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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘海泉 江春铃 赵伟 钱江 潘迎捷 胡金庆 赵勇
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一种常见的革兰氏阴性细菌，主要分布在海洋、海口和河口沉积物中，能够引起人急性肠胃炎、伤口感染和败血症，同时危害水产品养殖业。由该菌引起的食物中毒事件在全世界范围内频繁发生，该菌被认为是微生物性食物中毒的主要病原菌之一。影响副溶血性弧菌致病性的毒力因素包括溶血素、黏附因子、分泌系统等，尤其在分泌系统中，Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion systems, T3SS)和Ⅵ型分泌系统(T6SS)与副溶血性弧菌致病性密切相关。T3SS是一种多亚基针状结构，将分泌蛋白通过供体细胞质直接注入受体细胞质；T6SS是一种接触依赖性蛋白分泌装置，将毒素直接注入目标细胞内。通过对Ⅲ型分泌系统和Ⅵ型分泌系统的研究进展进行梳理，从这两种分泌系统的结构出发，并对其功能和调控机制分别进行分析比较，指出了二者在效应蛋白及产生毒素上的不同，找出了二者与副溶血性弧菌定植的关系，以期通过这两者的联系进而深入了解副溶血性弧菌的致病机制，为防治该菌提供科学指导。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
穆丽丽 牛犇 张昭寰 王思琦 王敬敬 刘海泉 潘迎捷 赵勇
对85株副溶血弧菌的Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system, T6SS)相关基因的携带情况进行分析,并选取部分副溶血弧菌菌株进行混合培养,探究其种内竞争情况。利用qPCR技术,分析混合培养后T6SS相关基因的表达情况。结果表明:85株副溶血弧菌均携带T6SS2,62株副溶血弧菌携带T6SS1,其中临床分离株41株,占全部临床分离株的93.2%;环境分离株21株,占全部临床分离株的51.2%,并且T6SS1基因簇在不同来源的副溶血弧菌中存在一定的差异性。在混合培养条件下,部分T6SS1~+的副溶血弧菌存在明显的种内竞争优势。基因表达分析结果显示,较单一培养的菌株,混合培养中副溶血弧菌T6SS1和T6SS2相关基因的表达量均有明显的上调。导致这一现象的原因可能是在混合培养的条件下,副溶血弧菌可通过增强自身T6SS1和T6SS2相关基因的表达,以提升其在种内的竞争力。初步探究了副溶血弧菌Ⅵ型分泌系统对其种内竞争的影响,为副溶血弧菌T6SS功能的进一步揭示提供科学的参考。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
吕为群 刘爽 钟英斌
尾部神经分泌系统是鱼类特有的神经分泌系统,位于脊髓末端,是鱼类适应环境的关键。该系统作为应激系统的一部分,在鱼类生理和行为方式等多方面具有综合调节作用。综述了自19世纪末尾部神经分泌系统被发现以来,尤其是近年来生物学家在该系统形态结构及组成、主要内分泌细胞(Dahlgren细胞)及其分泌物的功能和生理调节、神经支配等方面的研究成果,以及一些环境变化引起的应激反应与尾部神经分泌系统的相关性的研究。为研究该系统相关分泌肽及其功能提供更为广泛的参考,同时为进一步了解相关分泌肽在高等脊椎动物甚至人类中的功能提供借鉴。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王璐华 宁喜斌
通过测定2株副溶血性弧菌4~40℃的生长曲线,研究它们的生长规律,运用预测食品微生物学的方法,分别对它们建立初级和二级预测模型。结果表明,副溶血性弧菌的生长曲线在低温阶段,适用线性回归方程拟合;在适温阶段,生长曲线都呈典型的S形,适合用Gompertz模型拟合。二级模型采用平方根方程的扩展式Ratkowsky3式拟合,根据二级预测模型,分别得出副溶血性弧菌的最低生长温度Tmin,最高生长温度Tmax和最适生长温度。模型验证表明,预测值和实测值的残差都在±0.05范围内,偏差因子和准确因子均在可接受范围内,模型是可靠的。最后,讨论了模型的应用前景。
关键词：
预测微生物学 模型 副溶血性弧菌 温度
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘代新 宁喜斌
运用PCR技术成功建立了检测产耐热直接相关溶血素(TRH)的副溶血性弧菌的方法,并应用该方法从1株标准株和其他3种不同来源的37株副溶血性弧菌中的13株扩增出0.5 kb的trh基因特异性扩增带;产TRH的副溶血性弧菌中1株标准株,12株分离自腹泻病人排泄物或呕吐物,1株分离自水产动物养殖用水;并且产TRH与尿素酶阳性的副溶血性弧菌菌株之间的具有一一对应的关系,结果认定尿素酶阳性是产TRH的副溶血性弧菌菌株的表现型。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙志华 张辉 刘来珍 刘娟 韩玉霞 关团 王浩 陈创夫
【目的】克隆布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子ＢＰＥ１２３和ＢＰＥ２７５的基因并进行诱导表达。【方法】从牛种布鲁氏菌２３０８株基因组中ＰＣＲ扩增ＢＰＥ１２３和ＢＰＥ２７５基因片段，亚克隆到ＰＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体中并测序。将ＢＰＥ１２３和ＢＰＥ２７５基因克隆至融合表达载体ＰＥＴ－２８ａ，构建表达重组质粒ＰＥＴ－２８ａ－ＢＰＥ１２３和ＰＥＴ－２８ａＢＰＥ２７５，在大肠杆菌中进行诱导表达，ＷＥｓＴＥＲｎ ＢｌｏＴ分析重组蛋白Ｈｉｓ－ＢＰＥ１２３和Ｈｉｓ－ＢＰＥ２７５的免疫学特性。【结果】ＰＣＲ扩增获得了４６２ＢＰ的ＢＰＥ１２３基因片段和７６２ＢＰ的ＢＰＥ２７５基因片段，成功构建了ＰＥＴ－２８ａ－ＢＰＥ．．．
关键词：
布鲁氏菌 Ⅳ型分泌系统 效应蛋白
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱勃 金谷雷 怀雁 谢关林
【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法,通过BLAST程序对梨火疫病菌基因组的核苷酸数据库进行同源比对,同时对Erwinia spp.与宿主互作的表面蛋白HrpA进行选择压分析。【结果】TTSS分析结果显示在40kb大小的毒力岛上有27个TTSS相关基因。通过与看家基因及毒力岛上的致病性相关的重要基因Hrp...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张家莉 潘永 段世宇 令狐远凤 郑如雯 杨琦
细菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)与毒力密切相关。为探究鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对T3SS相关基因spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK的调控，利用Red同源重组技术构建了上述基因与lacZ的融合菌株，在此基础上利用P22噬菌体转导技术分别构建上述融合菌株与gcvB、hfq的单缺失菌株，通过qPCR和β-半乳糖苷酶试验分别检测gcvB、hfq缺失后各基因的转录水平和蛋白水平的变化。结果显示：与标准菌株相比，gcvB缺失后，spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调；prgJ、prgK的转录水平上调，蛋白水平下调。hfq缺失后，spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调，prgH、prgI、prgJ、prgK的蛋白水平下调。表明Hfq和GcvB均可对spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK进行调控。上述结果可为鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和Hfq的作用机理研究提供参考。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马水燕 王楠楠 董雨豪 刘锦 陆承平 刘永杰
#N/A
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
许愈 张昭寰 赵莉 刘海泉 潘迎捷 赵勇
将酸性电解水与超声波技术相结合，探究其对于副溶血性弧菌的杀灭情况，并与其他杀菌措施进行对比。采用平板计数法进行菌落计数，扫描电镜观察细菌的形态变化，蛋白质泄露揭示细胞膜通透性差异，并结合流式细胞仪分析生物学特征的改变，分别比较了酸性电解水，超声波以及联合处理对副溶血性弧菌的杀菌效果。结果显示：酸性电解水联合超声波处理可使副溶血性弧菌的数量减少2.09 log CFU/mL，亚致死菌数量为1.80 log CFU/mL，而仅用超声波处理，细菌只减少了0.63 log CFU/mL，亚致死菌数量为0.05 log CFU/mL(P<0.05)。进一步的流式细胞仪分析结果显示，经联合处理后细菌细胞明显缩小，颗粒度变化增大。综上所述，相较于酸性电解水或超声波单一处理，通过菌落计数，细菌的形态变化，蛋白质泄露与细胞生物学特征的改变可知，酸性电解水联合超声波的处理方式具有更强的杀菌效果，可作为一种新型的技术应用于水产品中副溶血性弧菌的杀灭。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
齐家伟 董旭日 柴旭锋 韩乔 张昭寰 檀玲 刘海泉 潘迎捷 赵勇
为了探究食品工厂环境下更为真实的生物被膜形成过程，有效地预防和控制食品加工过程中副溶血性弧菌生物被膜的污染情况，通过模拟不同的食品加工器械振动模式（水平旋转式振动，翘板式振动，垂直翻转式振动），研究了不同振动模式下副溶血性弧菌在玻璃和不锈钢表面培养72 h生物被膜的形成过程，分析了不同振动模式对被膜生物量、被膜结构以及被膜胞外基质中胞外多糖和胞外蛋白的影响。结果发现，振动条件下副溶血性弧菌被膜形成量明显减少；3种振动模式下垂直翻转式振动条件下被膜生成量最少；同种振动方式下副溶血性弧菌在不锈钢表面形成量大于玻璃表面；增加水平旋转转速，被膜生成量减少；振动导致被膜总生物量减少，多孔性和均一性增加，生物被膜结构趋于简单，被膜比较分散。振动导致生物被膜胞外多糖和胞外蛋白含量减少。以上结果说明，不同的器械振动对被膜的影响不同，本研究中模拟的三种振动模式中选择垂直翻转式振动模式可以有效地减少与抑制生物被膜的生长；振动会导致细菌生物被膜胞外多糖和蛋白的减少，影响被膜的孔径、均一性等结构特性，被膜结构变得松散，被膜生成量减少，为进一步研究实际生产环境中生物被膜的清除提供理论参考。
关键词：
生物被膜 副溶血性弧菌 振动 结构
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
马磊 常晶 刘尊英
该文设计了以水产致病菌群体感应系统为靶点的新型防治策略实验，构建了群体感应淬灭酶AiiA酶的原核表达系统，测定了重组酶的酶学性质，探究了该酶对副溶血性弧菌群体感应系统的调控以及对其生长、生物膜、蛋白酶、运动能力和毒力基因tlh表达的影响。结果表明重组AiiA酶可抑制副溶血性弧菌胞外基质的产生，减少生物膜的形成，显著降低细菌蛋白酶活性、运动能力并减少毒力基因tlh的表达。该综合性实验结合了基因工程、酶工程、食品贮藏原理等多领域实验技术，有利于提升学生的创新思维和实验技能。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
董雪红 田敏 季策 马文元 张庆华
副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ，Ｖｐ）是目前备受关注的人畜共患病的病原。为了比较７株不同来源的Ｖｐ对斑马鱼的毒力大小及致病能力，采用急性毒性试验测定９６ ｈ内Ｖｐ对斑马鱼的半数致死剂量（ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌ ｄｏｓａｇｅ，ｌｄ＿（５０）），用累积法和ｂｌｉｓｓ法对比分析ｌｄ＿（５０）指标。结果显示：Ｖｐ Ｋｎｈ１无致病性。其他菌株感染后，均表现出腹部出血，腹腔有腹水，内脏出血等症状。用累积法和ｂｌｉｓｓ法分析人类致病菌株ａｔｃｃ１７８０２、ａｔｃｃ３３８４７及水生动物致病菌株Ｖｐ１３、Ｖｐ３１、Ｖｐ４１、Ｖｐ５７共６株不同来源的副溶血性弧菌的ｌｄ＿（５０），．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
乔欢 徐旭凌 费文斌 黄杰 陈海 胡怿林 丛郁
为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体,并鉴定及研究其生物学特性,本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌,采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离;通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序构建系统发育树及透射电镜观察对所获噬菌体进行分类鉴定;同时对供试噬菌体裂解谱及其生物学特性进行测定,包括最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、热稳定性、过氧乙酸稳定性及不同储存温度下的存活稳定性等。结果显示,本研究分离获得3株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体P46、P48及VP7,3株噬菌体的噬菌斑均呈透亮圆形,P46噬菌斑直径4～5 mm,P48与VP7噬菌斑直径5～6 mm。3株噬菌体核酸均为双链DNA,电镜下观察其头部均呈二十面立体结构,直径约60 nm,尾部宽约8 nm,长约18～20 nm,属于短尾噬菌体科。3株供试噬菌体对AHPND型副溶血性弧菌裂解率达91.5%,对非AHPND型副溶血性弧菌裂解率为92.3%,且无法识别除副溶血性弧菌外其他种属的细菌;噬菌体P46、P48及VP7感染AHPND致病型副溶血性弧菌的最佳MOI分别为0.001、0.1及0.001;P46与VP7最适pH为6～8,P48最适pH为6～9;3株噬菌体对60°C的温度耐受力较强,在4°C条件下存放50周后仍具有较高的存活率;对通用杀菌浓度的过氧乙酸具有一定耐受性。将噬菌体P46、P48及VP7保守蛋白序列在NCBI数据库中比对后发现,3株供试噬菌体与其他噬菌体同源性较低,因此,噬菌体P48与P46及VP7很可能为3株新发现的短尾科噬菌体,这是中国首次报道AHPND致病型副溶血性弧菌短尾科噬菌体。本研究丰富了AHPND致病型副溶血性弧菌噬菌体的菌种资源,并为其应用于噬菌体生物防治制剂的开发奠定了理论基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
张杰 郭海杰 高丽婷 毛芝娟
杀香鱼假单胞菌是大黄鱼内脏白点病的致病菌,感染该菌常会导致养殖大黄鱼很高的死亡率和严重的经济损失。病原株NB2011编码典型的Ⅲ型分泌系统,可能是该菌重要的毒力因子,ExsA是控制此分泌系统表达的重要调控蛋白。为确认ExsA在NB2011致病过程中的作用,开发有效疫苗,实验采用双交换同源重组法构建了ExsA内部序列被卡那霉素基因替换的突变株,检测突变株与野生株对鼠巨噬细胞J774的黏附、内化和胞内增殖特性,并比较对大黄鱼的毒力变化,同时,通过透射电子显微镜观察人工感染后大黄鱼内脏组织的病理变化。研究表明,
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