在SSR分子标记的基础上,以3个玉米自交系、4个玉米杂交种和7对玉米SSR引物为材料,确定了较为适宜的多重PCR扩增体系和程序,获得了适宜琼脂糖凝胶电泳的、扩增效果较好的2～5重引物组合,并能有效应用于玉米杂交种和自交系的种子鉴定,不仅比单个引物鉴定更准确可靠,而且省时省工,成倍地降低了检测成本,将有利于推动多重PCR技术在玉米品种鉴定中的广泛应用。

【目的】玉米杂交种子的纯度直接影响农作物的产量、品质和农户的收成,建立一套简单、快速、准确、可靠的纯度鉴定方法十分必要。【方法】本试验以‘家佳荣2号’玉米杂交种及其父母本为材料,采用幼叶CTAB法和碱煮法提取DNA两种方法,利用SSR标记技术从20对玉米纯度鉴定标准SSR引物中筛选应用于‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的引物,同时人为掺入其他品种籽粒以验证特异引物的可靠性。此外,同步采用公认的田间小区种植鉴定法研究‘家佳荣2号’的种子纯度,比较室内和田间种植鉴定的纯度差异。【结果】采用幼叶CTAB法提取得到的DNA比碱煮法效果更好;筛选得到引物phi072k4和bnlg2291k4是‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的特异性引物,掺杂验证结果可靠,‘家佳荣2号’室内SSR鉴定纯度为96.4%,田间种植鉴定的纯度为97.5%,2种方法结果高度一致。【结论】幼叶CTAB法提取DNA更适合玉米种子纯度的分子鉴定;SSR方法可用于玉米杂交种纯度的室内快速鉴定。

选择22个玉米品种,在苗期采用注射法人工接种玉米黑粉菌,对玉米瘤黑粉病发病时间、发病率、病情指数进行统计分析,以鉴定玉米品种对瘤黑粉病的抗病性。结果表明:接种8 d后,玉米品种陆续开始发病,第13天进入发病增速期,第16天达到发病高峰期,第18天后病情基本稳定;玉米品种间对瘤黑粉病的抗性存在差异,其中LD901、太平洋891表现为高抗,京科665、金糯628表现为中抗,耐斯1号、京单38、南美1号等12个品种表现为抗病,糯2000、太平洋98、Golden Bautam、中彩甜糯8号、15H–09、绿色先

利用DNA指纹分析技术 ,分析了同母异父 5个杂交组合分别与其父母本之间的遗传距离 ,结果发现 ,每个杂交组合与其相应的父本之间的遗传距离最小 ,所有组合完全一一对应。因此 ,可以通过计算遗传距离来进行玉米亲子鉴定 ,只需计算出玉米杂交种与所有可能父本自交系之间的遗传距离 ,与其遗传距离最小的自交系就是该杂交种的真正父本。

１９８７～１９８９年对以姊妹种代替妹妹系改进玉米种子生产技术所涉及的几个关键问题进行了研究。结果表明，姊妹种的产量、农艺性状、整齐度优于对应的姊妹系，用其制种可出产５０％以上；姊妹种的配合力水平与对应姊妹系相当且可稳定遗传；改良单交种的产量、农艺性状、整齐度类似相应单交种。

在自然生态条件下,利用湖南及我国西南主推的10个玉米杂交种进行抗旱性鉴定方法与指标研究。结果表明:干旱对玉米产量及主要农艺性状有显著影响;通过产量及产量抗旱系数相关分析筛选出产量、抽雄至吐丝间隔、根深、株高和千粒重等5个指标可作为玉米抗旱性鉴定的良好参数;本文提出了综合隶属度值评价玉米抗旱性的方法,该方法鉴定抗旱强的品种是富友9号、洛玉1号、临奥1号、科玉2号、农大108,抗旱中等的为渝单7号、联合3号,抗旱性较差的有东单57、科玉1号、东单16,综合隶属度值评价结果与品种多年生产上抗旱性表现结果相一致。

玉米大斑病、小斑病和灰斑病是玉米生产上重要的叶部真菌病害。采用人工接种法,对16个玉米新品种在田间进行大斑病、小斑病和灰斑病的抗性鉴定评价。结果表明,在鉴定的16个玉米新品种中,4个品种(屏单3号、云玉2号、HL-66和春喜06-10)对3种病害均有较好的抗性,其余品种对1种或者2种病害具有中抗或感病的水平。

应用银染法AFLP技术,通过筛选的7对Mse I-EcoR I引物组合,建立了162个梅花品种的175个样品指纹。使用NTSYSpc2.1t软件,计算遗传相似性,以SAHN Clustering进行不加权成对算术平均法(UPGMA)聚类分析。其中引物组合E-ACT/M-CAG和E-GA/M-CTC分别仅有两个样品不能区分开,其余引物组合均能鉴别175个样品中的164个以上的样品。7对引物组合的平均鉴别效率达到95.89%,两对引物组合可以鉴别所有样品。以引物组合E-GA/M-CTC为例进行了品种鉴定的聚类分析。所以,用AFLP-DNA指纹图谱来鉴别梅花品种资源,效率是很高的。

【目的】建立巢式PCR方法，快速检测处于病害潜育期的玉米叶片内的多堆柄锈菌（Puccinia polysora），为玉米南方锈病（southern corn rust）的预测和防治提供技术支持。【方法】根据多堆柄锈菌ITS区序列，在其变异区设计3条多堆柄锈菌特异性检测引物NX471-F、NX255-F和NX255-R，建立以NX471-F与真菌ITS区通用引物ITS4为外侧引物，NX255-F/NX255-R为内侧引物的巢式PCR。采用20μL扩增体系：Ex Taq DNA聚合酶（5 U·μL~(-1))0.15μL、10×Ex Taq Buffer(Mg~(2+)plus)2μL,d NTP Mixture（各2.5 mmol·L~(-1))1.6μL，上下游引物（10μmol·L~(-1)）各0.3μL,DNA 1μL,14.65μL ddH_2O。扩增程序：利用外侧引物NX471-F/ITS4进行第一步PCR扩增，95℃预变性7 min;95℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸45 s,30个循环；72℃再延伸7 min。将扩增后的产物稀释20倍，取1μL用作第二步PCR的扩增模板，然后以内侧引物NX255-F/NX255-R进行第二步PCR扩增，95℃预变性7 min;95℃变性30 s,66℃退火30 s,72℃延伸26 s,30个循环；72℃再延伸7 min。同时选用内侧引物进行常规PCR扩增，扩增体系同巢式PCR，扩增程序除循环数为38，其余程序同巢式PCR的第二步PCR检测。在此条件下对多堆柄锈菌、高粱柄锈菌（Puccinia sorghi）、青杨叶锈病菌（Melampsora laricipopulina）和7种玉米常见病原菌进行特异性检测，对不同梯度多堆柄锈菌基因组DNA和3种人工接种病叶进行灵敏度检测。【结果】巢式PCR检测体系仅在检测多堆柄锈菌时，产生了255 bp的目的条带，其他菌株均未扩增出目的条带。巢式PCR检测体系对多堆柄锈基因组DNA的最低检测限为10 fg·μL~(-1)，是常规PCR检测体系灵敏度的500倍。当1 g人工接种病叶含500—2.5×10~4个多堆柄锈菌夏孢子时，常规PCR和巢式PCR检出阳性率分别0和85.71%，巢式PCR可检测出的夏孢子个数最少为1 000个；当1 g人工接种病叶中含1—7个夏孢子堆时，常规PCR和巢式PCR检出阳性率分别76.19%和100%，常规PCR可检测出的夏孢子堆个数最少为2个，巢式PCR可检测出1个及以上夏孢子堆；当1 g人工接种病叶中含1—7个侵染点时，常规PCR和巢式PCR检出阳性率分别14.29%和66.67%，检测出的侵染点个数最少分别为6个和3个。【结论】成功建立了一种以NX471-F/ITS4为外侧引物，NX255-F/NX255-R为内侧引物的巢式PCR检测方法，可快速、高效、准确检测玉米叶片中潜伏期的多堆柄锈菌。

The disease caused by Maize rough dwarf fijivirus (MRDV) is one of the most important diseases in corn production in North China.Severe dwarfing,distortion of the plants bearing the small malformed ears with few or no kernels,and enations on the underside of the leaves are the typical symptoms of th...

【目的】筛选菊花中抗白锈病相关基因,研究菊花抗白锈病的分子机理。【方法】以菊花中对白锈病完全免疫的品种‘紫荷’为供试材料,对其叶片喷施106个白锈病冬孢子/mL蒸馏水,处理时间梯度为0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,使用cDNA-AFLP技术分析这一接种过程中的差异表达基因,并采用RT-PCR方法对表达结果进行验证。利用RACE技术克隆其中重要蛋白基因的cDNA全长,采用MEGA 4.0程序进行序列分析。【结果】利用76对引物组合,共筛选出了约4 950条差异表达的cDNA片段,对其中80个表达差异显著的片段进行测序,最终得到51个差异片段的核苷酸序列。...

建立快速、准确鉴定玉米种子纯度技术是控制种子质量的有效措施。本研究针对SSR鉴定结果低于种植鉴定结果的问题,分析了可能的原因,提出了解决办法。利用筛选的特异标记测定了标记在原种、大田用自交系、套袋配制杂交种中的检出率,测定了2个杂交种(莱农14和莱农15)共16份样品的纯度。特异标记检出率随着自交系繁殖代数增加呈现逐渐降低的趋势;杂交种出苗率越低,SSR鉴定结果与田间鉴定结果的差值越大,是导致SSR检测纯度偏低的两个主要原因。将SSR结果与田间种植结果相比较,建立了SSR鉴定与田间种植鉴定的回归方程,可准确鉴定杂交种的纯度。

模仿育种是一快速、高效、针对性强的(改良)育种方法,但是根据最新国际保护公约规定,所育品种属于依赖性派生品种,侵害了原品种权人的权利。改良品种与原品种的遗传差异多大才算是依赖性派生品种,目前国内外没有标准。以BA为母本,以H28、昌7-29、502、P138、齐319、连87、吉853、京2101、京343、京832为父本组配了10对同母异父玉米杂交组合,研究了杂交组合两两之间的遗传差异。结果表明:遗传差异在20%以下的组合,父本之间具有明确的血缘关系;遗传差异在20%~30%的组合,父本之间有40%具有血缘关系,没有血缘关系的占60%;遗传差异在30%以上的组合,父本之间全部没有血缘关系。无...

为探索枇杷新种质的鉴定方法,利用ISSR标记,构建了贵州18个枇杷栽培品种及课题组选育的7个优良新种质的DNA指纹图谱,并分析其相互间的亲缘关系。结果表明:以筛选出的15条引物进行PCR扩增,获得清晰、重复性好的谱带172条,其中多态性谱带157条,多态性比例为91.3%;应用3个引物825、834和848的组合,构建了25份枇杷品种(系)的ISSR指纹图谱,可以有效区分所有供试材料;聚类分析显示,在相似性系数为0.60时,可将供试种质分成2大类:一类主要为原产于浙江的品种(系),另一类主要为原产于四川的品种及选育的新种质;因此,ISSR标记能有效地用于枇杷栽培种及新种质的分子鉴定及其亲缘关系...

【目的】以对玉米丝黑穗病高感的黄早四和抗病的Mo17自交系为材料,用丝轴黑粉菌进行接种,研究病菌对玉米的侵染率及扩展进程。【方法】采用丝黑穗病病原菌基因组特异引物的PCR技术,分别对幼苗期的根、叶和成熟期的根、茎、叶、雄穗生长锥DNA进行PCR扩增。【结果】特异引物的PCR技术不仅能够在早期准确鉴定玉米幼苗是否受到病菌的侵染,而且可以跟踪丝轴黑粉菌在体内扩展进程。【结论】玉米对丝黑穗病的抗性差异主要表现为抗侵染和抗扩展,抽穗期雄穗对病樱的形成不能表现出明显的抗性效应。