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[期刊] 水产学报
[作者]
杨娅楠 王婧婷 陈萌 耿绪云 袁增智 孙金生
黏附因子在病原菌的致病过程中发挥了重要作用,鉴定新的黏附因子是了解病原菌致病机制的重要手段。本研究中首次发现游离肝素能够竞争性抑制副溶血弧菌与Hela细胞的黏附,表明细胞外基质中的肝素可能是细菌重要的细胞表面黏附受体。进一步利用肝素亲和层析技术垂钓到6种副溶血弧菌的外膜蛋白,并通过基因克隆和原核表达技术成功获得重组的外膜蛋白并对其进行了深入研究。重组蛋白IMPDH、EF-Tu和Opp A可黏附Hela细胞,并可以显著抑制副溶血弧菌与Hela细胞的黏附,说明这3种蛋白可能是其重要的潜在黏附因子。
关键词：
副溶血弧菌 肝素 外膜蛋白 黏附因子
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张泽蕙 黄河 文英 钟名其 伦镜盛 章跃陵
以凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）为研究对象，采用人工感染、ｔｒｉｃｉｎｅ－ｓＤｓ－ｐａＧｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂＬｏｔｔｉｎＧ、ｍａＬＤｉ－ｔｏＦ／ｔｏＦ、抑菌实验等方法对血蓝蛋白小分子降解肽段进行研究。结果发现，副溶血弧菌（ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏＬｙｔｉｃｕｓ）刺激对虾２４ ｈ后，与对照组相比，其血淋巴中新出现５个分子量为６．０～３１．０ ｋ Ｄ的与兔抗血蓝蛋白抗体呈阳性的小分子条带。其中，分子量为６．０ ｋ Ｄ的ａ条带（命名为ｈｍｃｐ６肽段）与凡纳滨对虾血蓝蛋白具有高度同源性，对副溶血弧菌具有明显的抑菌活性，与对照组相比，存在极显著性差异（ｐ＜０．０１）。由．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王薇 胡丹丹 李槿年 刘雪芹
为了探明拟态弧菌OmpU蛋白的黏附功能,利用同源重组技术敲除基因组中OmpU基因,并构建其互补株,再经组合PCR方法和序列测定,证实了OmpU基因的缺失和互补。对野生株、缺失株和互补株进行了遗传稳定性、生长特性、生化特性、细胞黏附性、致病性等方面比较研究。结果显示,缺失株具有遗传稳定性;在相同的培养条件下,与野生株相比,突变株的培养特性和生化特性没有明显变化,生长速率略减慢,对实验草鱼的毒力降低了4倍,对鲤上皮瘤细胞(EPC)的黏附能力显著降低,下降了66.6%,而互补株的黏附能力和毒力又得到恢复,与野生株无明显差异。研究首次确证了拟态弧菌OmpU蛋白具有黏附功能,OmpU蛋白通过黏附参与致病...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郑磊 郭养浩 马振宁 樊海平 吴斌 唐凤翔
采用延伸PCR技术拼接副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus VpATCC17802)的外膜蛋白K基因ompK和鞭毛蛋白A基因flaA,获得融合基因flaA-ompK。制备高纯度的r-OmpK,r-FlaA及r-FlaA-OmpK蛋白。分别以所制备的OmpK、FlaA-OmpK和混合蛋白OmpK+FlaA作为免疫原,通过口服及注射的方法免疫黑石斑鱼(Centropristisstriata),研究其免疫原性及对野生副溶血弧菌(Vp89)感染的免疫保护作用。ELISA分析结果表明,注射FlaA-OmpK组抗体效价最高,是OmpK组的2倍,是混合蛋白组的4倍,注射FlaA-Om...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李香平 毛芝娟 胡大雁 陈昌福
从2007年3月至6月,在宁波市5个不同的农贸市场共采集贝类样品360份,分离菌株71株,其中5株代表菌株革兰氏染色阴性、弧状、具极生单鞭毛,利用葡萄糖、甘露醇产酸,不利用乳糖、蔗糖,精氨酸双水解酶阴性,VP试验为阴性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶为阳性,靛基质、甲基红试验阳性,不产生H2S,初步判断为副溶血弧菌;进一步进行了基于16S rRNA和toxR序列的PCR检测,序列测定结果验证了该5株细菌确实为副溶血弧菌。以16S rRNA序列为基础,分析了分离株与相关细菌菌株的同源性,构建了系统发育树。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾巧英 陆承平
为研究猪链球菌 2型 (SS2 )的毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)的黏附作用 ,进行了如下试验 :1 用黏附计数法比较菌株HA980 1(MRP+ )和SH0 0 6 4 4 4 (MRP-)的黏附动力学 ,两菌株均能黏附于HEp 2细胞 ,MRP+ 株的最大黏附菌数显著高于MRP+ 株 (P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
毛芝娟 由振强 魏永伟 于涟
从浙江省象山港网箱养殖大黄鱼病鱼分离的一株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ZJ2003中克隆了两种铁调外膜蛋白psuA和pvuA的基因(GenBank登录号:DQ141607、DQ141608),经PCR的方法去除两基因的信号肽编码序列后亚克隆到原核表达载体pET30a(+)中,经IPTG诱导获得大量表达。表达的重组蛋白以包涵体形式存在。包涵体蛋白经尿素法纯化及梯度透析法复性后以100μg/尾的剂量免疫大黄鱼,4周后经活菌攻毒获得80%的免疫保护率。免疫印迹分析表明,人工感染存活鱼的血清可以识别此两种重组蛋白。研究结果显示该两种铁调外膜蛋白具有良好的免疫原性,有可能...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
丁莹 潘迎捷 赵勇 孙晓红 金维荣 徐晓晶 秦红友
根据GenBank上已有的副溶血弧菌耐热直接溶血毒素的基因序列,设计并人工合成引物。将耐热直接溶血毒素的基因全长克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达载体tdhA/pGEX-4T-1和tdhS/pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达的工程菌株。优化诱导表达条件,表达耐热直接溶血毒素。转化有重组质粒tdhA/pGEX-4T-1,tdhS/pGEX-4T-1的BL21可稳定高效地表达可溶形式的目的蛋白。表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,用GST琼脂糖珠柱亲和层析纯化。溶血实验表明,表达的蛋白具有溶血活性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邹思湘 W Hurley
利用酶标板固定乳铁蛋白,用生物素标记肝素,研究 pH 和某些阳离子对乳铁蛋白与肝素结合的影响.结果表明,在100 mmol/L NaCl 时,两者结合的最适 pH 为6.0;无 NaCl 时,为6.5.Na~+和 Ca~+对于乳铁蛋白与肝素的结合有协同的效应,两者的最大结合发生在125mmol/L NaCl 和无 Ca~(2+)或低 Ca~(2+)浓度下;而在低 NaCl 浓度时,Ca~(2+)则促进两者的结合.Zn~(2+)和 Cu~(2+)对乳铁蛋白与肝素的结合有抑制,在100 mmol/L NaCl 时,800μmol/L 的 Cu~2+和900μmol/L 的 Zn~(2+)分别使结合...
关键词：
乳铁蛋白 肝素 糖胺多糖 抗菌作用
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高俊伟 毕丁仁 胡思顺 彭秀丽
研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王娜 王海亮 白楠 黄倢 谢达祥 谢起浪 於俊琦 万夕和
急性肝胰腺坏死病（Ａｃｕｔｅ ＨｅｐＡｔｏｐＡｎｃｒｅＡｔｉｃ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ＤｉｓｅＡｓｅ，ＡＨｐｎＤ）是由副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐＡｒＡＨＡｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）引起的对虾病害，本研究从患ＡＨｐｎＤ的凡纳滨对虾样品中分离得到５株副溶血弧菌，采用致ＡＨｐｎＤ的副溶血弧菌（ＶｐＡＨｐｎＤ）的相关质粒的引物Ａｐ２进行ｐｃｒ检测，表明这５株菌中均存在ＡＨｐｎＤ相关质粒。利用丝裂霉素ｃ进行溶源性噬菌体筛选和噬菌体诱导发现，其中２株副溶血弧菌（２０１３０６２９００２ｓ０１和２０１３０７２６００１ｓ０１）可能存在溶源性噬菌体感染；从经０．５μｇ／ｍｌ丝裂霉素ｃ诱导的２０１３０６２９００２ｓ０１和．．．
关键词：
副溶血弧菌 溶源噬菌体 急性肝胰腺坏死病
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王艺磊 张子平 戴军 邹志华 王淑红
采用RDP试剂提取杂色鲍(Haliotisdiversicolor)不同免疫时相肝脏的总RNA,经Oligotex试剂盒纯化得到mR NA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)原理,利用含sfiIB酶切位点的Oligo(dT)引物合成cDNA第1条链,利用含sfiIA酶切位点的SMARTⅢ寡核苷酸作为cDNA第1条链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR引物合成双链cDNA。双链cDNA用sfiI酶切和过柱分级分离后,与λTripEx2两臂进行连接,随后进行λ噬菌体体外包装反应,构建成杂色鲍不同免疫时相(12h和24h)全...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赵伟 王雷 刘梅 蒋克勇 齐灿灿 杨广 王宝杰
为了研究致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对凡纳滨对虾(Litopanaeus vannamei)肝胰腺抗氧化酶活性及相关基因表达的影响,本研究选取始体重(2.20±0.24)g的健康凡纳滨对虾初270尾,将其随机分为2组,分别以0 CFU/m L和5×107 CFU/m L剂量的致病性副溶血弧菌对凡纳滨对虾进行浸浴攻毒实验。在实验第6小时、12小时、24小时和36小时取肝胰腺,进行抗氧化酶活性及免疫相关基因表达测定。结果显示,感染副溶血弧菌后,实验组对虾肝胰腺中超氧化物歧
[期刊] 水产学报
[作者]
孙明玉 冯博 张昭寰 徐马俊坤 刘伟奇 刘海泉 潘迎捷 赵勇
针对12株引起凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)的致病性副溶血弧菌,运用多位点测序技术,分析致病菌株的遗传特征。实验选择副溶血弧菌的7个管家基因dnaE、gyrB、recA、dtdS、pntA、pyrC及tnaA,对12株AHPND致病菌扩增测序。将核酸序列上传至PubMLST数据库进行比对后获得每株菌的序列型。收集其他地区AHPND致病性副溶血弧菌的多位点序列分型(MLST)数据,采用eBURSTV3及MEGA5.0软件进行遗传进化分析。结果显示,2014年中国广东分离的AHPND致病株属于一个新
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