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[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
贾智英 全迎春 梁利群 孙效文
采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库,用放射性同位素[γ-32P]ATP标记的(CA)15、(AT)12、(AG)12、(AAT)8、(AAG)8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个,其中二核苷酸为核心的微卫星序列:(AG)n>(AC)n>(AT)n,三核苷酸为核心的微卫星序列:(AAT)n>(CAT)n>(AAG)n。应用引物设计软件primer3.0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物,筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估,结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带,其中1对扩增产物出现影子带,1对扩增产物为单态,有6对扩增产物出现多态。
关键词：
凡纳滨对虾 微卫星DNA 重复序列 克隆
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马宁 曾地刚
为了筛选凡纳滨对虾微卫星序列,构建了一个cDNA文库,并进行454高通量测序。结果得到500 177条mRNA序列片段,通过拼接获得了20 225条unigene,从中鉴定得到588条微卫星序列,设计了557对微卫星引物。随机挑选其中20对微卫星引物进行PCR扩增,结果有18对引物扩增成功。研究结果大大丰富了凡纳滨对虾的基因组资料,增加了凡纳滨对虾可用的微卫星标记数量,对于凡纳滨对虾的种质资源鉴定、遗传学研究和分子标记选育有重要意义。
关键词：
凡纳滨对虾 微卫星序列 高通量测序
[期刊] 水产学报
[作者]
王艳红 胡超群 张吕平 夏建军 任春华
对161 075条凡纳滨对虾dbEST(database of"Expressed Sequence Tags")的数据进行SSR序列筛选,搜索参数为二～六核苷酸重复6次以上(包括6次),共获得含SSR的EST序列12 600条,占整个凡纳滨对虾dbEST数据库的7.8%,其中二核苷酸重复10 104条,占总EST-SSR序列的80.2%;三核苷酸重复2 036条(16.1%),四核苷酸重复336条(2.7%),五核苷酸重复35条(0.3%),六核苷酸重复89条(0.7%)。大部分发现的微卫星序列为完美型(perfect)的重复序列。在二核苷酸所获得的SSR重复单元中,AG/CT是优势重复单元...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李东宇 孔杰 孟宪红 栾生 罗坤 卢霞 曹宝祥
为了在遗传分析研究中提高效率并节约成本，本研究从已报道的凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）微卫星位点中选取多态性较高的位点，基于各位点的扩增片段大小及退火温度等因素进行微卫星位点的组合。通过不断优化位点组合、反应体系及反应程序，成功建立了１个五重、２个四重和１个三重ｐＣＲ反应体系，并将其应用于１１个凡纳滨对虾家系的亲权鉴定。结果显示，四组多重ｐＣＲ体系中的１６个微卫星位点在１１个凡纳滨对虾家系中的平均等位基因数（ｎａ）为６，平均多态信息含量（ｐｉＣ）为０．５８１３，平均观测杂合度（Ｈｏ）为０．５１３，平均期望杂合度（Ｈｅ）为０．６３６。利用ＣｅＲｖｕｓ３．０软件，对已知系谱．．．
关键词：
凡纳滨对虾 微卫星多重PCR 亲权鉴定
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张天时 刘萍 孔杰 王清印
根据建立的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)部分基因组文库,对筛选的含微卫星DNA序列的克隆设计了28对引物,筛选出5对微卫星多态性引物,并用这5对引物对中国对虾的养殖群体20个个体进行了遗传多样性分析。在这5个微卫星位点中,虽然RS0871位点是多态位点,但其等位基因数、杂合度和多态信息含量都比较低。其余4个微卫星位点可产生6-8个等位基因,等位基因的大小分布在142-364 bp,基本上符合引物设计时理论产物长度。这些微卫星位点的期望杂合度的范围为0.7577-0.8064,表明它们都有较高的杂合度。仅有位点RS0956的观察杂合度与期望值有较大的出入,其他微卫星...
关键词：
中国对虾 微卫星 基因组文库 遗传多样性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
马春艳 马洪雨 马凌波 杨柯
利用8个微卫星标记对引进的SPF凡纳滨对虾G0和两个养殖群体(G1,G2)进行遗传多样性分析。8个座位共获得64个等位基因,位点的等位基因数在5~l3之间。多态信息含量PIC在0.405 2~0.869 3之间,其中有6个位点为高度多态位点,适合于多态性分析。8个座位丢失的和新产生的等位基因共30个,占总数的47%。3个群体的平均观测杂合度分别为0.193 8、0.196 1、0.232 5,说明3个群体的遗传多样性较低。对近交系数Fis分析显示3个群体中存在近交,通过对哈迪温伯格平衡检验,显示所有座位均显著偏离平衡,存在杂合子缺失。通过配对Fst和Ne i遗传距离分析,显示3个群体之间有明显...
[期刊] 水产学报
[作者]
徐鹏 周令华 田丽萍 相建海
利用生物信息学方法在含有10446个中国对虾ESTs的数据库中进行微卫星序列的筛选,共发现微卫星序列229个,占整个ESTs数据库的2.19%,其中含双碱基重复序列146个和3碱基重复序列58个,分别占在ESTs数据库中发现微卫星序列总数的63.76%和25.33%,大部分发现的微卫星序列均为Perfect形式的重复序列。根据筛选得到的微卫星序列设计并合成引物19对进行多态性检测,在有扩增产物的16对引物中,首次筛选得到8个中国对虾微卫星标记,并对这些微卫星标记进行了等位基因频率、观测杂合度、期望杂合度、PIC值等统计学指标的评价。结果表明,在8个微卫星位点上,等位基因的数目从5到15不等,等...
关键词：
中国对虾 表达序列标签 微卫星
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
孙昭宁 刘萍 李健 何玉英 张秀梅
在水产养殖中应用微卫星标记来确定亲缘关系已经得到认同和广泛使用。本研究通过控制交尾,利用微卫星标记确定中国对虾后代的亲缘关系,对微卫星标记应用于中国对虾的家系识别进行初步探讨。作者以4个谱系清晰的家系为基础,检测两对微卫星标记EN0033和RS062在中国对虾家系鉴别中的应用。结果表明,利用两对微卫星引物产生的DNA指纹图谱,能够有效地区分中国对虾4个家系。根据微卫星数据计算各家系之间的遗传距离,构建UPGMA图,得到的结果与各家系来源情况一致,进一步证明了微卫星技术在进行家系间的遗传分析中的可行性。EN0033和RS062两对微卫星标记的累积个体识别率高达0.989,属于高识别力的遗传标记系...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
张天时 刘萍 李健 孔杰 王清印
利用分群分离分析法对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)人工选育生长快的第6代群体生长性状发生分离的群体进行了微卫星DNA的遗传分析。7个多态性微卫星位点对分离群的大个体组和小个体组扩增时产生7个片段表现差异,扩增片段大小为0.1～1.0kb之间。同时对中国对虾人工选育的生长快群体4个连续世代进行了验证,扩增的结果显示,7个微卫星位点在4个连续世代中大部分的扩增带出现的频率相近,但是有一些扩增片段的基因频率出现差异,这些等位基因频率或增或减,这是否可作为具有良好生长特性的人工定向选育群体的遗传标记尚有待进一步研究。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
孟宪红 孔杰 刘萍 高焕
对33对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)微卫星引物进行筛选,确定了其中11对引物的最优PCR反应条件,包括各对引物的退火温度、反应体系中引物、Mg2+、dNTPs含量等,为建立微卫星多重PCR技术、最终使微卫星标记成为中国对虾家系识别的有效工具奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
王霞 刘小林 张继泉 张成松 黄皓 相建海
利用7个微卫星标记分析了6个凡纳滨对虾家系的亲本(G0)及其后代(G1)的基因型分离情况,同时对G0和G1的所有座位期望杂合度进行配对比较分析,并且通过对G1群体每个位点的F-statistics分析检验群体的遗传分化,以期对凡纳滨对虾育种进行遗传监测。结果表明:共检测到44个等位基因。G0和G1的平均每个座位的等位基因数目分别为6.14和6.27,平均期望杂合度为0.786和0.733,平均多态性信息含量为0.709和0.695。7个微卫星座位的累计排除概率为0.99,并且在有亲本存在的情况下,能够将6个家系分开。G0与G1的所有座位期望杂合度的配对比较分析结果表明G0平均期望杂合度要显著高...
关键词：
凡纳滨对虾 微卫星 亲权分析 遗传监测
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙昭宁 刘萍 李健 何玉英 张秀梅
用6个微卫星标记对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)的5个家系进行系谱鉴别和遗传多样性研究。6个微卫星位点中有5个位点是多态的,并在所有家系中都显示了高度的遗传差异。5个家系中,5个多态微卫星位点共发现了30个等位基因,每个位点的等位基因数在5~8之间。实验中共发现了4个家系特异性等位基因:2#家系及4#家系各1个,5#家系2个。根据已知亲本及子代基因型,可推断出5个家系中全部亲本的基因型,据此鉴别各家系。在EN0033位点,可将5#家系与其他4个家系相区别;在RS0859位点,可将3#和4#家系与其他3个家系相区分。因此,EN0033和RS0859标记可用于鉴别5#...
[期刊] 水产学报
[作者]
张天时 刘萍 李健 孔杰 王清印
利用微卫星技术对中国对虾人工选育群体第1代和第6代群体的遗传多样性进行了分析。对10个微卫星位点进行了扩增,共产生74个等位基因,每个位点产生的等位基因数从3到13不等。在两个群体中,所观察到的等位基因数都比有效等位基因数多。多态信息含量PIC值0.5567～0.8877,说明这10个微卫星位点在中国对虾中具有较高的信息含量。两个群体的平均杂合度分别为0.6400(CP1)、0.6300(CP6),并通过计算基因型的P值,确定了对Hardy Weinberg平衡的偏离情况。对Fis值的计算表明两个群体内共有5个微卫星位点存在杂合度观察值过剩的现象。两个群体的Shannon多样性指数分别为1.6...
关键词：
中国对虾 微卫星 遗传变异 杂合度
[期刊] 水产学报
[作者]
徐鹏 周岭华 相建海
运用PCR法在中国对虾的小片段基因组文库中快速筛选含有微卫星序列的重组阳性克隆。PCR中使用的引物为载体pGEM - 3zf(+)上多克隆位点两侧的T7/Sp6启动子引物和根据微卫星核心重复序列设计的STR引物 :STR1:5’ -ATATATATATATAT - 3’ ;STR2 :5’ -TCTCTCTCTCTCTC - 3’。直接使用含有重组克隆的菌液 ,在PCR反应前增加一段裂解细菌的高温。筛选出来的含有微卫星序列的重组阳性克隆经DNA测序验证。结果证明 ,采用PCR方法用菌液快速筛选含有微卫星序列的重组阳性克隆完全可行 ,而且具有简便、快速、高效、不涉及同位素操作等优点
关键词：
中国对虾 微卫星 聚合酶链式反应
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李霞 白俊杰 吴淑勤 叶星 劳海华 简清
以剑尾鱼(Xiphophorushelleri)为材料,经MboⅠ限制性内切酶消化基因组DNA后,选取500～2000bp的片段连接到经BamHⅠ酶切的pUC18载体上,转化大肠杆菌DH5α构建部分基因组文库。采用设计合成的(AC)7、(GT)7重复序列为引物,PCR筛选部分基因组文库,对其中9个重组阳性克隆进行测序,结果共获得24个微卫星序列,其中Perfect(完美型)13个,占54.2%;Imperfect(非完美型)3个,占12.5%;Compound(混合型)8个,占33.3%。表明(AC/GT)n在剑尾鱼的基因组DNA中含量非常丰富。同时,根据其中3个克隆微卫星的侧翼序列设计引物,...
关键词：
剑尾鱼 微卫星 序列
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