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[期刊] 华北农学报
[作者]
李军星 王一成 袁秀芳 徐丽华 曹会敏 申世川 张鲁滨
CDT毒素是多种革兰氏阴性致病菌的毒力因子。为了阐明CDT毒素在副猪嗜血杆菌不同菌株中的分布及其遗传变异情况,本试验对从浙江省不同地区猪场临床发病猪中分离到的41个副猪嗜血杆菌分离株进行了CDT基因PCR扩增,并对其中21个分离株CDT 3个亚基进行了基因测序及氨基酸序列分析。结果表明:所有41个临床分离株中都可以检测到CDT 3个亚基的基因,其中cdtA蛋白的氨基酸序列在不同副猪嗜血杆菌菌株中最为保守,同源性≥97.8%;cdtB及cdtC蛋白氨基酸序列变化较大,同源性均≥92.1%。其中cdtB亚基与牛DNase I活性关键位点的氨基酸残基具有一致性,且这些位点的氨基酸残基在不同菌株中高度...
关键词：
副猪嗜血杆菌 CDT 同源性
[期刊] 华北农学报
[作者]
忽占利 李军星 胡松华 王一成 袁秀芳 徐丽华
为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示:对磺胺类耐药的分离株比例高达86.30%,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65.75%,60.27%,50.68%,50.68%,46.58%,对大环内酯类耐药仅为28.77%。PCR分析显示:97.26%的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84.93%。其中喹诺酮类耐药基因Aac(6')-1b的检出率为76.71%,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为...
关键词：
副猪嗜血杆菌 耐药性 耐药基因
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈欣 刘维哲 王超 黄晨 李睿 尹荣兰 陈媛媛 尹荣焕
副猪嗜血杆菌(HPS)是感染猪产生浆膜炎、关节炎、脑膜炎的病原菌,为明确辽宁省副猪嗜血杆菌tbp A基因的保守性、遗传变异情况以及功能,以复苏培养后的菌株为研究对象,利用细菌学常规技术和PCR方法对HPS及其血清型进行验证,将目的基因连接于T5载体上,并转化到大肠杆菌感受态细胞中,获得克隆质粒,对不同血清型该基因序列进行PCR鉴定。通过NCBI网站中BLAST进行序列比对,并且运用DNA star软件进行核苷酸同源性分析和遗传变异规律分析。通过在线软件对tbp A编码蛋白的氨基酸组成、分子量、等电点、亲疏水性以及二级结构等进行分析。结果表明:从保存菌的HPS中成功复苏了4型、5型、9型和14型菌株;经PCR扩增这4种血清型HPS的tbp A基因长度均为2700bp;tbp A基因与参考菌株核苷酸同源性范围为86.5%~97.9%,4型和5型tbp A基因与84~(-1)5995、84~(-1)7975、H425亲缘性较近,9型tbp A基因与SW124和174亲缘性较近;14型tbp A基因与NO.4亲缘性较近;4种血清型tbp A基因与瑞典菌株D74在两个不同分支上,具有较远的亲缘关系。4种血清型tbp A基因编码蛋白分别有874,871,918,915个氨基酸组成;等电点分别为9.51,9.30,8.65,8.76;该蛋白属于亲水性蛋白;该蛋白的二级结构主要由α螺旋、无规则卷曲和伸展链构成。tbp A基因与美国株84~(-1)5995(KT588784.1)、德国株H425(KT588778.1)、日本株NO.4(KT588774.1)同源性相对较高,亲缘关系较近,但是也存在一定的差异性,该结果可为建立HPS最新基因突变跟踪提供参考依据;同时,通过对tbp A蛋白进行生物学信息分析,为进一步研究tbp A基因的功能奠定了分子基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵良友 高雪丽 刘超男 申海龙 姜南 万伟泉 吕晓萍 郑世民
为了探究副猪嗜血杆菌外膜脂蛋白编码基因vacJ在其致病中的作用,以血清5型临诊分离株HS49为研究对象,构建了vacJ基因缺失菌株(ΔvacJ),进而比较了野生株与缺失株在生长特性、对细胞的黏附及入侵和毒力等方面的差异。结果显示,与野生株相比较,缺失vacJ后的菌株生长速率明显下降,对PK-15细胞的黏附和入侵能力则明显降低,形成生物被膜的能力也显著下降。缺失vacJ菌株对Balb/C小鼠感染模型的LD_(50)是野生株的14倍,表明vacJ基因敲除后,副猪嗜血杆菌毒力明显下降。表明vacJ基因与副猪嗜血
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
宋帅 李春玲 杨冬霞 李淼
副猪嗜血杆菌可引起猪的格氏病,其不同毒力菌株分子水平上的差异还不清楚。从广东省不同地区猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1～H9),并对其16SrRNA基因进行鉴定和分析。经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定,所分离的9株细菌为阳性副猪嗜血杆菌,具有卫星现象和不溶血特征。用hhdA基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,所获得的hhdA基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165、HPS59的hhdA基因的同源性为98%～99%,获得的分离菌株hhdA基因的同源性为99.0%～99.9%,菌株H1(5型)、H2(5型)、H8(4型)、H9(12型)hhdA基因在遗传进化关系上处于同一进化分...
关键词：
副猪嗜血杆菌 hhdA基因 克隆
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋帅 李春玲 杨冬霞 李淼
为了明确副猪嗜血杆菌致病菌株的毒力相关因子,从广东省不同地区发病猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1~H9),并对其hhdB基因进行了鉴定和分析。结果显示,所分离的9株细菌经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定为副猪嗜血杆菌阳性,并具有卫星现象和不溶血特征。用hhdB基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,序列分析表明,所获得的hhdB基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165的hhdB基因同源性为99%,分离菌株hh-dB基因之间序列同源性为97.5%~99.8%,推导的氨基酸序列与少数放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌的溶血素激活蛋白具有一定的相似性。RT-PCR扩增到了hhdB基因的目的条带,...
关键词：
副猪嗜血杆菌 hhdB基因 克隆 分析
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
周媛媛 张学谅 王静 陈欣 李睿 尹荣兰 王超 黄晨 尹荣焕
为探究副猪嗜血杆菌同一血清型不同菌株间毒力相关基因的差异以及LpxC基因的遗传特性,本试验设计35种毒力相关基因的特异性引物,对副猪嗜血杆菌血清型4型的两种菌株进行PCR验证,并将两株菌株的LpxC基因连接到T5载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞中进行克隆及测序,得到921bp目的片段。在NCBI上进行比对分析,运用DNA star软件对LpxC基因进行核苷酸同源性比对,同时对LpxC基因编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:35种毒力相关基因中除SapA基因,其余34种在两个菌株中共同存在,两株HPS的LpxC基因序列与各参考菌株之间的同源性均在97%～100%之间,说明LpxC基因在副猪嗜血杆菌中保守存在。系统进化树结果显示XM1602菌株LpxC基因与SH0165菌株处于同一分支,FS0035菌株LpxC基因与ZJ0906菌株处于同一分支。同时,菌株FS0035和XM1602的LpxC基因编码的蛋白质等电点分别为5.59和5.45;该蛋白质为亲水性蛋白,无跨膜结构;二级结构包括α螺旋、伸展链、β转角和无规卷曲。结果证实,同一血清4型,两株不同的副猪嗜血杆菌菌株在毒力相关基因上存在一定的差异;LpxC基因在两个菌株中保守性较高,变异性较低。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小宁 余兴龙 李润成 颜运秋 刘俊琦 罗维 杨大为 葛猛 王亚 李薇
从湖南省内送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎的猪病料中分离到12株细菌,细菌学试验证明12株细菌均符合副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)形态、培养和生化特性.根据HPS16SrRNA序列设计引物对12株细菌进行PCR扩增,均得到预期目的条带,将扩增片段测序并运用DNAStar软件与GenBank中不同血清型HPS基因序列进行比对,表明其与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株16SrRNA序列的同源性为90.4%～99.9%,其中与血清5型同源性最高,对所测序列与参考序列进行遗传进化树分析,结果表明其中11株属于血清5型HPS.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王大鹏 吴家强 于江 丛晓燕 杜以军 孙文博 张玉玉 时建立 李俊 周顺 王金宝
本文对副猪嗜血杆菌血清5型生长曲线进行了研究。结果表明:种子液接种后6 h开始进入对数生长期,培养24 h后活菌数达到最高峰,20～30 h活菌数维持在同一个水平,进入稳定期,30 h后活菌数呈现下降趋势,进入衰退期。该曲线提供了副猪嗜血杆菌生长规律,为疫苗研制提供了理论基础。
关键词：
副猪嗜血杆菌 血清5型 生长曲线 致病力
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马艳平 张杰 陈豪泰 马丽娜 丁耀忠 杨生海 刘永生
副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPG)是鸡传染性鼻炎的病原菌。近年来,北京、陕西、四川等地证明了该病的发生。为了了解该病在山东省的流行状况,从山东德州地区5个鸡场的20只疑似鸡传染性鼻炎鸡体内共分离到6株细菌,经细菌分离培养、生化试验、鸡胚接种试验和16s rDNA基因序列分析等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。并经玻片凝集试验、Dot-ELISA、血凝试验分型研究,证实6株分离菌株均为副猪嗜血杆菌A型。从而为以后鸡传染性鼻炎的免疫治疗提供理论依据。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李曦婷 王超 薛彦杰 李化生 张翔 尹荣兰 董俏 刘梦志 李睿 尹荣焕
在沈阳某规模化养猪场疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性多形态杆菌，根据培养特性、生化试验结果、副猪嗜血杆菌１６ｓ ｒ ｒＮＡ的ＰＣｒ检测以及对ＰＣｒ产物进行测序，测序结果比对显示该分离株与ＧｅＮ ＢＡＮｋ中的ＨＰｓ同源性为９９％，因此将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明：分离株对羧苄西林、氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、头孢哌酮药物较敏感；对卡那霉素、复方新诺明、头孢他啶、四环素耐药。１６ｓ ｒ ｒＮＡ遗传进化关系显示：分离株与副猪嗜血杆菌２株血清５型的１６ｓ ｒ ｒＮＡ序列位于一个分支上，遗传进化关系比较相近，核苷酸同源性在９７．４％～１００％之间，可初步．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡旭旺 刘正飞 陈焕春 吴斌 金梅林 Pat Blackall
从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到 32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌 16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增, 将 822bp扩增片段连入T 载体后测序, 再与GenBank(M75065 )中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株 16SrRNA序列的同源性为 97%以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis, Hps)。将其中的 15株按Kieletein Rapp Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清 5型 3株、血清 4型 4株、血清 13型2株、...
关键词：
副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 PCR 血清型
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李程鹏 孙一丁 刘辉 曾千春 王炎炎 马继琼 杨奕 许明辉
ＯｓＨＭＡ２是水稻根和地上部一个主要的Ｚｎ和Ｃｄ的转运蛋白，在水稻基因组ＯｓＨＭＡ２位点存在ＯｓＨＭＡ２类似基因ＯｓＨＭＡ２－ｌｉｋｅ，编码蛋白包含水稻Ｐ１Ｂ型ＡＴＰ酶重金属转运蛋白的功能域。对来自世界不同稻区的２７份亚洲栽培稻和８份野生稻基因ＯｓＨＭＡ２－ｌｉｋｅ编码区序列进行了测序分析，以了解水稻ＯｓＨＭＡ２－ｌｉｋｅ序列的多样性，为发掘基因资源提供信息。ＯｓＨＭＡ２－ｌｉｋｅ核苷酸序列和氨基酸序列分析表明，在４７１ＢＰ的编码序列内发现了６个变异位点；ＴＡｊｉＭＡ＇ｓｄ检验表明均不显著，说明这些位点属中性进化状态；６个变异位点中，第１５、７８、１３２、２１４、４１７位点碱基不引起氨基酸的变．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢乐新 李淼 宋帅 岳磊 杨冬霞 李春玲
为获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的分段表达产物,并对各片段的免疫学性质进行鉴定。采用生物信息学软件分析Omp P5全长基因,设计3对分段引物,PCR分别从HPS汕头分离株(H0801)Omp P5中扩增出P5F1、P5F2和P5F3基因片段,构建于pET-32a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析蛋白表达情况。将蛋白纯化后,利用ELISA及Western Blot分别鉴定其免疫原性及抗原性。结果表明,扩增得到的Omp P5的3个基因片段与预期大小相符合,基因测序结果与GenBank公布的序列一致,经SDS-PAGE分析,3...
关键词：
副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P5 抗原性分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王晶钰 罗艳 邓小敏 郭抗抗 张彦明
为了研究IBV陕西分离株M基因的遗传变异情况及分子特征,参照NCBI所登录的IBVM基因序列设计了1对引物,应用RT-PCR方法对陕西8株IBV分离株的M基因进行扩增,并构建克隆载体,对阳性质粒测序后进行核苷酸序列及氨基酸序列同源性和进化发生关系分析,并对M蛋白的二级结构和跨膜区进行预测。结果表明,8个IBV分离株间的M基因核苷酸和M蛋白氨基酸同源性分别为92.3%~99.8%和95.4%~100%,分离毒株与参考毒株的M基因核苷酸和M蛋白氨基酸序列同源性分别为87.4%~99.5%和89.4%~99.5%;分离毒株与参考毒株M蛋白的α-螺旋结构主要分布在N端前100氨基酸肽段区,其他的部分主...
关键词：
IBV M蛋白基因 遗传变异 分离株
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