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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
白雪瑞 王权 陈永军 万莹 凌娇 王亚磊 蒋蔚
[目的]外膜蛋白Omp A是一个多功能蛋白,在很多革兰氏阴性菌的环境适应性和致病性过程中发挥重要作用,而副溶血弧菌Omp A的功能尚未见报道。本试验旨在研究omp A基因(VPA1186)对副溶血弧菌生物学特性及致病性的影响。[方法]通过构建副溶血弧菌SH112株的omp A基因缺失株和互补株,开展对该基因在细菌生长特性、生物被膜形成、运动性、血清杀菌、细胞黏附、细胞毒性,组织载量以及小鼠致病性等相关生物学特性和致病性的影响研究。[结果]omp A的缺失不影响副溶血弧菌的生长速度、生物被膜形成能力和运动性。野生株和Δomp A的黏附和抗血清试验结果无显著差异。但Δomp A对Caco-2细胞的毒性作用显著低于野生株。小鼠染毒验结果显示,与感染野生株的小鼠相比,感染Δomp A的小鼠症状明显减轻,存活率更高,Δomp A在小鼠血液和肝脏中的带菌量显著低于野生株,而互补株的毒力恢复至野生株水平,表明omp A缺失能显著降低副溶血弧菌的毒力。[结论]omp A与副溶血弧菌的致病性相关,为潜在的毒力因子。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄倞 王元 马清扬 英娜 赵姝 吴越 房文红
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是常见的食源性致病菌和海水养殖动物致病菌,目前已知的毒力基因有tlh、tdh、trh、T3SS、pirA、pirB、toxR/S、orf8等。盐度是影响细菌基因表达的关键生态因子之一,为进一步探求副溶血弧菌的致病机理,对2株分别分离自海水和淡水养殖发病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中的副溶血弧菌在不同盐度下的生长速率、致病性进行检测,并用q-PCR方法对菌株毒力基因携带和表达情况进行定量研究。实验结果表明:海水菌株383生长速率快于淡水菌株V9,但菌株383在生长稳定期的细菌浓度明显低于菌株V9;菌株383对凡纳滨对虾的致病性明显高于菌株V9,前者的48 h半致死浓度(LD_(50))低于后者2个数量级;2株副溶血弧菌皆携带毒力基因tlh、T3SS1和pirA/B,但未检测到tdh、trh、T3SS2、toxR/S和orf8。部分毒力基因表达量检测结果显示,菌株383和菌株V9均为vcrD1表达量最高,其次是pirA,vopD1表达量最低;4个毒力基因不仅在2菌株间的表达量差别较大,而且盐度对同一菌株不同毒力基因表达的影响也是不同的。2株副溶血弧菌的毒力与pirA和vcrD1的表达量呈正相关性。研究结果为探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据,同时也提示,淡水养殖凡纳滨对虾要防范副溶血弧菌输入的风险。
[期刊] 水产学报
[作者]
姜维 周家宇 王雨果 胡存洁 方秀 罗土炎 刘洋 鲍宝龙
为阐明毒力因子溶血素对鳗弧菌感染花鲈过程中发挥的作用，实验以花鲈为研究对象，通过对花鲈幼鱼分别注射5.0×10~5 CFU鳗弧菌野生株和缺失株△vah1-vah4-rtxA，评估了溶血相关基因缺失对花鲈的感染能力、花鲈各组织的病理变化情况以及免疫响应的影响。结果显示，花鲈感染野生株后的LD_(50)为2.103×10~5 CFU/mL，感染缺失株△vah1-vah4-rtxA后LD_(50)为1.837×10~6 CFU/mL，溶血相关基因缺失使鳗弧菌毒性降到原来的11.44%；鳗弧菌主要定植在花鲈的肠道和鳃中，溶血相关基因缺失降低鳗弧菌在花鲈体内的定植能力，同时降低对鳃和肠道的损伤程度；转录组分析表明vah1、vah4和rtxA缺失后，头肾组织的差异表达基因显著富集到造血细胞谱系、抗原处理和呈递、细胞黏附分子、肠道免疫网络的IgA生产等免疫通路，并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对表达水平进行了验证。研究表明，溶血相关基因缺失降低了鳗弧菌感染花鲈的致病能力。研究结果有助于进一步了解鳗弧菌的致病机制，并为开发花鲈抗弧菌免疫增强剂或减毒疫苗提供依据。
关键词：
花鲈 鳗弧菌 溶血素 细菌感染 免疫应答
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
傅丹丹 肖亚婷 薛媚 Muhammad Akmal Raheem 冯寒霜 涂健 宋祥军 邵颖 祁克宗
[目的]构建禽致病性大肠杆菌(APEC)Ⅲ型分泌系统2(ETT2)转录因子eivF缺失株,并对其进行生物学特性及转录组学分析,探究转录因子eivF基因在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究ETT2致病机制奠定基础。[方法]利用Red同源重组技术构建APEC ETT2转录因子eivF基因缺失的APEC AE81△eivF株及其回复株AE81 C-eivF,通过运动性、生物被膜形成等试验分析eivF对APEC生物学功能的影响;并利用转录组学方法分析eivF在转录调控网络中对细菌鞭毛和生物被膜等相关因子的转录调控作用。[结果]成功构建了APEC eivF基因缺失株AE81△eivF和回复株AE81 C-eivF;生物学结果表明,与野生株AE81相比,缺失株AE81△eivF运动能力降低,生物被膜形成褶皱堆砌且厚度增大,空间结构呈立体、多层次状,并形成类似于三维塔状结构的突起,回复株AE81 C-eivF运动能力和生物被膜形成能力基本恢复;与野生株AE81相比,缺失株AE81△eivF有576个基因差异表达,且鞭毛和生物被膜等相关基因在转录水平上均发生显著变化。[结论] ETT2的转录因子eivF参与调控APEC的生物表型变化,其可能通过调控鞭毛、生物被膜相关基因而调控APEC致病过程。
[期刊] 水产学报
[作者]
沈亚林 于业绍
八十年代以来,江苏南部沿海屡次发生文蛤大批死亡现象,使文蛤资源量急剧下降,生产遭受重大损失。关于文蛤大批死亡的原因研究,目前已有几篇报道。郑国兴等[1991]从病文蛤体内分离到溶藻弧菌并证实其致病性。王广和等(1991)研究证实弗尼斯弧菌是引起文蛤大批死亡的病原菌。杨美桂等(1978)报道了1977年引起台湾新竹区养殖丽文蛤大量死亡的病原菌——副溶血弧菌。但有关文蛤病
关键词：
文蛤 副溶血弧菌 防治
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孟璐 车金远 黄旭雄 罗土炎 鲍宝龙
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖过程中一种常见的致病菌。当温度为25～35℃时，容易暴发流行性的弧菌病。利用OverlapPCR和同源基因重组技术，成功构建溶藻弧菌RseB基因敲除缺失株。结果显示：与野生溶藻弧菌相比，在生长速度上，RseB基因显示出与生长具有相关性，RseB基因缺失提高了溶藻弧菌的生长速度；RseB基因缺失造成溶藻弧菌溶血性下降37.5%。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)致病性试验结果显示，RseB基因缺失菌株感染后凡纳滨对虾开始死亡时间推迟4 h, LT_(50)推迟20 h。攻毒后的第24小时，RseB基因缺失菌株在对虾中的定殖能力下降53.4%。受溶藻弧菌感染的凡纳滨对虾肝胰腺严重受到侵染，肝小管的排列顺序紊乱，并且间隙变大、边界线也逐渐模糊，肝胰腺小管的管腔消失；肝细胞的排列开始不规则，有些肝细胞形状很明显地肿大，甚至整个细胞开始变性，被伊红染深，细胞核开始消失。相同时间点的病理切片显示，RseB基因敲除菌株感染的凡纳滨对虾肝胰腺受损情况相对较轻。
[期刊] 水产学报
[作者]
乔欢 徐旭凌 费文斌 黄杰 陈海 胡怿林 丛郁
为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体,并鉴定及研究其生物学特性,本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌,采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离;通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序构建系统发育树及透射电镜观察对所获噬菌体进行分类鉴定;同时对供试噬菌体裂解谱及其生物学特性进行测定,包括最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、热稳定性、过氧乙酸稳定性及不同储存温度下的存活稳定性等。结果显示,本研究分离获得3株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体P46、P48及VP7,3株噬菌体的噬菌斑均呈透亮圆形,P46噬菌斑直径4～5 mm,P48与VP7噬菌斑直径5～6 mm。3株噬菌体核酸均为双链DNA,电镜下观察其头部均呈二十面立体结构,直径约60 nm,尾部宽约8 nm,长约18～20 nm,属于短尾噬菌体科。3株供试噬菌体对AHPND型副溶血性弧菌裂解率达91.5%,对非AHPND型副溶血性弧菌裂解率为92.3%,且无法识别除副溶血性弧菌外其他种属的细菌;噬菌体P46、P48及VP7感染AHPND致病型副溶血性弧菌的最佳MOI分别为0.001、0.1及0.001;P46与VP7最适pH为6～8,P48最适pH为6～9;3株噬菌体对60°C的温度耐受力较强,在4°C条件下存放50周后仍具有较高的存活率;对通用杀菌浓度的过氧乙酸具有一定耐受性。将噬菌体P46、P48及VP7保守蛋白序列在NCBI数据库中比对后发现,3株供试噬菌体与其他噬菌体同源性较低,因此,噬菌体P48与P46及VP7很可能为3株新发现的短尾科噬菌体,这是中国首次报道AHPND致病型副溶血性弧菌短尾科噬菌体。本研究丰富了AHPND致病型副溶血性弧菌噬菌体的菌种资源,并为其应用于噬菌体生物防治制剂的开发奠定了理论基础。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘迪 房文红 周红霞 王元 陈甜甜 李健 周俊芳
哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是导致养殖对虾暴发弧菌病的重要病原之一。从我国南方养殖凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)分离、鉴定了10株哈维氏弧菌(Vh00947、Vh00949、Vh11011、Vh11014、Vh21217、Vh21218、Vh21220、Vh21229、Vh21231和Vh31487),分别肌注感染健康凡纳滨对虾后发现,菌株Vh21229致病性很弱,Vh00949其次,其它菌株毒力较强;对8种哈维氏弧菌常见毒力基因(Vh1、Vh2、Vh3、Vh4、tox S、
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵良友 高雪丽 刘超男 申海龙 姜南 万伟泉 吕晓萍 郑世民
为了探究副猪嗜血杆菌外膜脂蛋白编码基因vacJ在其致病中的作用,以血清5型临诊分离株HS49为研究对象,构建了vacJ基因缺失菌株(ΔvacJ),进而比较了野生株与缺失株在生长特性、对细胞的黏附及入侵和毒力等方面的差异。结果显示,与野生株相比较,缺失vacJ后的菌株生长速率明显下降,对PK-15细胞的黏附和入侵能力则明显降低,形成生物被膜的能力也显著下降。缺失vacJ菌株对Balb/C小鼠感染模型的LD_(50)是野生株的14倍,表明vacJ基因敲除后,副猪嗜血杆菌毒力明显下降。表明vacJ基因与副猪嗜血
[期刊] 华北农学报
[作者]
李娜 宁程程 郭蕴 季春辉 王立霞 张亚萍 孟庆玲 乔军 才学鹏
为探究鼠伤寒沙门菌sRNA STnc1220的分子特征、生物学功能及对细菌毒力的影响，通过PCR扩增了鼠伤寒沙门菌sRNA STnc1220基因，分析了其分子特征，利用TargetRNA2网站预测STnc1220基因可能调控的靶基因；利用λ-Red同源重组技术构建沙门菌(STM)-基因缺失突变株，并与亲本SL1344比较，对其生长特性、生化特性、遗传稳定性、生物被膜(BF)形成能力、在不同应激环境中(pH值、H_2O_2、高盐和乙醇胁迫环境)的适应性、通过黏附侵染巨噬细胞和小鼠感染试验对致病力进行研究。结果显示，STnc1220基因全长73 bp、其上游5′-UTR存在-10和-35启动子结合位点，预测其潜在的靶基因为barA基因；试验成功构建缺失株STM-ΔSTnc1220,且具有良好的遗传稳定性；与SL1344亲本株相比，缺失株的生长速度、生化特性及生物被膜形成能力没有发生改变；在pH=4.8,pH=9和H_2O_2条件下生长速率差异不显著，但在4%NaCl环境下，缺失株在7 h后生长速率明显高于亲本株，在3.8%乙醇环境中缺失株在对数期的生长速率显著升高(P<0.05);其对巨噬细胞中黏附和侵袭能力极显著降低(P<0.01),小鼠LD_(50)显著升高，对小鼠的肝脏和脾脏的病理损伤致病力减弱。表明STnc1220基因在环境适应性和毒力调控中发挥了重要的作用。为阐明鼠伤寒沙门菌的致病机制提供理论依据。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
胡存洁 车金远 黄旭雄 罗土炎 鲍宝龙
通过基因重组技术，敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10~5 cfu/mL,相比鳗弧菌野生菌株的半数致死量(3.16±0.80)×10~5 cfu/mL提高了2.09倍；相比鳗弧菌野生菌株，Δvah1菌株在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺的定殖能力明显下降，对肝胰腺细胞造成溶解和空泡化的破坏程度也相对较小，肝胰腺免疫相关基因CAT、SOD、PO、LZM和ACP的表达水平降低。这些研究结果表明，vah1缺失影响鳗弧菌对凡纳滨对虾的致病能力，Δvah1菌株为后续鳗弧菌减毒疫苗或抗鳗弧菌免疫增强剂的制备奠定了基础。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张海强 安伟 肖雨
为了监测上海市养殖对虾中副溶血弧菌致病基因的携带情况及潜在致病株流行情况,采用PCR方法对上海地区不同对虾养殖单位中分离获得的19株副溶血弧菌分离株及1株标准菌株进行6种致病基因的检测筛查,并采用ERIC-PCR方法进行基因分型分析。结果发现:19株副溶血弧菌中未检测出携带tdh、ORF8基因,只有1株携带trh基因,而tox RS/new基因携带率较高,19株中有14株检出阳性,基因携带率为73.7%。对能够引起对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)的副溶血弧菌特异性质粒基因的检测中发现,AP1和AP2基因均有3株检测出阳性,基因携带率均为15.8%。通过ERIC-PCR分型技术将20株副溶血弧菌分成7个不同的类群,其分辨力指数DI值为0.811,表明ERIC-PCR具有较好的基因分型能力,分型结果发现该方法能够有效区分不同时间段获得的菌株,而对不同地理位置获得的菌株区分并不明显。以上结果表明从养殖对虾中分离得到的副溶血弧菌致病基因携带率总体偏低,但存在一定的流行风险,需要防范一些新的致病株的流行,这些可以为对虾养殖单位中副溶血弧菌致病流行株的预防控制提供相关参考。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王娜 王海亮 白楠 黄倢 谢达祥 谢起浪 於俊琦 万夕和
急性肝胰腺坏死病（Ａｃｕｔｅ ＨｅｐＡｔｏｐＡｎｃｒｅＡｔｉｃ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ＤｉｓｅＡｓｅ，ＡＨｐｎＤ）是由副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐＡｒＡＨＡｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）引起的对虾病害，本研究从患ＡＨｐｎＤ的凡纳滨对虾样品中分离得到５株副溶血弧菌，采用致ＡＨｐｎＤ的副溶血弧菌（ＶｐＡＨｐｎＤ）的相关质粒的引物Ａｐ２进行ｐｃｒ检测，表明这５株菌中均存在ＡＨｐｎＤ相关质粒。利用丝裂霉素ｃ进行溶源性噬菌体筛选和噬菌体诱导发现，其中２株副溶血弧菌（２０１３０６２９００２ｓ０１和２０１３０７２６００１ｓ０１）可能存在溶源性噬菌体感染；从经０．５μｇ／ｍｌ丝裂霉素ｃ诱导的２０１３０６２９００２ｓ０１和．．．
关键词：
副溶血弧菌 溶源噬菌体 急性肝胰腺坏死病
[期刊] 海洋渔业
[作者]
胡梦华 马立才 赵姝 刘旭 周俊芳 房文红
从发病的凡纳滨对虾中分离并经鉴定得到一株溶藻弧菌（命名为：Ｖ＿Ａ－７６），通过对虾回感实验和药物敏感性实验分别对Ｖ＿Ａ－７６菌株的耐药表型和致病能力进行了研究，并运用ＰＣＲ方法检测了该菌的毒力相关基因、整合子和耐药基因的携带情况。对虾感染实验结果表明，溶藻弧菌Ｖ＿Ａ－７６能够导致凡纳滨对虾发病死亡。经ＰＣＲ检测发现，该菌携带８种毒力相关基因：ｔｄｈ、ｔｌｈ、ｔｏｘ Ｓ、ＣｏｌｌＡｇｅｎＡＳｅ、ｆｌＡ Ａ、ｏｍＰ Ｗ、ＡＳＰ Ａ和ｆｕＲ。药敏结果显示，Ｖ＿Ａ－７６对环丙沙星、氯霉素、链霉素、红霉素、磺胺甲噁唑、复方新诺明和利福平７种药物表现出较高的耐药水平，且该菌包含１类整合子、４类超级整合子Ｓ．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
赵东康 Rachit PENGLEE 车金远 易欣鑫 邱超达 鲍宝龙
嗜水气单胞菌是水环境常见的病原体，具有较强致病性。在本研究中，首次敲除了嗜水气单胞菌aguA基因，通过转录组分析发现aguA敲除后细菌的粘附、致病、胺代谢等生物过程下降。通过qRT-PCR进一步验证发现10个粘附基因、9个发病基因和8个胺代谢基因的mRNA表达水平明显下降；此外，转录组水平分析结合qRT-PCR验证发现VI型分泌系统基因、II型分泌系统基因、鞭毛合成相关基因、菌毛合成相关基因、溶血基因、I型分泌系统基因、肠毒素基因、RTX基因等毒力基因的RNA表达水平也出现下调。对两株菌进行草金鱼的体内感染实验，与野生菌株（WT）相比，aguA敲除株（△aguA）感染草金鱼的致病力降低了7.47倍，且aguA敲除株生物膜形成能力降低了16.6%。以上结果显示aguA基因与嗜水气单胞菌的致病性密切相关。
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