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[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙长坡 常晓娇 伍松陵 沈晗
【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李俊霞 梁志宏 关舒 汪晓 王宁 计成 牛天贵
【目的】筛选能降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,以期在该毒素的生物脱毒中得到应用。【方法】以香豆素为惟一碳源和能源进行AFB1降解菌株的初筛,之后将初筛的10株菌分别降解浓度为100μg·kg-1的AFB1。【结果】筛选出的NMO-3菌株降解AFB1能力达85.7%,显著高于其它菌株(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
关心 何剑斌 董双 臧健 龙淼
以香豆素为唯一碳源，利用微生物去毒法，初步筛选出３２株生长良好的活性菌株，再添加ＡＦＢ１标准品（菌液毒素终质量浓度２．５μｇ／ｍ Ｌ），通过高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测ＡＦＢ１降解率，结果显示，从鸡粪中分离并命名为Ｆ６的菌株高效降解黄曲霉毒素Ｂ１，降解率达８３％。对菌株Ｆ６进行细胞形态及生理生化特性鉴定，初步判断为芽胞杆菌属，１６Ｓ ｒｒＮＡ序列同源性比对分析，与蔬菜芽胞杆菌国际标准株ＡＴＣＣ７００００５（登录号Ｎｒ０４３３２５．１）核苷酸同源性为９９．３％，由此可确定，Ｆ６菌株为蔬菜芽胞杆菌，命名为ＢＡＣｉＬＬｕＳ ｏＬｅｒｏＮｉｕＳ ｇＸ０１（登录号ＫＰ２９７８９６）。分离菌株Ｆ６发酵液各．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏晓 张奇 张文 李慧 李培武
【目的】为预防和降低黄曲霉毒素污染,在前期探明黄曲霉毒素产毒菌株鉴别标识性分子PO8蛋白的基础上,欲研究建立高灵敏、大容量反应体系的双抗夹心ELISA检测技术,为污染源头监控提供技术支撑。【方法】用干菌丝作标识性分子PO8蛋白的参考物,以高压均质制得的黄曲霉菌裂解液为检测抗原,纯化后的PO8-VHH作包被抗体,产毒菌株多抗作检测抗体,抗原、抗体分别以200μL/孔加入到96孔酶标板,进行大容量反应体系夹心ELISA法的试验。优化相关理化因素,以阳性孔OD_(450nm)≥1.0,阳性孔OD_(450nm)/阴性孔OD_(450nm)较高为原则,确定最佳试验条件,建立标准曲线。并通过样品添加回收试验、重复性试验、特异性试验,对建立的夹心ELISA方法进行性能评估。【结果】通过棋盘格试验确定了最佳包被抗体浓度为3.0μg·mL~(-1),最佳多抗的工作浓度为2.5μg·mL~(-1)。优化反应条件确定:最佳抗体包被条件为4℃过夜,最佳封闭液为3%的BSA,最佳封闭条件为37℃封闭2 h,最佳多抗作用条件为37℃反应50 min。在优化后的条件下建立了夹心ELISA方法的标准曲线,对黄曲霉菌检测限可达到0.1μg·mL~(-1),比前期报道的常规容量反应体系灵敏度提高了约10倍。该方法特异性强,与青霉菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、赭曲霉菌均无交叉反应,且检测非产毒黄曲霉菌株信号值较低,接近于阴性值。重复性试验显示,板间变异系数为1.5%—5.8%,板内变异系数为0.4%—3.2%,均小于7%,说明该方法稳定性好。采用该方法对花生、玉米等农产品进行添加回收试验,平均回收率在81.9%—109.0%。【结论】本研究建立的大容量反应体系夹心ELISA方法可快速、高灵敏地检测黄曲霉毒素产毒菌,为从源头上控制黄曲霉毒素污染提供了新的快速、方便的检测技术支撑。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王宁 马秋刚 计成 关舒 牛天贵
本研究对一株具有降解黄曲霉毒素B1活性的黏细菌的产酶条件进行了优化。通过单因素实验和正交实验得到最优化的培养基以及培养条件。优化后的培养基为:酵母粉7 g/L、CaCl2.2H2O为1 g/L、MgSO4.7H2O为0.5 g/L、VB12为750μg/L;并确定其最佳培养条件为:初始pH 7.5、接种量20%、发酵时间50 h、发酵温度30℃。在上述最佳培养基和最佳发酵条件下,该菌株降解黄曲霉毒素B1的能力为78.2%。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵以桥 余烨颖 吕雅婷 曾昱龙 胥伟
以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。
关键词：
茶树籽 含水量 黄曲霉 黄曲霉毒素
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵以桥 余烨颖 吕雅婷 曾昱龙 胥伟
以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。
关键词：
茶树籽 含水量 黄曲霉 黄曲霉毒素
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋春美 师俊玲 刘延琳
【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力进行分析,并对3种方法的鉴定结果进行比较。其中在紫外荧光法中,黑曲霉接种至可可浆培养基(CCA)培养,其他霉菌接种至察氏培养基(CA)培养,培养后能够产生荧光的菌株被认为是OTA产生菌。同时分别用高效液相色谱法(HPLC)和OTA胶体金试纸条对所有菌株培养物中的OTA进行检测。【结果】以HPLC检测结果为标准,用紫外荧光法对OTA产生菌初筛的假阳性率较高,假阴...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史莹华 方丽云 孙宇 许梓荣 王成章
选用60头质量28 kg左右的“杜长大”三元杂交猪,随机分为2组,每组3个重复,每重复10头猪(公母各半),分别饲喂基础日粮(C组)和基础日粮+0.1 mg/kg黄曲霉毒素(AF组),预试期7 d,正试期90 d,研究黄曲霉毒素对猪生长性能、内脏器官相对质量、血清和肝脏酶活性指标的影响。结果表明,黄曲霉毒素(AF)显著降低了试验猪的生长性能,AF组猪日增重降低了12.90%(P<0.01),料重比提高了7.54%(P<0.01);AF显著影响试验猪内脏器官的相对质量,AF组猪肝脏、肾脏、脾脏、胰脏的相对质量分别较C组提高了8.24%(P<0.05)、27.27%(P<0.01)、41.18%(...
关键词：
黄曲霉毒素 猪 生长性能 肝功能
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
畅晓渊 刘国荣 李平兰 Magdy M.Osman 吴寒宇
通过抑菌活性试验、蛋白酶敏感性试验、菌株的动力学生长曲线测定、菌株的生理生化试验以及16S rRNA序列鉴定试验,对埃及传统Domiati奶酪中的产抗黄曲霉毒素的活性物质的菌株进行分离与鉴定。结果显示:分离得到的菌株的发酵上清液对多株受试真菌均有明显抑制作用,尤其对产生黄曲霉毒素的黄曲霉(Asper-gillus flavus)有很强的抑制效果;该菌株产生的抑菌活性物质不是蛋白类物质,也不同于一般细菌素;该菌鉴定为扩展短杆菌(Brevibacteriumlinens),命名为lpl-8菌。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王妍入 李培武 张奇 丁小霞 张文
【目的】笔者实验室前期免疫并构建噬菌体展示纳米抗体库,应用此抗体库筛选、制备可以用作黄曲霉毒素无毒替代抗原的纳米抗体。本研究旨在探明已筛选出的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5用作黄曲霉毒素替代抗原的活性,为后续纳米抗体的合成以及黄曲霉毒素绿色免疫分析方法的建立奠定基础。【方法】前期,笔者实验室对羊驼免疫黄曲霉毒素抗原(AFB1-BSA),经过5次免疫后,取血,提取RNA,反转录为cDNA,并采用PCR技术对抗体可变区VHH区域进行扩增,与载体pComb3X偶联,构建噬菌体展示纳米抗体库;经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与黄曲霉毒素竞争结合抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11的噬菌体展示纳米抗体...
关键词：
黄曲霉毒素 模拟抗原 噬菌体展示纳米抗体
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
章先 王继璇 程高钏 李可 张晓峰 孙孟娇 程昌勇 宋厚辉
【目的】真菌毒素可污染农产品和动物源性食品，其中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)毒性强、危害大，建立AFB_1快速、高灵敏和便捷的检测方法对于监测相关产品中AFB_1污染水平，保障人和动物健康均具有重要意义。本研究基于侧向层析技术原理，采用竞争模式，优化建立免疫层析检测方法，以实现AFB_1的快速定性检测和定量分析。【方法】通过比较分析不同粒径金颗粒标记抗体效果，优化确定免疫层析各组分材料类型、相关缓冲液配方及最佳使用质量浓度，建立AFB_1高灵敏定性定量免疫层析检测方法。【结果】优化建立的AFB_1免疫层析检测法在实际样本中的定性和定量检测限分别为2.5和0.5μg·kg~(-1)，灵敏度高、特异性强，与其他常见真菌毒素无交叉反应，加标回收实验结果显示：该方法准确稳定，且对AFB_1天然污染样本的定量检测结果与商品化试剂盒及LC-MS/MS一致性较好。【结论】本研究制备的免疫层析检测法可用于样本中AFB_1污染的快速定性检测与定量分析，适合缺乏实验条件的基层检验检疫机构和农产品加工企业对大量样本进行快速筛查，样本检测结果疑似阳性再采用仪器法进行确认，可降低检测成本，提升检测效率，同时为建立其他病原微生物免疫层析检测方法提供参考。图9表2参26
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程安春 刘艳丽 朱德康 汪铭书 胡骑 陈孝跃
【目的】(1)建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法;(2)探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官(细胞)规律,为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据,为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】(1)利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法,结合石蜡切片技术,建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法;(2)7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素(AFB1)含量为150μg·kg-1的全价饲料,分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192h各剖杀2只,取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋,应用建立的...
关键词：
免疫组化 黄曲霉毒素 雏鸭 侵染
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