以稻瘟病菌粗毒素提取液作为抗性筛选的选择压 ,对水稻体细胞系和花药及其愈伤组织进行抗病筛选。结果表明 ,毒素对体细胞和花药愈伤组织的诱导和植株再生有着明显的抑制作用 ,抑制程度随浓度的增加而增大。经过滤灭菌的粗毒素的毒性大于高压灭菌的毒性 ,花药的抑制程度大于种子胚愈伤组织 ,花药筛选系统的适宜毒素浓度低于体细胞筛选系统的毒素浓度。粗毒素液可以作为抗病筛选的选择压

以胚根抑制率测定８个稻瘟病菌株培养滤液毒性、Ｒ－０６９－１菌株的产毒动态及各菌株滤液毒性对湿热灭菌温度（１２１～１２６℃）的稳定性。结果表明，菌株间毒性差异显著，据抑制率大小可分为强毒、中毒、弱毒、无毒４个组；Ｒ－０６９－１菌株的产毒动态随培养时间增加而毒性增强，至２８天达最大，产毒盛期为８～２４天；菌株毒液具良好的耐高温性。

利用组织培养技术建立了水稻悬浮细胞和愈伤组织培养体系。用木聚糖酶激发子处理水稻悬浮细胞,引起细胞内过氧化氢和超氧阴离子含量迅速升高。木聚糖酶和稻瘟病菌提取物处理水稻悬浮细胞1 h后,编码几丁质酶的基因Cht-1表达明显增加,而编码病程相关蛋白的PR10基因没有表达,但处理12 h,后者表达明显增加。用稻瘟病菌提取物和激发子木聚糖酶处理水稻悬浮细胞,均诱导水稻细胞合成樱花素——专抗稻瘟病的抗毒素。若用它们处理水稻愈伤组织,则引起组织褐化、生长量降低、密度下降。初步结果表明:水稻悬浮细胞和愈伤组织是研究水稻抗稻瘟病机制方便、合适的实验材料。

从江苏省稻瘟病不同优势小种菌株的液体培养液中提取稻瘟病菌粗毒素，以本地区较感病中粳稻新品系Ｌ１１９为材料，研究不同稀释浓度粗毒素对水稻种子萌发、成熟胚愈伤组织诱导及分化的影响；在诱导和分化培养基中分别加入适宜的稻瘟病菌粗毒素进行胁迫培养，以获得抗病性有所增强的变异植株。结果表明，种子萌发后胚芽的长度随着粗毒素浓度的提高而降低，在浓度达到１ ｍ Ｌ／１０ ｍ Ｌ时种子萌发完全受到抑制。种胚愈伤组织的生长随着粗毒素浓度的增加受抑制程度逐渐增强，在浓度为２５％时无愈伤产生；愈伤组织在分化时对粗毒素较敏感，在粗毒素浓度为５％时分化成苗数急剧下降。对诱导、分化２个阶段双重粗毒素胁迫培养的组培再生植株进行．．．

对水稻稻瘟病拮抗菌的筛选及其生物活性的研究结果表明， 分离筛选得到的１４１ 个细菌菌株在室内对稻瘟菌菌丝具有很强的抑制能力； 在室外有９ 个细菌菌株对稻瘟病具有防治作用， 但是不同菌株之间防效存在着显著差异， 其中 Ａ８， Ｍａ３２， Ａ Ｓ１２ 和 Ｂ６ 的防效较好， 它们的平均防病效果分别是８２３２％ 、８２６１％ 、６６１６％ 和６２６１％ 。其中一些菌株处理种子对秧苗具有促进生长作用。

用低海拔优质粳稻江南香糯和高海拔高抗稻瘟病粳稻云系3号进行常规杂交,稻瘟病抗性跟踪,于F2取稻瘟病抗性好的稻穗进行花药培养,共接种花药4608枚,获得绿苗567株,绿苗克隆35个。经宜良稻瘟病病圃田间稻瘟病抗性筛选获得19个高抗稻瘟病克隆,结合米质外观考察等筛选到H18等9份优质抗稻瘟病水稻材料。同一份克隆来源的花培后代植株株系内性状整齐一致,可直接测恢或转育不育系,为开展优质抗稻瘟病滇型杂交水稻新品种选育提供了材料。

为探索前胡(Radix peucedani)诱导水稻抗稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)活性成分的活性,采用生物活性跟踪法对前胡的诱抗活性成分进行了初步研究,分离了前胡浸提物中的有效成分,并对其生物活性进行了测定。结果表明:前胡丙酮浸提物诱抗水稻抗稻瘟病菌的效果好于其他溶剂浸提物;将丙酮浸提物通过硅胶柱层析,分离得到A4、A5、A6流分,其诱抗水稻抗稻瘟病菌的效果较强,3个流分不同质量浓度的诱抗效果达21.48%~59.54%,且在供试的3个质量浓度范围内,都随着流分质量浓度的降低,防效略有升高。

每年选用天津市有代表性的7群11～15个稻瘟生理小种,先后对768个品种(系)进行抗谱测定,抗菌率达80～100％有34个品种(系),占供试品种(系)4.4％,抗菌率在60～79％属中等抗病的品种(系)有109个,占14.2％,其余625个品种(系)属感病类型。另外用7群10个小种对抗菌力较高的74个品种(系)进行抗病类型划分,抗菌率在90％有4个类型,抗菌率在80％有3个类型。根据各地优势小种分布选择抗源和供生产上品种轮换种植的参考。以上结果说明抗谱测定是相对稳定的,对生产与育种有实用价值。

用稻瘟病菌 (Pyriculoria oryzae Cav.) 非致病性菌系89-44-1 和致病性菌系89-10-3, 89-7-3, 89-42-3 和89-12-1 的培养过滤液对寄主作毒力测定, 研究了粗毒素在水稻稻瘟病害中的作用初步确定稻瘟病菌粗毒素为致病性因素, 在病菌侵入寄主体内时起作用。不同菌系对寄主植物的毒力存在差异,金属元素Zn、Mn、Fe对稻瘟病菌菌丝生长有促进作用。

为筛选并鉴定水稻稻瘟病拮抗细菌,采用平板测定法筛选拮抗细菌,通过形态学观察、生理生化特征及16SrDNA序列分析鉴定菌株。结果表明:从水稻叶片、稻田土壤中共分离得到168株细菌,其中26株对稻瘟病菌有拮抗作用,8株具有强拮抗作用的菌株有,8个代表性的菌株对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌均表现了强的拮抗作用。选择拮抗性能最强的一个菌株T61,鉴定结果为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。本试验所筛选的枯草芽孢杆菌对3种主要的水稻真菌病害有显著的抑制效果。

１９７９年以来对４５２５９份材料的抗性鉴定表明，国际稻品种中抗性材料最多，抗谱范围广、是抗源材料的主要来源。抗谱在９０％以上的抗源有６６份。利用抗源育成推广种５个。在省内外推广１千万公顷。研究结果表明，稻瘟病菌种群变异与水稻品种抗性变异密切相关。一个地区品种抗性丧失，是由病菌优势种群及潜在致病小种的分布和出现频率所决定。潜在致病小种随品种种植面积比率的扩大而增殖，最后成为优势小种。品种自身分离菌回接致病率逐渐增长，品种抗性就逐渐下降。

水稻-稻瘟病菌互作已成为研究植物与病原物互作的模式系统,本文从稻瘟病菌侵入机制、效应分子功能、水稻抗稻瘟病免疫系统及抗病基因和无毒基因的互作等方面对水稻与稻瘟病菌互作机制研究进展进行了综述,并对有待进一步研究的问题进行了讨论和展望。

从云南土壤中筛选分离到一株抗水稻稻瘟病菌的放线菌ECO 00008,对该菌株进行摇瓶发酵后采用乙酸乙酯萃取发酵液,测定其提取物(FR、FE、MR、ME)对水稻稻瘟病的抗菌活性。结果表明,萃取物FE和ME对水稻稻瘟病菌孢子萌发和菌丝生长具有较强的抑制活性,对孢子萌发抑制率分别为99.00%和95.60%,盆栽保护效果分别为97.61%和75.07%。

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，且随着全球人口的增长，水稻的需求量也日益增加，因此其安全生产是全球极其重要的民生问题。稻瘟病菌引起的稻瘟病是水稻最具毁灭性的病害，威胁全球的粮食安全。施用杀菌剂和种植抗病品种是防治该病害的常用策略。然而，杀菌剂的不合理施用会导致环境污染以及病原菌抗药性等问题；并且，病原菌田间致病型复杂、群体组成变化快，导致抗病品种种植几年后丧失抗病性。因此，深入揭示病原菌与寄主互作的分子机制，解析病原菌突破寄主防御、实现侵染致病的机制，可望为新型低毒高效防稻瘟菌剂靶标的发掘提供新思路，同时为应用基因编辑等方法提高寄主植物的抗病性提供重要参考价值。本文总结了稻瘟病菌与水稻互作过程中识别水稻表面信号，经胞吞作用和胞内级联途径将寄主信号传导至胞内，并放大信号，进而调控侵染必需的附着胞的形成机制；同时也介绍了病菌效应子与水稻抗病相关蛋白互作过程中“攻”与“防”的研究进展，并在此基础上对未来有待进一步深入开展的研究方向进行了探讨。

【目的】研究OsAOS2在水稻抵抗稻瘟病菌和白叶枯病菌中的作用，为水稻抗病育种工作提供依据。【方法】采用同源重组方法和CRISPR-Cas9系统分别构建OsAOS2的过表达载体和敲除载体，遗传转化获得转基因水稻，筛选得到过表达株系（OsAOS2-OE）和纯合敲除株系（OsAOS2-KO）。将野生型水稻日本晴（NPB）植株接种稻瘟病菌和白叶枯病菌后，通过qRT-PCR检测OsAOS2表达量的变化情况；将OsAOS2转基因水稻和NPB接种稻瘟病菌和白叶枯病菌后，观察植株表型的变化；在稻瘟病菌侵染下，对OsAOS2转基因水稻和NPB进行抗病相关基因的qRT-PCR分析；在几丁质和flg22诱导下，检测水稻活性氧（ROS）积累情况；同时，分析接种稻瘟病菌24 h后OsAOS2-KO和NPB的转录组数据。【结果】qRT-PCR分析表明，NPB接种稻瘟病菌48 h和白叶枯病菌8 d时，OsAOS2表达量显著上调。对OsAOS2转基因水稻和NPB喷雾接种稻瘟病菌7 d后，NPB病斑面积显著大于OsAOS2-OE且小于OsAOS2-KO；剪叶法接种白叶枯病菌14 d后，NPB病斑面积显著小于OsAOS2-KO。对OsAOS2转基因水稻接种稻瘟病菌后，抗病相关基因OsPBZ1、OsPR1a、OsPAL1、OsLOX5在OsAOS2-OE中的表达量显著上调。在几丁质和flg22诱导下，OsAOS2-KO中的ROS的积累量显著低于NPB，但是起峰时间比野生型有所提前。转录组数据分析表明，上调基因和下调基因分别有1605个和1151个。上调差异基因主要富集在金属离子结合和核糖体通路中，下调差异基因主要富集在翻译通路和细胞外区域。韦恩图显示，52个基因在NPB中受稻瘟病菌诱导，但在OsAOS2-KO中受到抑制；11个基因在NPB中受抑制，但在OsAOS2-KO中受诱导。对这63个表达模式相反的差异基因进行GO和KEGG分析发现，参与应激反应和植物激素信号转导通路的基因数最多。【结论】稻瘟病菌和白叶枯病菌可以诱导OsAOS2的表达，OsAOS2通过病原菌分子模式触发的免疫（PTI）途径和茉莉酸（JA）、水杨酸（SA）介导的抗病反应正调控水稻对稻瘟病菌的抗性，同时，OsAOS2在水稻抵御白叶枯病菌中起重要作用。