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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王玉萍 黄巧云 陈雯莉
为确定土壤中的ＤＮＡ通过自然转化的方式发生水平基因转移的频率，将１个带有ｅｇｆｐ和卡那霉素抗性基因ＫＡＮｒ的质粒ＤＮＡ添加到自然土壤中，分离菌悬液，上流式细胞仪分选能发出绿色荧光且具有卡那霉素抗性的阳性转化子，确定土壤中发生自然转化的频率小于１０～（－７）。分离的菌悬液通过培养基的富集，从３９ ７３６ ４２６个细胞中分选获得了８２个细胞，最终得到了纯化的阳性转化子，证实土壤中的ＤＮＡ通过自然转化发生了水平基因转移。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王文娟 蔡春芳 叶元土 施陈江 夏燕美
从异育银鲫外周血中分离淋巴细胞,利用RPM I-1640培养基培养48 h后,采用流式细胞仪分析方法研究不同浓度的植物凝集素(phytohem agglutin in,PHA)(0μg/mL、80μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1 000μg/mL、1 200μg/mL)对外周血淋巴细胞转化率的影响,旨在探索异育银鲫外周血淋巴细胞体外转化最适刺激剂量。结果表明:(1)在PHA浓度0~400μg/mL的范围内,随着PHA浓度的增加,淋巴细胞转化率也增加,呈浓度依赖的关系,但当PHA的浓度增加到1 200μg/mL,淋巴细胞转化率明显下降。其中P...
[期刊] 清华大学学报(自然科学版)
[作者]
赵精晶 尤政
流式细胞仪是用于高通量细胞分析和分选的高端生命科学仪器,被广泛应用于科学研究和临床诊断。最新的一个发展方向是以微流体芯片为核心的高集成度、微体积、全封闭、零交叉污染的微流体流式细胞仪。该文针对微流体流式细胞仪的三维(3-D)样本聚焦、光斑整形和片上分选等3项关键技术开展了研究。3-D流体动力聚焦微流体芯片能够在每秒数米的高流速下将样本流聚焦在流道中心,聚焦后的样本流边长仅为10μm量级。经设计的二元光学器件可将激光光斑整形为矩形准平顶光斑,比传统流式所使用的椭圆形Gauss光斑,矩形平顶光斑具有更均一的能量分布。采用电火花空化微气泡,利用空泡膨胀产生的射流实现高精度的单细胞片上分选。将整合了上述技术的微流体流式细胞仪应用于标准荧光微球的分析测试,综合性能达到或接近于现有的大型传统流式细胞仪。
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
吴安庆 聂晶 裴海龙 张健 周光明
根据放射医学专业的实验教学特点,开设了第二课堂讲述流式细胞术的原理和应用,并设计了使用流式细胞仪检测X射线照射后肿瘤细胞的凋亡和周期的实验课。同时,每个星期安排固定时间让学生练习操作,熟练掌握流式细胞仪,加强学生对理论知识的理解,提高学生的科研兴趣和动手能力。
关键词：
流式细胞仪 放射生物学 实验教学
[期刊] 水产学报
[作者]
胡锦丽 任星潮 刘逸尘 孙金生 耿绪云 张亦陈
为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析,本研究以中华绒螯蟹为例,依据其血细胞内具有颗粒结构的特征,与常规显微观察对比,探讨了一种基于图像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法,并测量了体质量为(10±3) g的中华绒螯蟹的血细胞对直径1μm微球的吞噬情况。结果显示,两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒,但由于缺乏精细的量化标准,批次样品的人工辨识结果波动较大;而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象,利用高精度检测模块测量,结果更准确、客观,而且通量高、重复性好。测量结果显示,中华绒螯蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65%、36.68%±6.84%、7.80%±1.16%和16.51%±5.60%,依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰,缺乏过渡样点,提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证实,中华绒螯蟹的4类血细胞都具有吞噬功能,并以无颗粒细胞为主要吞噬类群;吞噬微球的细胞比例在注射后6 h内呈钟型曲线变化,4 h可达峰值(5.69%±0.44%),表明中华绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明,图像流式细胞仪适合于中华绒螯蟹的血细胞分类分析和功能研究,本研究结果为同类研究提供了重要参考,将有助于更全面了解甲壳动物血细胞的功能。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
孙敬锋 冼健安 张铁军 王安利
应用流式细胞术对墨吉对虾(Penaeus merguiensis)、南美白对虾(Penaeus vannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)三种对虾的血细胞类型进行了比较研究。根据其血细胞的前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)特征的不同将血细胞分群,FSC和SSC二维图分析表明三种对虾的血细胞都可分为三个亚群:透明细胞、小颗粒细胞、大颗粒细胞。同时还对各种类型血细胞所占比例进行了比较研究,发现各个亚群血细胞所占组成比例在三种对虾之间具有相似性。其比例均为:小颗粒细胞最多,约为45%~49%;透明细胞次之,约为26%~28%;大颗粒细胞最少,约为10%~12%。
关键词：
流式细胞术 对虾 血细胞 分群
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黄雄 郭英华 田林 李全梓 岳志强
以买麻藤(Gnetum montanum)为内参,测定5种常用裂解液(Tris·MgCl_2、LB01、WPB、Otto’s、Galbraith’s)对桫椤(Alsophila spinulosa)细胞核的裂解效果,并通过比较桫椤和买麻藤流式细胞仪测定的荧光峰值,计算出桫椤的基因组大小。结果表明:5种裂解液中,WPB为桫椤最佳裂解液;桫椤基因组大小为6 003.25Mb,即2C DNA含量为6.138 pg。
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
朴莹 江寅申 刘衍朋 余华海 高小炎
发现一种三级胺氮氧化物聚合物胶束（OPDEA-PS）具有革兰氏阳性细菌（G+）特异性粘附且对红细胞或其他血液成分粘附相对较弱的特性。利用这一特性研究了一种基于流式细胞术的快速血液细菌分型检测方法。结果显示，将不同比例的金黄色葡萄球菌（G+）和大肠埃希菌（G–）或肺炎链球菌（G+）和铜绿假单胞菌（G–）与血液混合，加入终浓度为0.01 mg/mL的~(Cy5)OPDEA-PS胶束，孵育10 min后用流式细胞术或平板计数法检测，得到流式检测准确率高于90%，平板计数法准确率低于80%。相比而言，流式检测法具有操作简单、快速高效、准确率高的优势。这种用流式细胞术快速分辨细菌革兰氏分型的检测方法将有助于临床上菌血症等急性血液细菌感染性疾病的细菌类型初判，达到及时诊断和治疗的目的。
关键词：
流式细胞术 细菌 血液感染 快速检测
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刀国华 黄巧云 陈雯莉
采用化学吸附方法与紫外微量DNA浓度检测技术,考察恒电荷土壤活性颗粒吸附及固定胞外DNA(质粒pHTG)的特点,同时研究不同矿物对枯草芽胞杆菌发生自然转化的影响。不同种类的矿物颗粒对质粒pHTG的吸附能力不同,其中以针铁矿最强,高岭石次之,蒙脱石则为三者中最弱的。同时矿物的存在会对枯草芽胞杆菌的自然转化率产生一定的影响,其转化效率随着矿物质量浓度的增加而降低,当矿物质量浓度由0mg/mL增加至8mg/L时,与对照相比,转化效率下降2个数量级。
关键词：
自然转化 枯草芽胞杆菌 土壤矿物 吸附
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
武荣花 葛蓓蓓 王茂良 周燕 冯慧
以１８个中国古老月季为试材，以欧芹作为标准植物，采用２种不同的样本处理方法对其基因组大小进行测定，同时利用染色体计数法补充３个存在争议或尚未见报道的中国古老月季品种的倍性，为其基因组大小的确定提供必需的数据支持。结果表明：１）中国古老月季品种‘屏东月季’为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１４），‘桔囊’和‘牡丹月季’为四倍体（２ｎ＝４ｘ＝２８）。２）２种样本处理方法通过单因素方差分析发现，６个品种间差异显著，１２个品种间差异不显著。故２种处理方法均可用于基因组大小的检测，但方法Ⅱ准确度高，受外界影响小，更适宜基因组大小的检测。方法Ⅰ操作简便，可用于大规模的倍性检测。３）１８个中国古老月季品种（含二倍体、三．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
任素莲 王德秀 绳秀珍 宋微波
在患“红肉病”文蛤的消化盲囊上皮细胞中发现了一种球形病毒及其发生基质。病毒粒子呈球形 ,无囊膜 ,直径约 5 0～ 80nm ,在细胞质内形成多泡状的包涵体并进行病毒粒子的装配。受感染的细胞具有明显的病理变化 ,主要表现为核固缩或肿胀并出现核空泡 ,内质网膨胀、大部分转化泡状 ,线粒体溶解或固缩 ,溶酶体数量增多等。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄克和 陈万芳
将１日龄罗曼系商品代蛋用健康公雏３６０羽随机均分成３组。对照组饲喂基础日粮，补硒Ⅰ组和补硒Ⅱ组在饲喂基础日粮的同时分别添加０．３和０．６ｍｇ／ｋｇ硒。分别于７，２１，３５和４９日龄采用微量全血培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定雏鸡外周血Ｔ淋巴细胞转化率，ＬＤＨ释放法测定ＮＫ细胞活力，荧光分析法测定血硒含量，化学法测定ＧＳＨ－Ｐｘ活性。定期称重并进行临床观察。结果表明，补硒能显著并持续地增强雏鸡外周血淋巴细胞对ＰＨＡ的应答能力和ＮＫ细胞活力。另外，还对全血淋转试验３Ｈ－ＴｄＲ掺入法进行了讨论。
关键词：
硒 雏鸡 淋巴细胞转化 自然杀伤细胞
[期刊] 中国水产科学
[作者]
汪开毓 耿毅 黄小丽
采用含200 mg.kg-1喹乙醇的饲料连续饲喂鲤鱼(Cyprinus carpioLinnaeus),分别于饲喂后的第7天、14天、20天、25天和第30天各剖杀4尾鱼,取肝组织,用流式细胞仪检测其细胞凋亡程度。结果显示,在肝细胞DNA直方图中,于G1峰之前出现一AP峰,且AP峰峰值随染毒时间的延长而升高,肝细胞在不同时期的凋亡率与染毒时间呈正相关。在经喹乙醇染毒第7天,鲤肝细胞的凋亡率平均值为2.05%,而对照组为1.70%,两组间差异不显著(P>0.05);在第14天,可见轻微的AP峰;在第20天,凋亡率达到9.49%,凋亡峰已较明显;在第25天时的AP峰比第14天时峰值明显升高;在染毒...
关键词：
流式细胞术 喹乙醇 细胞凋亡
[期刊] 水产学报
[作者]
王有基 林江兴 李琼珍 胡梦红 吴芳丽 沙毅杰 吕为群
为更好地了解翡翠贻贝血淋巴细胞的免疫功能和拓展该贝类在环境免疫学中的应用,本研究调查了其血淋巴细胞亚群分类,并运用流式细胞术分析了各个亚群的相关免疫功能。结果显示,在翡翠贻贝的血淋巴中主要存在3种血淋巴细胞,包括粒细胞、半粒细胞(分大小2种)和透明细胞。粒细胞占细胞总数的40.4%±8.4%,直径(7.49±1.32)μm,细胞内部充满颗粒;半粒细胞占34.6%±9.4%,直径(12.45±2.21)μm,内部含有部分颗粒,其中小半粒细胞直径(6.64±1.05)μm;透明细胞占15.6%±4.8%,直径(4.69±1.01)μm,细胞内部基本无颗粒。流式细胞分析显示,粒细胞在吞噬作用上最为活...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
冼健安 王安利 苗玉涛
应用流式细胞术(FCM)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血细胞的分类、活性和免疫功能进行了研究。结果显示:血细胞可分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞三个亚群,组成比例分别为(26.25±5.29)%、(51.44±7.02)%和(11.20±1.82)%;螯虾血细胞的平均总凋亡率约为3.12%;血细胞对荧光大肠杆菌的吞噬活力显著(P<0.05)高于荧光微球,吞噬率分别为17.04%和14.57%;血细胞在自然生理状态下含有一定量的活性氧,其在两类颗粒细胞的含量显著(P<0.05)高于透明细胞,在大颗粒细胞中最高。结果表明,FCM能较好地应用于虾类的血细胞分类和功能研究。
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