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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胡白石 卢玲 刘凤权 许志刚 陈建东 焦国尧
提取梨火疫病菌 (0 0 5 6菌株 )的脂多糖免疫家兔 ,获得抗血清 ,建立了检测梨火疫病菌的间接免疫荧光染色和协同凝集检测技术 ,对梨火疫病菌的不同菌株和人工接种发病样品实施了检测。结果表明 ,这 2种方法可以准确、灵敏地检测梨火疫病菌及样品 ,方法简单、快速、实用 ,可以在中国口岸推广使用 ,减少梨火疫病进入中国的风险。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胥婧 沈秀萍 邵秀玲 胡白石 许志刚
根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
罗志萍 洪霓
选取不同浓度的柑橘溃疡病菌SOB培养液,利用载玻片进行固定、封闭、抗体结合、免疫荧光标记及荧光强度检测,以探讨免疫荧光检测技术在柑橘溃疡病菌快速检测方面的应用。结果表明,30℃下用BSA封闭2h,30℃下抗体结合1 h,荧光抗体浓度为4μg/mL,室温放置40 m in后,在荧光显微镜下可以清楚看到绿色的柑橘溃疡病菌体。该方法操作简便,检测过程仅需4 h,抗原抗体反应特异性极强,检测灵敏度可达103cfu/mL。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
田国忠 张锡津 朱水方 张成良 罗飞 黄文胜
以感染类菌原体ＭＬＯ的泡桐组培苗为病原繁殖材料，采用差速离心和Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心来提纯ＭＬＯ作为免疫抗原制备兔抗血清。抗血清经健康汁液吸收后，作为第一抗体，用异硫代氰酸荧光素ＦＩＦＣ标记的羊抗兔免疫球蛋白作为第二抗体，进行间接免疫荧光显微镜检查染病组织中的ＭＬＯ特异性荧光。经与ＤＡＰＩ染色技术比较，找出了适宜的徒手切片和减少非特异性反应的途径。此技术具有灵敏度高、特异性强和测定简便等特点。适用于ＭＬＯ组织定位、组培苗脱毒效果评估、病原株系鉴定和病害检疫等。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张舍郁 程安春 汪铭书 沈婵娟 李传峰
【目的】建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDVIgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 钱江伟 邓英 孙明 喻子牛
用苏云金杆菌菌株ＨＤ－１和７２１６的伴胞晶体蛋白碱解产物作抗原，制备相应抗血清，并用协同凝集反应测定ＨＤ－１和７２１６的晶体蛋白的含量，其最低检测量分别为７８ｎｇ／ｍｌ和１３０ｎｇ／ｍｌ。用生物测定方法测定ＨＤ－１和７２１６经碱溶的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．４５２μｇ／ｍｌ和０．７６３μｇ／ｍｌ。两种方法测定的结果有一定的相关性。用协同凝集反应测定苏云金杆菌晶体蛋白含量比火箭免疫电泳、环状沉淀反应、双相单扩散反应的灵敏度高，比ＥＬＩＳＡ的灵敏度略低，但操作更简便、快速。
关键词：
苏云金杆菌 晶体蛋白 协同凝集反应
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘威 何深宏 任绍科 李小燕 杨雪芬 程方俊 周作勇 曹立亭
通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
缪云琴 孟然然 唐唯 杨仙 李灿辉
晚疫病是云南省马铃薯第一大病害，近年在云南省种植区有逐年加重的趋势，从１９９８年发现晚疫病菌的２种交配型以来，有性生殖的风险也随之增加。文章以２０１０年来自云南省马铃薯主产区的８６个晚疫病菌菌株为材料，以对峙培养检测法检测结果为准，比较分析了ＣＡＰｓ标记和Ａ２特异性ＤＮＡ片段扩增方法的准确性。研究证实了２种分子标记检测方法均可以准确检测出晚疫病菌Ａ１和Ａ２交配型，但不能区分Ａ２和Ａ１Ａ２交配型。Ａ２交配型占总菌株的８２．５６％，在云南省所有马铃薯主产区都存在，已成为云南省晚疫病菌群体中的优势交配类型。
关键词：
晚疫病菌 交配型 对峙培养 分子标记检测
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王秀华 王崇明 黄倢
用纯化栉孔扇贝(Chlamysfarreri)急性病毒性坏死症病毒(AVNV)免疫兔子,以兔抗血清为一抗,荧光标记的羊抗兔抗体为二抗,采用冰冻切片技术,建立了栉孔扇贝AVNV的间接免疫荧光检测方法。用该方法分析栉孔扇贝和海湾扇贝(Argopectenirradians)体内AVNV感染强度,并对感染率进行统计。结果表明,栉孔扇贝的肾脏、肝胰腺中,AVNV阳性信号最强,呈现中度到重度感染,其AVNV感染率100%。鳃丝、性腺及闭壳肌中未检测到阳性信号。在海湾扇贝的肝胰腺及肾中AVNV的感染率也较高。提示AVNV感染扇贝的靶器官主要是肾脏、肝胰腺。对与栉孔扇贝同一海区养殖的海湾扇贝在栉孔扇贝发病期...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
彭旺 唐小明 葛猛 杨涛涛 屈泰龙 余兴龙
以分离的猪萨佩罗病毒PSV Hu N1/2016株感染PK15细胞,制备抗原板,建立检测猪血清中PSV抗体的间接免疫荧光(IFA)方法。结果表明:一抗最佳稀释浓度为1∶300;FITC标记的羊抗猪荧光二抗最佳稀释浓度为1∶300。该方法特异性强,敏感度高,既能将PSV抗体与PRRSV、FMDV、PCV、CSFV抗体区分开,也可以检测到中和效价0.128的阳性血清。用该方法检测湖南省部分规模化猪场208份临床血清样品的总阳性率为68%,表明PSV在湖南省流行普遍,且其感染主要发生在保育阶段。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈晨 陈娟 胡白石 白艺珍 姜英华 刘凤权
【目的】细菌性梨火疫病最早发生在北美洲,随着水果贸易等人为因素向世界其它地区传播。对当地的生物多样性和经济带来了极其严重的威胁,亟需对其在中国的适生区进行预测。【方法】苹果开花期的温度和降水量是影响梨火疫病菌适生分布的关键气候因子,本研究根据这一生物学特性及生态环境因子,应用地理信息系统分析得出了梨火疫病在中国两个苹果优势产区的潜在定殖区域。【结果】用该方法对梨火疫病在欧洲的发生情况的预测结果与其历史分布记录相符,使用相同的空间建模方法对梨火疫病在渤海湾和黄土高原两个苹果优势栽培产区的潜在定殖区域进行风险评估,结果表明这两大苹果产区中优先扶持的县大多处于梨火疫病发生的高风险范围。【结论】梨火疫...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨先乐 贺路 艾晓辉 周建光 柯福恩
建立了间接红细胞凝集反应检测中华鳖血清抗体的方法。试验证明，致敏抗原菌体浓度为３×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、ＢＳＡ浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，致敏红细胞浓度２．５％时（无论是人还是绵羊红细胞），本方法能获得最敏感的结果。加入稳定剂后的致敏红细胞，在８０ｄ内检测结果没有显著的差异。本试验测得该方法的灵敏度为１３．４±４．２，而且证明本方法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和重复性。
关键词：
中华鳖,抗体,间接红细胞凝集反应,检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙伟 吴中勤 胡青海 李树香 李刚
利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）， 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性， 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明， 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐重新 杨晶祎 陆梦晓 仲建峰 张存政 张霄 何鑫 刘媛 刘贤金
利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC5...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
秦磊 陆承平 陈怀青
将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组, 每组8 只。在第2 次免疫后第7 天用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT), 检测脾淋巴细胞转化率与腹腔巨噬细胞吞噬活性, 并检测各组小鼠的全菌凝集抗体。结果表明, 亚单位疫苗的这两项细胞免疫指标明显高于对照组,但略低于全菌灭活苗免疫组, 而细胞免疫指标与抗体水平无对应的平行关系。
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