- 年份
- 2024(6847)
- 2023(9591)
- 2022(7778)
- 2021(6834)
- 2020(5989)
- 2019(13644)
- 2018(13782)
- 2017(26219)
- 2016(14990)
- 2015(17197)
- 2014(17581)
- 2013(17328)
- 2012(16099)
- 2011(14360)
- 2010(14519)
- 2009(13438)
- 2008(13614)
- 2007(12549)
- 2006(10840)
- 2005(9788)
- 学科
- 济(62435)
- 经济(62377)
- 业(39060)
- 管理(38931)
- 企(30144)
- 企业(30144)
- 方法(29183)
- 数学(25685)
- 数学方法(25421)
- 农(19438)
- 中国(17245)
- 财(15850)
- 学(15711)
- 业经(14043)
- 地方(13020)
- 农业(12945)
- 贸(11262)
- 贸易(11258)
- 制(11059)
- 易(10900)
- 务(10216)
- 财务(10193)
- 财务管理(10164)
- 企业财务(9667)
- 和(9434)
- 环境(9374)
- 理论(9318)
- 银(9229)
- 银行(9177)
- 行(8638)
- 机构
- 大学(221906)
- 学院(221153)
- 济(86560)
- 经济(84708)
- 管理(78899)
- 研究(78160)
- 理学(68076)
- 理学院(67226)
- 管理学(65777)
- 管理学院(65388)
- 中国(56990)
- 科学(52864)
- 农(50059)
- 京(47169)
- 所(42215)
- 农业(39974)
- 业大(39970)
- 财(38882)
- 研究所(38824)
- 中心(35963)
- 江(34787)
- 财经(31208)
- 范(29328)
- 北京(29076)
- 师范(28891)
- 经(28191)
- 州(27370)
- 院(27311)
- 经济学(26849)
- 农业大学(26195)
- 基金
- 项目(149411)
- 科学(115021)
- 基金(106524)
- 研究(103326)
- 家(95313)
- 国家(94538)
- 科学基金(78696)
- 社会(63427)
- 省(60484)
- 社会科(59992)
- 社会科学(59967)
- 基金项目(56848)
- 自然(52517)
- 自然科(51248)
- 自然科学(51229)
- 划(51020)
- 自然科学基金(50338)
- 教育(47980)
- 资助(43240)
- 编号(41814)
- 重点(34709)
- 成果(34464)
- 发(32973)
- 部(32169)
- 创(30483)
- 计划(30068)
- 科研(29605)
- 课题(29416)
- 创新(28673)
- 大学(27251)
- 期刊
- 济(93307)
- 经济(93307)
- 研究(59896)
- 农(46073)
- 学报(45274)
- 中国(43509)
- 科学(37673)
- 大学(32570)
- 财(31531)
- 学学(30953)
- 农业(30930)
- 管理(26263)
- 教育(22792)
- 技术(18506)
- 融(18265)
- 金融(18265)
- 业(17096)
- 业经(15731)
- 财经(15347)
- 经济研究(15100)
- 问题(13426)
- 版(13343)
- 经(13180)
- 业大(12174)
- 技术经济(10937)
- 图书(10842)
- 科技(10817)
- 农业大学(10367)
- 统计(10134)
- 贸(10067)
共检索到322349条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 谢广成 丁文勇 王秀利 刘洋 徐文琦 张永攀
为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李明想 柏素花 张玉刚 祝军 戴洪义
以苹果幼叶为试验材料,通过同源克隆和RT-PCR方法分离出B_LECTIN基因家族中的一个基因,命名为MdMBL。分析结果表明,克隆得到的MdMBL长度为1 181 bp,包括20 bp的5'非编码区、81 bp的3'非编码区和一个长度为1 080 bp编码359个氨基酸的开放阅读框,推测该蛋白质分子量为39.76 kDa,其等电点为8.72。在构建的MBL系统进化树中,MdMBL与葡萄的MBL的关系最近,其次为橹豆的MBL,与苹果的MBL2同源基因进化关系最远。相对荧光定量RT-PCR分析表明,MdMBL具有组织特异性,在茎中表达量最高,在花中表达量最低;低温胁迫促使MdMBL表达量升高,M...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王倩 张雪 陈亚东 沙珍霞
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1 (Mannan-binding lectin associated serine protease 1,MASP1)是补体凝集素途径中起重要作用的激活蛋白。本研究以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,应用RACE技术和实时荧光定量qRT-PCR技术对半滑舌鳎MASP1基因(Cynoglossus semilaevis MASP1, CsMASP1)进行了克隆和表达模式分析。结果显示,CsMASP1基因c DNA序列全长为2507 bp,5′非编码区长82 bp,3′非编码区长142 bp,开放阅读框长2283 bp,共编码760个氨基酸;CsMASP1基因包含13个外显子和12个内含子,与多数已知鱼类的MASP1基因结构一致;SMART分析显示,CsMASP1包含6个结构域,与哺乳动物、鸟类、其他鱼类的结构域一致;同源比对发现,CsMASP1和鱼类的相似度较高,与金目鲈(Latescalcarifer)的相似性最高,为76%。CsMASP1基因在11种健康组织(血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、皮肤、脾和后肾)中均有表达,其中,在肝、脾和头肾中表达量较高;鳗弧菌(Vibro anguillarum)感染后,CsMASP1基因在6种免疫组织(血液、鳃、头肾、肠、肝和脾)中呈现不同的表达模式,在6种免疫组织中呈现明显的上调表达,肝的表达峰值出现在感染后24 h;脾和鳃的表达峰值出现在感染后6 h;肠、头肾和血液的表达峰值均出现在感染后12h;随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低并恢复至正常水平。研究表明,CsMASP1基因参与了半滑舌鳎的免疫应答过程,本结果为半滑舌鳎的免疫机理研究奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 张泽虎 赵元凤 钟莉 张泽宇 王冬梅 李伟
将海洋红藻-绒线藻(Dasya villosa)经磷酸盐缓冲液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到绒线藻凝集素(DVL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为547ku。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、γ-球蛋白所抑制,仅被牛甲状腺球蛋白所抑制,最小抑制浓度为96.88mg.L-1。2价金属离子Ca2+、Mg2+及EDTA对该凝集素凝集活性没有影响。其凝集活性在25~80℃保持不变为28,90~100℃加热30min,活力为27,仍保留50%的活性,说明其具有较强的耐热性。经t-检验,注射...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐莞媛 马杭柯 孙金秋 段健诚 邓高威 高焕 阎斌伦
为研究Cd2+胁迫下脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)甘露糖集合凝集素(MBL)在肝胰腺中表达量的变化特征,本研究利用重金属镉(Cd2+)对脊尾白虾进行96 h急性毒性实验。实验共设置5组Cd2+浓度胁迫(0、0.01、0.0175、0.021和0.0278mmol/L),分别在Cd2+胁迫后0、3、6、12、24、48、72和96h共8个时间点取样。实时荧光定量结果显示,高浓度Cd2+(0.0175、0.021和0.0278 mmol/L)胁迫下,脊尾白虾MBL基因的表达量先呈上升趋势,在72 h达到峰值后随后下降,但各时间点表达量均与对照组存在显著性差异(P
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 宋亮 钟莉 常亚青
为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能。将刺参(Apotichopusjaponicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652Da。AJL的含糖量为20.9%。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强,在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状...
关键词：
刺参 凝集素 纯化 性质
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于金红 潘鲁青
通过RT-PCR扩增三疣梭子蟹C-型凝集素(C-type lectin like-domain protein,CTLD)基因序列,将目的基因克隆入质粒pET32a,构建原核表达重组质粒pET32a-CTLD。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导CTLD的表达,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。用His GraviTrap Ni亲和层析柱及超滤离心管纯化目的蛋白,并对其进行活性检验。结果表明,构建得到CTLD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;诱导表达出相对分子质量(M)39 600的目的蛋...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王洪乐 齐连芬 杨超沙 吴志明 李亚栋
为了获得新的掌叶半夏凝集素家族基因,以掌叶半夏叶片为材料,根据GenBank中已报道的天南星科凝集素基因序列设计引物,PCR法扩增获得3个掌叶半夏凝集素基因,分别暂命名为PPA15、PPA324、PPA533。其中,PPA15的全长为729 bp,编码243个氨基酸;PPA324的全长为774 bp,编码258个氨基酸;PPA533的全长为777 bp,编码259个氨基酸。利用分析软件和网站等工具对克隆的3个基因进行生物信息学分析,结果显示,PPAs与GenBank中收录的天南星科半夏基因具有较高同源性,
关键词：
掌叶半夏 凝集素 载体构建 原核表达
[期刊] 水产学报
[作者]
徐晓荣 施鹏 徐继林 廖凯 冉照收 严小军
本研究利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术获得了缢蛏半乳糖凝集素基因（ScGL）。ScGL全长为1 282 bp，5′非编码区35 bp，3′非编码区329 bp，开放阅读框918 bp，编码305个氨基酸。氨基酸序列分析显示ScGL无跨膜结构域；与已报道的缢蛏半乳糖凝集素含1个糖识别结构域（CRD）不同，ScGL具有2个CRD。相似性分析显示，ScGL与其他软体动物的半乳糖凝集素具有较高的相似性，与菲律宾蛤仔相似性最高，达65%；与已报道的2个缢蛏半乳糖凝集素相似性分别为39.74%和44.76%。系统进化上ScGL与菲律宾蛤仔半乳糖凝集素聚为一支。重组表达发现ScGL在包涵体表达，分子量约34.4 ku。荧光定量PCR分析显示，ScGL在缢蛏鳃、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和内脏团中均表达；其中肠、内脏团、唇瓣和足中表达量较高，出水管和入水管中表达量最低。消化腺ScGL表达量分别在金黄色葡萄球菌感染后3和48 h显著高于对照组；鳃ScGL表达量分别在鳗弧菌和金黄色葡萄球菌感染后6和48 h显著高于对照组，说明ScGL参与了病原诱导的缢蛏免疫应答。本研究为深入探索ScGL在缢蛏免疫中的作用奠定基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
孙盛明 傅洪拓 宣富君 戈贤平 朱健 吴旭干
C型凝集素(C-type lectin)是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族,为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况,本研究应用cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因(MnLec3)的全长序列,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析MnLec3基因在不同组织、细菌感染后不同时间的表达水平,Western blot和免疫荧光分别分析蛋白的表达水平和细胞定位。结果显示,MnLec3基因cDNA全长1 357 bp,包括125 bp的5′末端非翻译区(UTR)、1 026 bp的开放阅读框(ORF)和206 bp的3′UTR,其中开放阅读框编码341个氨基酸。氨基酸序列比对显示,日本沼虾MnLec3基因含有保守钙结合点(Met 1-Glu17)和糖识别结构域(CRD)。同源性分析结果显示,MnLec3与罗氏沼虾C型凝集素3相似度较高;邻接法(Neighbor-Joining,NJ)进化树分析结果显示,MnLec3与其他甲壳动物C型凝集素聚为一支。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白rMnLec3,并将纯化重组蛋白免疫大鼠获得抗血清,免疫荧光结果显示,绿色荧光信号主要在肝胰腺细胞核中表达。qRT-PCR结果显示,MnLec3在日本沼虾所检测组织中均表达,其中肝胰腺中表达量最高,血细胞次之;与对照组相比,在嗜水气单胞菌刺激12～48 h时MnLec3表达量显著升高,48 h表达量最高,Western blot分析结果显示,MnLec3蛋白表达丰度与基因表达模式基本相似,提示克隆得到的MnLec3参与日本沼虾抵御细菌入侵的免疫过程。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘逸尘 刘丽静 张亦陈 耿绪云 孙妍 孙金生
研究拟通过分析对虾C型凝集素的活性特点,探讨其在对虾先天免疫应答过程中的潜在功能以及在养殖生产实践中的应用。实验利用原核表达系统对中国明对虾C-型凝集素基因的两个串联的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白(rFclectin-CRD1和rFclectin-CRD2)。活性分析结果显示,重组目的蛋白对多种病原菌有凝集和抑制生长的作用,并且具有Ca2+依赖活性;其凝集活性可被半乳糖、肽聚糖、脂多糖等多种病原相关分子模式所抑制,研究结果证实,Fclectin是一种典型的C-型凝集素,它可能作为中国明对虾...
[期刊] 水产学报
[作者]
于金红 潘鲁青 张辉
为研究凡纳滨对虾C-型凝集素的免疫功能,实验利用原核表达系统对凡纳滨对虾C-型凝集素基因的开放阅读框进行了重组表达,并通过纯化分离获得重组目的蛋白,采用血细胞悬浮培养的方法,研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的影响。实验梯度设置为对照组和重组C-型凝集素蛋白(1.0 mg/mL),分别在0、3、6、9、12、24 h取培养的血细胞和培养液进行免疫相关指标的测定。结果表明,重组C-型凝集素经SDS-PAGE分析显示在39 ku处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致,Western-blotting分析可以与anti-His抗体特异性结合,从而证明C-型凝集素重组蛋白在大肠杆菌...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
沈淑芳 朱玲 李加琦 薛素燕 李阳 陈琼琳 毛玉泽 庄志猛 方建光
通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆得到魁蚶(Scapharca broughtonii)C型凝集素(C-type lectin,Sb-Lec1)基因,该基因全长为700 bp,其中,5′-UTR为29 bp,3′-UTR为167 bp,开放阅读框长度为504 bp,编码167个氨基酸,包括长度为23个氨基酸的信号肽序列、129个氨基酸的糖识别结构域(CRD)以及参与二硫键形成的6个半胱氨酸。预测蛋白分子量为19.11 k Da,
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李丹彤 崔铁军 马国庆 汤霞 李熙宜
角叉菜（ Ｃｈｏｎｄｒｕｓ ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）经磷酸盐缓冲液抽提， ２０％～ ７５％硫酸锭分级沉淀，牛甲状腺球蛋白一Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析，可以从红藻角叉菜中纯化出角叉菜凝集素（ＣＯＬ），在 ＰＡＧＥ上显示单一蛋白染色带，在等电聚焦电泳上显示单一蛋白染色带，其ＰＩ为８．３０。纯化后的ＣＯＬ的最大紫外吸收峰在２８５ ｎｍ，用ＳｅＰｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析测得其分子量为 ４ ２５２。该凝集素可以凝集人的Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ型红细胞，且凝集活性相同，在对人、兔、鲤、鲫的红细胞的凝集作用中，对兔红细胞的凝集作用最强，且不被己测试的Ｄ－半乳糖、Ｄ－果糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、...
关键词：
角叉菜 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋玉娟 崔铁军 李丹彤 刘扬
海萝(Gloiopeltisfurcata)经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE 52纤维素离子交换层析和SephadexG 200分子筛层析,从中纯化出海萝凝集素(GFL),在PAGE和等电聚焦电泳上各显示单一蛋白染色带,其等电点为9 0。用SephadexG 200分子筛层析测得其相对分子质量为8318。海萝凝集素除对人血型红细胞无凝集活性外,对单胞藻及兔、鲤、鲫的红细胞均表现出一定程度的凝集活性,对兔红细胞的凝集活性最强,且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖所抑制,而被D-甘露糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋抑制。该凝集素在pH4 0～10 2均有活性,而在...
关键词：
海萝 凝集素 纯化 理化性质
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
