼对氨氮胁迫更为敏感,其氨氮和亚硝态氮的96 h半致死浓度(LC50)分别为20.23 mg/L (换算成非离子氨0.57 mg/L)和99.08 mg/L,安全浓度分别为2.02 mg/L (换算成非离子氨0.06 mg/L)和9.91 mg/L。此外,黄姑鱼经氨氮和亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾中MnSOD基因的表达水平均不同程度上调,推测MnSOD的上调是为了及时清除由氨氮和亚硝态氮刺激产生的氧自由基,或可用作水体污染检测的早期生物标志物。
关键词：
黄姑鱼 锰超氧化物歧化酶 氨氮 亚硝态氮
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡根海 喻树迅 范术丽 宋美珍
【目的】克隆编码棉花胞质铜锌超氧化物岐化酶基因并分析其表达特性。【方法】采用RACE技术克隆基因,Northern blotting检测基因的表达谱;采用氮蓝四唑(NBT)光下还原法测定不同生育期的酶活性。【结果】获得了棉花胞质铜锌超氧化物岐化酶基因cDNA全长序列(GenBank注册号:DQ445093);该基因cDNA全长共682bp,开放阅读框456bp,编码152个氨基酸。分子结构预测结果:酶蛋白理论分子量约为15.03kD,理论等电点为6.09,与其它植物的蛋白质氨基酸序列同源性在82%～87%之间。Southern blotting显示不同棉种该基因的拷贝数基本一致,均属于低拷贝基...
关键词：
棉花 铜锌超氧物歧化酶 基因 克隆
[期刊] 水产学报
[作者]
吴燕燕 李来好 郝志明 岑剑伟 陈胜军 周婉君 杨贤庆 刁石强
以奥尼罗非鱼肝脏为原料,研究加热法提取超氧化物歧化酶(SOD)的工艺条件,丙酮沉淀回收酶法和HitrapTMQ FF阴离子柱纯化Cu,Zn-SOD,并对其酶学性质进行分析。结果表明加热法提取SOD时,在缓冲液中加入10mmol.L-1CuCl2,调节pH为5.6,65℃进行加热处理,可以提高SOD粗酶的稳定性和得率,其得率为57%,粗酶比活为(2580±6)U.mg-1。对酶的酶学性质研究表明纯化后SOD比活为(4895±2)U.mg-1,SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为36ku,最大紫外吸收波长为265nm。该酶在pH6.0~9.0具有较好的稳定性,在75℃以下稳定,具有较好的耐...
[期刊] 水产学报
[作者]
李亚男 陆霖青 张鹏 张博 林蠡 秦真东
为了解超氧化物歧化酶（SODs）分子生物学特性和免疫功能，实验克隆了罗氏沼虾胞质锰SOD基因（MrcMnSOD），制备多克隆抗体，并分析在嗜水气单胞菌感染下该基因的表达模式。结果显示，嗜水气单胞菌感染可显著诱导MrcMnSOD在转录水平和蛋白质水平进行高表达。为探究MrcMnSOD参与免疫应答的机制，进一步的抑菌实验表明，该蛋白质可显著抑制3种革兰氏阴性细菌（大肠杆菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌）和2种革兰氏阳性细菌（无乳链球菌、金黄色葡萄球菌）的生长，且抑制作用与蛋白质浓度的关系不显著。结果表明MrcMnSOD可能作为一种免疫相关分子参与免疫应答反应。本研究初步探讨了MrcMnSOD的免疫生物学功能，旨在为罗氏沼虾SOD的深入功能研究奠定相关基础。
关键词：
罗氏沼虾 MnSOD 表达模式 抑菌
[期刊] 水产学报
[作者]
唐学玺 张培玉
采用毒性实验的方法 ,研究了蒽对黑鱼君几种组织的超氧化物歧化酶活性的影响。结果表明 :1 .不同的组织其SOD活性高低不同 ,按SOD活性由高到低的顺序依次排列为 :肝 >血清 >肾 >鳃 >肌肉 ;2 .不同的组织 ,其SOD活性对蒽的敏感性有所差异 ,按敏感性由大到小的顺序依次排列为 :血清 >肝 >鳃 >肌肉 >肾。3.不同组织的SOD活性在蒽胁迫下的变化规律不同。低浓度的蒽引起鳃、肾、肌肉组织的SOD活性升高 ,随着蒽浓度的提高 ,SOD活性又表现出抑制效应 ;而蒽对血清及肝组织的SOD活性从低到高浓度下始终呈现出抑制作用
关键词：
黑鱼君 蒽 超氧化物歧化酶
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李潇楠 王爽 王琦
为得到高表达超氧化物歧化酶毕赤酵母工程菌株,促进SOD的产业化生产,将来源于蜡样芽孢杆菌M22菌株的Mn-SOD-2基因转入毕赤酵母GS115中,构建了表达工程菌株YS 1～100。采用PTVA法(Posttransformational vector amplification)进行拷贝数扩增处理。建立了SOD重组菌株MMH(Minimal Methanol+Histidine)平板简易检测法,使用该法对转化子进行初筛,并用荧光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR)法检测部分重组酵母工程菌中外源SOD基因的拷贝数。结果表明:试验中得到80株高抗Zeocin的...
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