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[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘坡 李凯彬 王芳 刘春 聂湘平 吴淑勤
以暴露于β-萘黄酮(beta-Naphthoflavone,β-NF)中的剑尾鱼(Xiphophorus helleri)为研究对象,采用SMARTTM(Switching Mechanism At 5' end of RNA Transcript)技术,成功构建了剑尾鱼肝脏cDNA文库。该文库约含有4.2×107个重组子,重组效率达l00%,插入片段多在0.6～2.5kb之间,平均插入片段长度约1.3kb,扩增后文库滴度为7.0×109CFU/mL。随机挑取200个重组子进行测序检验,共得到长度大于500bp的Expression sequence tag(EST)序列187个,对所测EST...
关键词：
剑尾鱼 肝脏 cDNA文库
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
何学军 李思发
用Stratagene技术构建了吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)肝cDNA文库。首先用TRIZOL法提取肝总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测,表明总RNA纯度高且完整性良好。然后分离纯化mRNA,合成双链cDNA之后,加EcoRⅠ接头、EcoRⅠ末端磷酸化、XhoⅠ消化,并用葡聚糖凝胶柱层析分级收集cDNA样品,得到300 mg cDNA,符合建库要求。双链cDNA与Uni-ZAP XR Vector连接后,用GigapackⅢGold Packaging Extract进行体外包装得到cDNA文库。测得的文库滴度为1.25×1...
关键词：
尼罗罗非鱼 肝 cDNA文库
[期刊] 水产学报
[作者]
肖调义 葛熹凯 许宝红 苏建明 章怀云
采用抑制性消减杂交技术构建了三角帆蚌肝脏瘟病感染期抑制性消减cDNA文库。经检验,差异表达基因均被富集了210倍左右,证明构建的cDNA消减文库具有很强的消减效率。PCR鉴定发现,在随机挑取的阳性克隆中,95%的克隆均含有0.2~1.0 kb的插入片段,这些片段可能是三角帆蚌瘟病病毒感染后差异表达基因的cDNA片段。测序共获得214个有效cDNA序列,分别属于8大类,共98个基因。其中细胞分裂基因2个、细胞结构与运动基因9个、代谢基因10个、信号传导基因7个、细胞防疫基因10个、基因与蛋白表达基因20个、未知功能蛋白基因26个,GenBank中找不到任何同源序列的基因14个。结果说明,构建的差...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王艺磊 张子平 戴军 邹志华 王淑红
采用RDP试剂提取杂色鲍(Haliotisdiversicolor)不同免疫时相肝脏的总RNA,经Oligotex试剂盒纯化得到mR NA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)原理,利用含sfiIB酶切位点的Oligo(dT)引物合成cDNA第1条链,利用含sfiIA酶切位点的SMARTⅢ寡核苷酸作为cDNA第1条链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR引物合成双链cDNA。双链cDNA用sfiI酶切和过柱分级分离后,与λTripEx2两臂进行连接,随后进行λ噬菌体体外包装反应,构建成杂色鲍不同免疫时相(12h和24h)全...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
刘振勇 谢友佺 林小金
采用石蜡切片和HE染色法,对不同生存条件下的大黄鱼以及肝脏病变的大黄鱼肝组织进行组织切片,在显微镜下进行组织病理学观察,采用酸水解法测定不同生存条件下以及患肝肿大的大黄鱼肝脏的脂肪含量,了解其变化情况。以野生大黄鱼的肝组织细胞结构为参照,初步探明了小网箱养殖大黄鱼的脂肪肝、肝肿大、肝胆汁淤积、肝淤血的组织病理变化情况,讨论了大黄鱼肝脏病变的原因和病变致死原因,并提出了防治措施。
关键词：
大黄鱼 肝脏 病变 组织病理学
[期刊] 水产学报
[作者]
冯涛 郑微云 洪万树 郭祥群
在实验生态条件下 ,采用碱解旋技术检测了暴露于BaP后大弹涂鱼肝脏的DNA单链断裂程度 ,结果发现DNA单链断裂程度同时受到曝污时间和曝污浓度的影响 ,并具有一定的时间—效应和剂量—效应特征 ;污染解除后DNA单链断裂程度未明显减轻 ,表明DNA损伤的修复能力较弱。以上这些结果表明DNA单链断裂适于作为BaP暴露后DNA损伤的检测指标。
关键词：
苯并(a)芘 大弹涂鱼 DNA损伤
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
申奔龙 陈晓佳 黄小红 张伟妮
探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC_(50)为0.18μmol·L~(-1),抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数K_I为0.110μmol·L~(-1),K_(IS)为0.827μmol·L~(-1);微观速率常数k_(+0)大于k′_(+0),表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶—底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用.
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王嘉 马洪明 麦康森 张文兵 刘付志国
采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)Vc缺乏诱导的差异表达基因。实验用皱纹盘鲍成鲍初始体质量为(74.32±0.43)g,初始壳长为(84.36±0.24)mm。配制了Vc缺乏(0.0mg/kg)和高剂量添加(4967.5mg/kg)2个水平的人工饲料进行饲喂。经过170d的养殖后,分别构建肝胰腺和肾脏Vc缺乏消减cDNA文库。消减杂交效率分析显示,差异表达的基因分别被富集了大约25和25～210倍。从两个文库中随机挑选阳性克隆进行测序。在肝胰腺消减cDN...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
汪登强 罗晓松 陈大庆
采用CloneMinerTMcDNA文库构建试剂盒构建了患败血症的鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肝和肾的cDNA文库。经检验,文库的滴度为1.34×107 cfu/mL,总库容为2.68×107 cfu,阳性克隆率为97.5%,平均插入片段大于1.2 kb。对80个随机挑选的克隆进行两端测序,结果显示有74个测序成功。经在GenBank上BLAST比对,其中57个为已知功能基因,属于45个不同基因,另外17个没有明显的同源序列。在已知功能的57个克隆中,含有全长编码区序列的克隆共有49个,全长cDNA比率为61.25%。采用PCR法对文库进行筛选,获得一个含MHC...
关键词：
鲢 cDNA文库 MHC 肝 肾
[期刊] 海洋渔业
[作者]
孙鹏 尹飞 彭士明 施兆鸿
测定了不同盐度(8、18、28、38、48)处理后条石鲷幼鱼肝脏中SOD、CAT、GPX和GST 4种酶活力,探讨了盐度变化对条石鲷幼鱼肝脏抗氧化酶活力的影响。当用低盐度8和18处理时,幼鱼肝脏SOD活力无显著变化(P>0.05);当处理盐度升至38时,SOD活力增加并在24 h时达到最大,其水平显著高于对照组(P
关键词：
条石鲷 盐度 抗氧化酶 氧化压力
[期刊] 海洋渔业
[作者]
王永红 曾霖 吉群 谢正丽 黄伟卿 宋炜
为探讨盐度变化对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏基因转录表达的影响，将体质量为(59.68±1.32) g的大黄鱼分别在盐度25（对照组）、盐度36（高盐组）、盐度10（低盐组）的水体中暴露24 h，采用Illumina Hiseq 2500对肝脏样本进行转录组测序。结果显示，从高盐vs.对照组(H vs. C)、低盐vs.对照组(L vs. C)和高盐vs.低盐(H vs. L)中分别筛选出71个、180个和438个差异基因(DEGs)。GO (Gene Ontology)和KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析发现，H vs. C中的DEGs显著富集在三羧酸循环、MAPK信号通路、内质网蛋白加工和Toll样受体信号通路等；L vs. C中的DEGs显著富集在FoxO信号通路、戊糖磷酸途径、mTOR信号通路、RNA降解、P53信号通路和内质网蛋白加工等，表明大黄鱼对高盐和低盐胁迫的响应均涉及到糖类代谢、内质网应激、细胞凋亡和自噬等生理功能。H vs. L中的DEGs显著富集在内质网蛋白加工、FoxO信号通路、甘油脂代谢、糖酵解/糖异生、吞噬体和P53信号通路等，表明大黄鱼在高盐和低盐适应过程中，内质网应激、脂类代谢、糖类代谢、细胞凋亡和自噬等生理功能存在差异。研究结果可为深入研究鱼类对盐度胁迫的响应机制奠定基础。
关键词：
大黄鱼 肝脏 盐度胁迫 转录组 差异基因
[期刊] 淡水渔业
[作者]
蔡深文 郑永华 唐洪玉
采用一次性胸腔注射法,研究了乳酸诺氟沙星对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝脏过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活性的影响。结果显示:随着试验时间的延长,草鱼肝脏CAT、AKP酶活性呈现先升高后降低的趋势,CAT酶活性在注射后的第5天升至最大值,注射后的第20天降至最小值,AKP活性在注射后的第10天升至最大值,注射后的第20天降至最小值;随着注射剂量的不断加大,CAT、AKP酶活性值也出现先升后降的过程,注射浓度为150 mg/kg时酶活性值最大。GOT酶活性随注射浓度增大呈降低趋势,注射后第5天,浓度为100 mg...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
施兆鸿 廖雅丽 王孝杉 高权新 彭士明 张晨捷
为探讨云纹石斑鱼（ＥｐｉｎＥｐｈＥｌｕｓ ｍｏａｒａ）肝脏代谢酶活力对盐度骤降的响应，设置２７（对照组）、２１、１５、９共４个盐度梯度对云纹石斑鱼进行盐度骤降胁迫实验。分别在０、１、２、３、７ ｄ时取样，测定其肝脏中酸性磷酸酶（ａＣｐ）、碱性磷酸酶（ａＫｐ）、谷丙转氨酶（ＧｐＴ）、谷草转氨酶（ＧｏＴ）以及乳酸脱氢酶（ｌｄｈ）活力。结果显示，ａＣｐ活力盐度２１组先波动变化后恢复正常水平，盐度１５组先下降后升高，随后第７天下降恢复正常水平；ａＫｐ活力盐度２１组和盐度１５组先呈下降趋势，第３天大幅度升高；ＧｐＴ与ｌｄｈ活力盐度２１组和盐度１５组基本呈现先下降再上升并波动的变化趋势；ＧｏＴ活力变化趋势．．．
关键词：
云纹石斑鱼 骤降低盐胁迫 肝脏代谢酶
[期刊] 海洋渔业
[作者]
曾霖 宋炜 谢正丽 熊逸飞 张惠 黄伟卿
为探讨盐度变化对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏基因转录表达的影响，将体质量为(59.68±1.32) g的大黄鱼从盐度25转入盐度36或10的水体中暴露24 h，采用Illumina Hiseq 2500对肝脏样本进行转录组测序。结果显示，从高盐vs.对照组(H vs. C)、低盐vs.对照组(L vs. C)和高盐vs.低盐(H vs. L)中分别筛选出71个、180个和438个差异基因(DEGs)。GO (Gene Ontology)和KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析发现，H vs. C中的DEGs显著富集在三羧酸循环、MAPK信号通路、内质网蛋白加工和Toll样受体信号通路等；L vs. C中的DEGs显著富集在FoxO信号通路、戊糖磷酸途径、mTOR信号通路、RNA 降解、P53信号通路和内质网蛋白加工等，表明大黄鱼对高盐和低盐胁迫的响应均涉及到糖类代谢、内质网应激、细胞凋亡和自噬等生理功能。H vs. L中的DEGs显著富集在内质网蛋白加工、FoxO信号通路、甘油脂代谢、糖酵解/糖异生、吞噬体和P53信号通路等，表明大黄鱼在高盐和低盐适应过程中，内质网应激、脂类代谢、糖类代谢、细胞凋亡和自噬等生理功能存在差异。本结果可为深入研究鱼类对盐度胁迫的响应机制奠定基础。
关键词：
大黄鱼 肝脏 盐度胁迫 转录组 差异基因
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李根芳 胡瑞芹 宋汝浩 陈良标
水体急性低氧一直是水产养殖中的棘手问题，而铁代谢在鱼类低氧应激中发挥着极其重要的作用。为探究铁离子浓度对鱼类应激低氧胁迫的影响，本研究以模式生物斑马鱼的肝脏细胞（Zebrafish liver cells，ZFL）为研究对象，分别利用柠檬酸铁胺（Ammonium ferric citrate，FAC）和去铁胺（Defetoxamine，DFO）对ZFL细胞进行外源铁补充和内源及外源铁清除处理，从而比较不同铁离子浓度下ZFL细胞对低氧胁迫的应激反应。结果表明，低氧胁迫显著降低了ZFL细胞的增殖能力和存活率以及铁代谢相关基因的表达水平，而与对照组和内源及外源铁清除组相比，补充外源铁能够明显增强ZFL细胞在低氧胁迫下的增殖能力、存活率和铁蛋白的表达水平。同时，在外源铁补充组的ZFL细胞中，与铁吸收（tfa）、铁储存（fthl27、fthl28、fthl31）和铁输出（fpn）相关基因的mRNA表达水平均显著提高。进而又对低氧胁迫下ZFL细胞的活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平进行检测，发现补充外源铁能够在一定程度上恢复ZFL细胞中ROS的水平，说明在一定范围内胞内ROS水平的增加有利于ZFL细胞应对低氧胁迫。综上所述，本研究发现当ZFL细胞处于急性低氧时，补充外源铁离子可以提高细胞内的铁水平，进而产生一定的有益ROS，有助于提高其在低氧环境中的生存率。
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