- 年份
- 2024(7019)
- 2023(9539)
- 2022(8538)
- 2021(8094)
- 2020(6770)
- 2019(15797)
- 2018(15853)
- 2017(30488)
- 2016(16818)
- 2015(18943)
- 2014(18791)
- 2013(18680)
- 2012(17070)
- 2011(15358)
- 2010(15078)
- 2009(13541)
- 2008(12855)
- 2007(10967)
- 2006(9368)
- 2005(7971)
- 学科
- 济(64264)
- 经济(64198)
- 管理(46269)
- 业(44472)
- 企(36555)
- 企业(36555)
- 方法(31911)
- 数学(27728)
- 数学方法(27437)
- 农(17096)
- 学(16962)
- 中国(15338)
- 财(14557)
- 业经(14250)
- 地方(12899)
- 农业(11655)
- 和(11121)
- 理论(10994)
- 贸(10748)
- 贸易(10744)
- 环境(10709)
- 易(10419)
- 技术(10418)
- 制(9553)
- 务(9543)
- 财务(9485)
- 财务管理(9471)
- 划(9038)
- 教育(9026)
- 企业财务(8957)
- 机构
- 大学(237096)
- 学院(234348)
- 管理(95307)
- 济(87702)
- 经济(85666)
- 理学(83706)
- 理学院(82758)
- 管理学(81298)
- 管理学院(80905)
- 研究(78259)
- 中国(55684)
- 科学(52943)
- 京(50947)
- 农(42997)
- 业大(40083)
- 所(40053)
- 财(37327)
- 研究所(37219)
- 中心(34672)
- 农业(34308)
- 江(32362)
- 北京(31647)
- 范(31131)
- 财经(30989)
- 师范(30781)
- 院(28438)
- 经(28305)
- 州(26661)
- 技术(25656)
- 经济学(25255)
- 基金
- 项目(170942)
- 科学(133441)
- 基金(123991)
- 研究(121484)
- 家(109388)
- 国家(108500)
- 科学基金(92595)
- 社会(74101)
- 社会科(70090)
- 社会科学(70071)
- 省(67057)
- 基金项目(66778)
- 自然(62971)
- 自然科(61498)
- 自然科学(61485)
- 自然科学基金(60350)
- 划(56997)
- 教育(54998)
- 资助(50793)
- 编号(49564)
- 成果(39095)
- 重点(38038)
- 部(36865)
- 发(35908)
- 创(35538)
- 课题(33502)
- 科研(33226)
- 创新(33149)
- 计划(32289)
- 大学(31407)
共检索到324891条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨春荣 马霄飞 董书伟 刘淑娟 窦忠英
以成年母兔耳部皮肤上皮细胞为核供体,对家兔体细胞核移植技术中融合、激活以及不同来源受体卵母细胞的选择等环节进行了研究,比较了不同电场强度对重构胚胎融合率、分裂率的影响。结果表明,200V/mm电场强度时重构胚胎的融合率(82.53%)显著高于160V/mm(59.73%),但与240V/mm(79.56%)无显著差异;200V/mm时重构胚胎的分裂率(71.43%)显著高于160V/mm(49.43%)和240V/mm(57.80%)。来源于输卵管卵母细胞组成的重构胚胎的融合率(84.71%)和裂解数与来源于卵巢大卵泡(78.75%)的无显著差异;但来源于输卵管的重构胚胎分裂率(73.68%)...
关键词：
兔 耳部上皮细胞 核移植 克隆胚胎
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
林红英 沈子龙 王伟强 张弈华 陈虹
用剪切及剪切加胰蛋白酶法消化兔泪腺组织,获取兔泪腺上皮细胞,设计相应的培养基,进行组织块原代培养或混合消化原代培养,用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果表明,组织块在体外培养10 d,可见上皮样细胞从植块边缘长出,2周后泪腺上皮细胞在培养瓶底部铺成单层,经传代3次,角蛋白染色阳性细胞纯度达90%以上;用混合消化法接种的细胞生长相对较慢。结果提示:用剪切组织块进行培养的方法简便易行,易获得符合要求的兔泪腺上皮细胞。
关键词：
兔 泪腺 上皮细胞 原代培养 鉴定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵永贞 刘西梅 李莉 乔宪凤 魏雁 曹斌云 魏庆信 郑新民
研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕...
关键词：
显微注射 共培养 小鼠胚胎 转基因
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨奇 安立龙 窦忠英
从全能性或多能性细胞获取、分化抑制物选择、培养基、分离方法、鉴定、保存等６个方面，对胚胎干细胞的分离培养体系的建立进行了系统综述。
关键词：
胚胎干细胞 分离 克隆
[期刊] 中国农业科学
[作者]
剧世强 芮荣 卢庆 曹爱巧 李宁 林鹏飞 郭慧利
【目的】通过优化猪体细胞核移植程序,建立获得克隆囊胚的有效方法。【方法】比较不同电激活参数、不同体外培养条件对猪体细胞克隆胚发育能力的影响。【结果】选用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合,对猪核移植重构胚进行电融合和电激活,可获得较高的卵裂率和最高的囊胚发育率(分别为71.4%和14.3%),且囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05);0.4%BSANCSU23培养液培养克隆重构胚72h,半量换液并未改善克隆胚的发育,但添加10%FBS可显著提高囊胚发育率(15.1%对10.3%,P<0.05)和DNA完整率(56.8%对46.6%,P<0.05);采用猪卵泡颗粒细胞(pGC)共...
关键词：
猪 体细胞核移植 重构胚 发育
[期刊] 华北农学报
[作者]
姚妮 罗仍卓么 包斌武 杨易 王兴平
为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区，利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析，并利用qRT-PCR检测了ISG20基因及其相关基因在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量。结果显示，ISG20基因的CDS区长度为516 bp,可编码一条由176个氨基酸组成的无跨膜结构域且不稳定的碱性亲水性单体蛋白质。该蛋白质含有1个DEDD核酸外切酶超家族结构域，与ISG15和MX2等10种蛋白质相互作用，主要在细胞质中发挥作用。此外，qRT-PCR结果表明，与对照组相比，ISG20基因及其相关的ISG15和MX2在孕酮(P4)联合干扰素-tau(IFN-τ)诱导的肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量均显著上调。ISG20可能参与肉牛子宫内膜上皮细胞容受态的形成，并在早期妊娠等生物学过程中发挥作用。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
董益闻 罗仍卓么 王兴平 王晋鹏 周力
【目的】为探究2个候选lncRNA（lncRNA TCONS-72171和lncRNA TCONS-62349）在奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中的表达与功能分析。【方法】利用基因克隆和测序技术验证候选lncRNA的真实性；并进行候选lncRNA序列同源性、亚细胞定位、靶基因预测及KEGG信号通路分析。此外，利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导奶牛乳腺上皮细胞产生炎症反应；采用RT-qPCR技术检测LPS诱导0、3、6和12 h的奶牛乳腺上皮细胞内上述2个候选lncRNAs的表达情况。【结果】奶牛lncRNA TCONS-72717和lncRNA TCONS-62349真实存在，且在部分物种间高度保守；上述2个lncRNA在LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞中表达均呈极显著上调（P＜0.01），且分别主要位于细胞质与细胞核。靶基因预测与KEGG信号通路分析预测结果显示，上述2个lncRNA的潜在靶基因（LCP2、ALOX12和ASGR1等）可能通过JAK-STAT、NF-κB和MAPK等炎症相关的信号通路而发挥调控细胞炎症的作用。【结论】表达上调的lncRNA TCONS-72171和lncRNA TCONS-62349可能在LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症中发挥重要的调控作用，该结果可为深入研究奶牛乳腺炎分子调节机制奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵雪萍 张寒莹 王子玉 许丹 孙永成 王锋 丁玉华
为获得适合于克隆麋鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3~4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麋鹿染色体数目为2n=68,核型式为2(M)+64(A),XY(A,M);含10%NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87.78%的贴壁率。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
宋增福 吴天星 潘晓东
探讨了健康鲫(Carassius auratus)幼鱼肠道上皮细胞的原代培养方法。结果显示,用含有抗生素、胶原蛋白酶Ⅰ、EDTA和胶原蛋白酶Ⅳ组成的D-Hanks液消化无菌分离的鲫肠道可以获得大量细胞团及绒毛隐窝;用含有抗生素、胎牛血清(FBS)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素的DMEM培养液进行培养,并根据肠道上皮细胞与成纤维细胞贴壁时间的差异进一步纯化,连续培养12d后可以得到纯化的肠道上皮细胞。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史明艳 杨学义 赵清梅 韩雅婷 窦忠英
采用组织块法从表皮和真皮中分离山羊皮肤干细胞,通过形态学观察、免疫组化染色以及克隆形成率等方法检测两种来源的皮肤干细胞体外生长特性。结果表明,从表皮和真皮中均能分离得到皮肤干细胞;表皮来源的皮肤干细胞体外可传11代,真皮来源的皮肤干细胞体外可传17代;表皮来源的皮肤干细胞第1代K 19和in tegrin-β1阳性细胞率及克隆形成率分别为(34.0±1.62)%,(37.5±2.12)%,(19.4±1.77)%,而真皮来源的皮肤干细胞分别为(29.2±3.12)%,(33.0±1.12)%,(16.6±2.60)%;表皮来源的皮肤干细胞第3代K 19和in te-grin-β1阳性细胞率及克...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李学军 彭新亮 乔志刚
利用阿利新蓝(AB,pH=2.6)-过碘酸雪夫氏试剂(PAS)染色,对鲇(Silurus asotus)皮肤和鳃部粘液细胞进行了分类、分布和分泌研究。结果显示:结合染色结果、细胞形态和粘液细胞分布特点,鲇皮肤和鳃部粘液细胞可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型5种类型;皮肤中有Ⅰ型和Ⅳ型2种粘液细胞分布,鳃部有Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅴ型4种粘液细胞分布;腹部皮肤粘液细胞密度最大,平均密度为每平方毫米1083个,其次为颌部皮肤,平均密度为每平方毫米802个,鳃丝部位密度最小,平均密度为每平方毫米208个;粘液细胞分泌方式有4种,Ⅰ型为全浆分泌,Ⅱ型为局部分泌,Ⅲ型为巨浆分泌,Ⅳ型为顶浆分泌。
关键词：
鲇 粘液细胞 皮肤 鳃
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
庄利利 胡德宝 蔡丽娟 张也 李钟淑 方南洙
为研究输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎发育质量及胚胎对共培养细胞活力和基因转录量的影响,探索输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育的机理,建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系并对合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。结果表明:1)共培养能够提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率(0.951 3%VS 0.903 3%,0.857 6%VS0.700 5%,P0.05);2)2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量显著降低(0.047 9VS ...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
屠迪 崔燕 余四九
以妊娠前后的牦牛子宫为材料,应用免疫组织化学SP法,研究波形蛋白(Vimentin)、泛角蛋白(CKs)和角蛋白7(CK7)能否成为牦牛子宫内基质细胞和上皮细胞的特异标记物。结果表明,Vimentin可作为妊娠前后牦牛子宫基质细胞标记蛋白;CKs可标记妊娠前后牦牛子宫腺上皮、腔上皮细胞和妊娠早期尿囊内层细胞;CKs和CK7均可标记妊娠早期牦牛尿囊外层细胞。
[期刊] 水产学报
[作者]
李伟 王建国 郑蒙蒙 陈小江 熊良伟 袁圣 王权
采用对传统酶消化法稍进行改进建立了中华鳑鲏皮肤细胞的分离方法,获得RSDCs株(系)以便用于后续关于中华鳑鲏体色细胞研究。结果显示,对中华鳑鲏抑菌暂养824 h后,0.25%胰酶—EDTA消化处理35 min,用手术刀片顺鳞片方向刮除鳞片,在体式显微镜下解剖获得鱼类皮肤,采用IV型胶原酶—胰酶联合消化皮肤获得单细胞;获得的RSDCs于28°C,5%CO_2条件下进行培养,采用血球计数板计数法测定绘制了RSDCs生长曲线;采用RT-PCR的方法检测RSDCs F_0、F_5和F_(10)上皮标记物(Kera
关键词：
中华鳑鲏 皮肤细胞 细胞培养 酶消化法
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
阮佳佳 袁进强 杨仙玉
为研究日本蟾蜍Bufo japonicus formosus皮肤中多肽类有效成分,通过菌落聚合酶链式反应(PCR)对日本蟾蜍皮肤cDNA质粒文库进行筛选,克隆到2条claudin-4全长cDNA序列(GenBank登录号为JX481975和JX481976),并对它们进行生物信息学分析。日本蟾蜍claudin-4的2条cDNA全长分别为1 707 bp和1 697 bp,开放阅读框均为630 bp,其中虽有5个碱基不同,但编码的209个氨基酸完全相同。两者的5′端非翻译区域序列长度不同,前者为50 bp,后者为41 bp,3′端非翻译区域则分别为1 027 bp和1 026 bp。氨基酸序列同...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
