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[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
乔桂荣 栾维江 潘红伟 卓仁英
随着我国林业生态工程和退耕还林的开展,木材生产与需求之间的矛盾愈加严重,培育速生优质大径材的研究更加重要。基于LEAFY基因在植物生长发育中的特性,利用PCR和Gateway技术构建了含有LEAFY基因保守序列的RNA干涉植物表达载体LFY-RI,利用根瘤农杆菌Agrobacterium tumefaciems介导法获得转基因植株,利用RNA干涉技术抑制转基因植株中LEAFY基因的表达,从而获得枫香Liquidambar formosana不育转基因植株。并利用聚合酶链式反应(PCR)技术和PCR-Southern杂交技术检测了转基因植株中外源基因整合情况。共获得了5株枫香转基因植株,分子检测...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王新颖 文晓鹏 胡鹏
以贵州珍珠半夏Pinellia ternate(Thunb.)Breit为材料,采用根癌农杆菌介导法,探索了影响半夏遗传转化效率的主要因子。结果表明,卡那霉素的最佳筛选浓度是100 mg/L,侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对转化频率都有一定的影响。其中侵染时间为20 min,共培养时间为3 d,乙酰丁香酮的浓度控制在60~100 mg/L时可以有效提高遗传转化效率。在此基础上辅以超声波处理5 min,可以有效提高叶柄转化的瞬时表达率。对抗性转化植株进行Gus染色和PCR检测,结果表明外源基因ipt已经整合到半夏基因组中。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 中国农业科学
[作者]
叶兴国 Shirley Sato 徐惠君 杜丽璞 Tom Clemente
以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA质粒转入了小麦 ,经在含 10～ 5 0 mg/ L geneticin( G4 18)、5 0 mg/ L cefotaxime、5 0 m g/ L vancomycin、5 0 m g/ L ticillicin选择培养基上多次选择 ,移栽前利用 npt EL ISA检测 ,移栽后利用叶片离体退绿、P...
关键词：
小麦 农杆菌 转基因植株 单拷贝整合
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴关庭 陈锦清 胡张华 郎春秀 陈笑芸 王伏林 金卫 夏英武
为改良草坪型高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)的耐逆性,以成熟种子来源的胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法将拟南芥(Arabidopsis thaliana)耐逆相关CBF1基因导入4个供试品种的基因组,经GUS染色、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得了112株转基因植株,转化频率为0.92%~2.87%,不同品种间存在差异。试验表明,在高盐与高渗胁迫下,转基因植株具有显著生长优势,存活率极显著高于非转化对照植株,经低温、高温、干旱和高盐等逆境胁迫处理后的叶片相对电导率平均较对照植株低25%~30%,证明转基因植株的耐逆性有所增强。考察发现,非胁...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马洪亮 杨瑞芳 潘刚 张晓波 黄海清 凃巨民
通过农杆菌介导法将Bt融合型基因cry1Ab/cry1Ac导入籼稻温敏核雄性不育系03B198S和03B199S的愈伤组织,经过多轮潮霉素筛选,获得了一批独立转化体,同时,从每一个独立转化体至少再生出5株绿苗。经PCR、RT-PCR检测证实该Bt融合型基因已整合到部分受体基因组中,并表现出不同程度的表达。这些阳性转基因植株在异地异季低温条件下割蔸栽植,部分恢复可育,且表现出很强的抗螟虫性能。
关键词：
籼稻 温敏核雄性不育系 Bt基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
张艳敏 郭北海 丁占生 温之雨 蒋春志 李辉 李洪杰 陈受宜
针对农杆菌转化系统的诸多影响因素进行了系统研究,建立了有效的小麦农杆菌转化系统;利用石4185、石6365的花药愈伤组织为受体,进行了甜菜碱醛脱氢酶和胆碱氧化物酶等目的基因的转化研究。
关键词：
小麦 农杆菌 转基因 转化效率
[期刊] 华北农学报
[作者]
钟鸣 黄国涛 白丽萍 张丽 马慧 张立军 郭志富
根据植物转基因载体的特点和局限性,利用几种商业化载体进行克隆、酶切和重组,从而重构方便快捷的转基因植物表达载体。首先用PCR方法从pCAMBIA 1301质粒中扩增到含启动子CaM35S、完整GusA基因和终止子NOS三部分的片段,经TA克隆重组入pGM-T载体中获得pGM-35S-GUS-NOS重组质粒。然后对来源于新疆沙冬青的抗寒基因AnGPAT片段和pGM-35S-GUS-NOS重组质粒进行双酶切,连接获得中间载体pGM-35S-GPAT-NOS。再对中间载体和双元真核表达载体pCAMBIA 2300双酶切后连接,转化入大肠杆菌和农杆菌。经PCR、酶切及测序鉴定后确认得到改造后的植物表达...
关键词：
转基因 表达载体 载体改造 新策略
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王建辉 刘建军 陈克玲 李洪雯 何建 关斌
本研究以‘丰香’草莓(Fragaria ananassa cv. Toyonoka)试管苗叶片为外植体材料,运用根瘤农杆菌(包含pBI121-DHN)介导法转‘丰香’草莓,构建青稞(Hordeum vulgere L. var. nudum Hook. f.)脱水素基因(dhn4)编码区的过量表达载体pBI121-DHN。结果表明,经过抗生素筛选,获得再生草莓植株,提取转基因草莓叶片DNA,经PCR扩增,获得预期大小的外源插入片段。此"丰香"草莓转基因技术,为未来开展生物技术育种打下了基础。
关键词：
青稞 脱水素 草莓 转基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
梁雪莲 孙毅 郭平毅 刘惠民 刘少翔 王景雪 解志红
用农杆菌转化小麦授粉10d后的幼胚,经5‰PPT筛选获得大量正常再生植株。PCR及PCR Southern杂交检测证明其中23%(18株)再生苗为转化bar基因植株,这些植株可明显提高对basta的抗性。还总结了农杆菌转化小麦幼胚高效获得转基因再生植株的处理程序。
关键词：
农杆菌 转化 小麦 幼胚 bar基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘静 李湘利 徐继忠 邵建柱
以嘎拉苹果叶片为外植体,利用GUS瞬时表达率,对农杆菌介导法转化苹果的因素进行优化。结果表明:卡那霉素(Km)选择压在30 mg/L时,外植体预培养2~3 d后以OD600=0.3~0.5农杆菌菌液浸泡3~5 min,共培养3 d,延迟筛选3 d可明显提高M26叶片转化效率,GUS阳性率达50%。PCR检测初步证明,LFY基因已整合到苹果再生植株中。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王旭达 丰明 王鹤 张高华
通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～＋逆向转运蛋白基因（ａｌＮＨＸ）表达在马铃薯中，并对影响马铃薯转化的几种因素（抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等）进行优化。结果表明：最适农杆菌菌液浓度是ＯＤ６００＝０．６，最适侵染时间是５ｍｉＮ，最适共培养时间是２Ｄ，马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是４００ｍｇ／ｌ；经ＰＣＲ检测确认的转基因马铃薯植株在含０．７％ＮａＣｌ的培养基中可以生长，而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下，转基因马铃薯的Ｎａ～＋、Ｋ～＋含量及Ｋ～＋／Ｎａ～＋的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王世全 李平 刘熔山
以水稻的两个亚种籼稻和粳稻作为受体, 比较了不同外值体、vir诱导物等对根癌农杆菌转化的影响, 建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。依据该体系,以粳籼DREW 的幼愈伤组织和籼稻D汕B的幼穗愈伤组织为受体,经农杆菌AGL1/pCAMBIA1301转化后, 获得了超过50% 的潮霉素抗性愈伤筛选率, 并获得再生植株。
关键词：
根癌农杆菌 水稻 基因转化 再生植株
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
谢玉明 郭琛 张家银 韩健 袁飞荣 邓子牛
以枳壳(Poncirus trifoliate(L.)Raf.)实生苗上胚轴为试材,利用农杆菌介导法将光敏色素基因phyB导入其中,建立了枳壳实生苗的遗传转化体系,共获得27株抗性植株,PCR检测结果表明其中有5株扩增出phyB基因的特异目的带;RT-PCR分析结果表明phyB基因在phyB3,phyB4株系枳壳基因组中能表达;Li-6400光合测定仪对转基因枳壳进行的光合特性测定结果显示,转基因枳壳光合效率高于对照;转phyB基因枳壳植株在形态上与对照也存在差异,表现出植株矮化、节间缩短、叶面积变小.
[期刊] 华北农学报
[作者]
李俊兰 张寒霜 高鹏 王海波
以棉花无菌苗下胚轴为外植体 ,通过愈伤组织培养 ,使供试的 2 0个棉花新品种 (系 )中 19个培养出体细胞胚或再生植株。在此基础上 ,选用易获得再生植株的邯 93- 2、邯无 2 0 31、衡无89- 30、C2 0 1、C312 ,利用农杆菌介导转化Bt基因 ,抗卡那霉素愈伤组织诱导率约为 5 0 % ,其中约 4 0 %表现GUS阳性。从邯 93- 2GUS阳性愈伤中获得再生植株 ,其 5 0 %呈GUS阳性 ,且Bt基因的导入经Southern杂交验证。
关键词：
农杆菌介导 棉花 基因转化
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