对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND）主要由副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）携带的pVA1-like质粒表达毒力蛋白PirAB^Vp所致。本研究通过2次定量口饲的感染方式对凡纳对虾（Penaeus vannamei）成虾进行弧菌胁迫，研究相对低摄菌量实验组(L组，10⁵ CFU/尾)与相对高摄菌量实验组(H组，10⁷ CFU/尾)的个体5个不同时间点（感染后3、6、9、24和48 h）的9种不同组织（鳃、胃、肠道、眼柄、肌肉、肝胰腺、第五游泳足、腹部神经和第二触角鞭）中弧菌分布及变化情况。通过毒力蛋白PirA^Vp的基因表达量反映副溶血弧菌携带的pVA1-like质粒量，进而代表弧菌的分布及变化特点。结果显示，H组和L组的总体死亡率无差异，且均在3～6 h达到死亡高峰。2个实验组中病原质粒在各组织中的拷贝数不同，腹部神经与肠道组织平均质粒拷贝数均高于其他组织；同一组织内H组比L组的质粒拷贝数高1.9～4.9倍。质粒变化相关性分析显示，质粒拷贝数变化情况与对虾摄菌时间、死亡率无显著关系。同时2个实验组的质粒拷贝数变化特点也不同。L组中，有6个组织的质粒拷贝数随时间呈先上升后下降的趋势，而在胃、肠和肝胰腺中随时间呈波动变化；H组中，有7个组织的质粒拷贝数随时间呈现波动变化，但在胃和第五游泳足中随时间呈先上升后下降的趋势。第二触角鞭和第五游泳足在各取样时间段均可检测出PirA^Vp，可作为保种成虾活体常态病原检测的候选组织。本研究探究了商品规格种虾感染不同浓度Vp_AHPND后在体内不同组织的分布及扩增动态变化的特点，可为AHPND精准抗性测试方案的制定和致病机理研究提供数据与理论依据，也为保种期成虾准确的病原监测的候选组织提供参考。

对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND）主要由副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）携带的pVA1-like质粒表达毒力蛋白PirAB^Vp所致。本研究通过2次定量口饲的感染方式对凡纳对虾（Penaeus vannamei）成虾进行弧菌胁迫，研究相对低摄菌量实验组(L组，10⁵ CFU/尾)与相对高摄菌量实验组(H组，10⁷ CFU/尾)的个体5个不同时间点（感染后3、6、9、24和48 h）的9种不同组织（鳃、胃、肠道、眼柄、肌肉、肝胰腺、第五游泳足、腹部神经和第二触角鞭）中弧菌分布及变化情况。通过毒力蛋白PirA^Vp的基因表达量反映副溶血弧菌携带的pVA1-like质粒量，进而代表弧菌的分布及变化特点。结果显示，H组和L组的总体死亡率无差异，且均在3～6 h达到死亡高峰。2个实验组中病原质粒在各组织中的拷贝数不同，腹部神经与肠道组织平均质粒拷贝数均高于其他组织；同一组织内H组比L组的质粒拷贝数高1.9～4.9倍。质粒变化相关性分析显示，质粒拷贝数变化情况与对虾摄菌时间、死亡率无显著关系。同时2个实验组的质粒拷贝数变化特点也不同。L组中，有6个组织的质粒拷贝数随时间呈先上升后下降的趋势，而在胃、肠和肝胰腺中随时间呈波动变化；H组中，有7个组织的质粒拷贝数随时间呈现波动变化，但在胃和第五游泳足中随时间呈先上升后下降的趋势。第二触角鞭和第五游泳足在各取样时间段均可检测出PirA^Vp，可作为保种成虾活体常态病原检测的候选组织。本研究探究了商品规格种虾感染不同浓度Vp_AHPND后在体内不同组织的分布及扩增动态变化的特点，可为AHPND精准抗性测试方案的制定和致病机理研究提供数据与理论依据，也为保种期成虾准确的病原监测的候选组织提供参考。

【目的】研究凡纳滨对虾Crustin-like基因(即CL基因)的结构和功能,探明CL基因是否参与副溶血弧菌侵染条件下的免疫应答,为进一步研究凡纳滨对虾的免疫机制和抗病育种奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术克隆凡纳滨对虾CL基因;用DNAstar、Clustalx、MEGA 5.0、PROSITE、TMpred和SignalP软件,分析CL基因序列及其蛋白结构,并预测蛋白功能;利用副溶血弧菌进行攻毒试验和实时定量PCR,检测CL基因在病原侵染条件下的表达情况。【结果】克隆获得了凡纳滨对虾CL基因(登录号:JQ824114)的cDNA,全长为501bp,含有33bp的5′非翻译区(1～33b...

本研究选择1株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-9、1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) BS-12、1株金丽假交替单胞菌(Pseudoalteromonas flavipulchra) CDM8,以1∶1∶1将其组成复合益生菌,各益生菌水体添加浓度为107 CFU/ml,进行为期30 d的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖实验。实验分为暂养期(7d)、益生菌处理期(15d)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)攻毒期(10 d)。结果显示,养殖水体中添加复合益生菌能显著增加水体和对虾肠道可培养细菌总数(P

为了阐明引起急性肝胰腺坏死病 (Acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND) 副溶血弧菌菌株的接合型质粒在对虾养殖环境中的遗传多样性，实验从中国5个沿海省份的虾场收集了100个底泥样品，以质粒上编码接合转移蛋白的保守基因为目标，利用PCR法检测相关质粒的存在情况，并对质粒进行测序。结果表明，100个样品中有 39 个样品含有质粒的接合转移蛋白片段。从 100 个底泥样品中分离出 15株副溶血弧菌，其中13株含有1～2个质粒。质粒序列测序结果表明，这些质粒可分为8种类型/谱型，其中7种不携带pirAB，但均含有编码接合转移的基因簇。根据分离副溶血弧菌携带质粒的8种谱型，分别选择8株副溶血弧菌菌株进行对虾攻毒实验，发现这些菌株对对虾的毒性有显著差异，对虾死亡率介于15%～100%。只有pirAB阳性菌株会产生AHPND症状，对虾死亡率为100%。对质粒组成进行分析表明，质粒之间遗传物质交换频繁，大部分的质粒的遗传组成都来自一个183 kb的超大质粒 pVP2HP。本研究发现对虾养殖场底泥中分离的接合型质粒具有丰富的遗传多样性，大部分质粒的遗传组成来之质粒pVP2HP，且仅pirAB 阳性菌株会产生 AHPND 症状。本研究增强了人们对副溶血弧菌质粒遗传多样性及其与AHPND 关系的理解，为AHPND的防控提供了理论指导。

对虾急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是由致AHPND副溶血弧菌(AHPND-causing Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)携带的pVA1-like质粒所表达的PirA~(Vp)和PirB~(Vp)毒力蛋白对对虾肝胰腺的急性毒性所致。本研究用2.19×10~5 CFU/ml VpAHPND分离株20130629002S01对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)进行浸泡感染,于感染后2~9 d采集对虾的肝胰腺、鳃、肠道、肌肉组织,采用实时荧光定量PCR方法,检测各组织中的pir AVp拷贝数。结果显示,感染后凡纳滨对虾各组织均能检测到pirA~(Vp),其中,肝胰腺在感染后第4天达到峰值,为8.71×10~4 copies/mg,而鳃、肌肉、肠道分别在第3、4、5天达到峰值,分别为9.08×10~3、2.59×10~4、5.76×10~4 copies/mg。早期感染鳃组织中先出现Vp_(AHPND)的富集,在高死亡发生期,Vp_(AHPND)数量在肝胰腺和肠道出现高峰,在死亡数量逐渐下降的后期,各组织的Vp_(AHPND)均快速下降,肠道、肝胰腺和肌肉中的Vp_(AHPND)水平趋于接近。对虾肝胰腺组织病理切片显示,同一时间有临床症状的病虾和濒死对虾相比,濒死对虾表现出更严重的AHPND病理特征,且二者的组织病理特征均随着感染时间的延长变得更为严重,但检测到的Vp_(AHPND)数量呈下降趋势。研究表明,在Vp_(AHPND)感染过程中,组织中的pirA~(Vp)基因数量不能代表对虾的发病程度,发病程度及组织病理严重的AHPND样品中Vp_(AHPND)的数量不一定处于高水平状态。

为探讨养殖水体中总氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)"急性肝胰腺坏死综合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome,AHPNS)"发生的影响,设置了1个对照组和4个不同质量浓度氨氮实验组:2.5、5.0、7.5、10.0 mg/L实验组,胁迫20 d后腹肌注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行感染。凡纳滨对虾感染后6–24 h,除对照组外,各实验组均出现死亡高峰。24 h后,5.0、7.5和10 mg/L实验组对虾累积死亡率均高于2.5 mg/L组,且在同一取样时间各实验组对虾累积死亡率随着氨...

以凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）为研究对象，采用人工感染、ｔｒｉｃｉｎｅ－ｓＤｓ－ｐａＧｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂＬｏｔｔｉｎＧ、ｍａＬＤｉ－ｔｏＦ／ｔｏＦ、抑菌实验等方法对血蓝蛋白小分子降解肽段进行研究。结果发现，副溶血弧菌（ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏＬｙｔｉｃｕｓ）刺激对虾２４ ｈ后，与对照组相比，其血淋巴中新出现５个分子量为６．０～３１．０ ｋ Ｄ的与兔抗血蓝蛋白抗体呈阳性的小分子条带。其中，分子量为６．０ ｋ Ｄ的ａ条带（命名为ｈｍｃｐ６肽段）与凡纳滨对虾血蓝蛋白具有高度同源性，对副溶血弧菌具有明显的抑菌活性，与对照组相比，存在极显著性差异（ｐ＜０．０１）。由．．．

为探讨亚硝酸盐氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)急性肝胰腺坏死综合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome,AHPNS)发生的影响,设置1个凡纳滨对虾对照组和4个不同亚硝酸盐氮质量浓度(2.0、4.0、6.0和10.0 mg/L)胁迫组,亚硝酸盐氮暴露20 d,于凡纳滨对虾后腹肌注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行感染。观察到在感染后9~24 h各实验组出现死亡高峰,濒死对虾表现出与AHPN相同的临床症状,48 h后,各实验组对虾不再出现死亡,对照组和各实验组对虾累计死亡率分别为0、4%、8...

【目的】检测广西沿海地区凡纳滨对虾源副溶血弧菌的耐药性及部分相关耐药基因的携带状况,为凡纳滨对虾疾病防控以及副溶血弧菌耐药机制的深入研究提供基础数据。【方法】采用K-B纸片扩散法检测30株分离自广西钦州市、防城港市和北海市的副溶血弧菌对12种常见抗生素的耐药性,以PCR方法检测氨基糖苷类耐药基因ant(3")-I、磺胺类耐药基因Sul1、四环素类耐药基因tet(A)和β-内酰胺类耐药基因TEM在副溶血弧菌中的携带状况,通过SPSS软件进行菌株耐药表型和耐药基因的相关性分析。【结果】30株副溶血弧菌对试验药物的敏感率以氟苯尼考最高(96. 7%),其次是链霉素(90. 0%);耐药率以磺胺二甲嘧啶和青霉素G最高(均为96. 7%)。优势耐药谱型是SDM/SMD/PG/AMP和SMD/PG/AMP。PCR检测结果,ant(3")-I、Sul1、tet(A)、TEM基因的检出率分别为6. 7%、43. 3%、0. 0%和13. 3%。受试菌株共包含ant(3")-I-Sul1+tet(A)-TEM-、ant(3")-I-Sul1-tet(A)-TEM-、ant(3")-I-Sul1-tet(A)-TEM+、ant(3")-I+Sul1-tet(A)-TEM-和ant(3")-I-Sul1+tet(A)-TEM+5种耐药基因型,其中优势耐药基因型是ant(3")-I-Sul1+tet(A)-TEM-和ant(3")-I-Sul1-tet(A)-TEM-,各占40. 0%。相关性分析结果,氨基糖苷类、磺胺类、四环素类、β-内酰胺类抗生素耐药表型与对应耐药基因之间均未发现存在显著相关性。【结论】30株广西沿海凡纳滨对虾源副溶血弧菌对氟苯尼考最敏感,对磺胺二甲嘧啶和青霉素G耐药性最强;受试菌株共包含5种耐药基因型,优势耐药基因型是ant(3")-I-Sul1+tet(A)-TEM-和ant(3")-I-Sul1-tet(A)-TEM-。菌株的4类抗生素耐药基因与耐药表型之间均未发现存在显著相关性。

【目的】检测广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌的耐药性和整合子—基因盒携带情况,为凡纳滨对虾副溶血弧菌病的防控及该菌耐药分子机制研究提供基础数据。【方法】采用K-B纸片扩散法测定副溶血弧菌对16种抗菌药物的敏感性;采用PCR检测I、II和III型整合子及I型整合子可变区基因盒的携带情况,并分析菌株整合子—基因盒携带情况与耐药性的相关性。【结果】104株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对16种抗菌药物表现出不同程度的敏感性,其中,对氟苯尼考(FFC)的敏感性最高,敏感率达82.7%;对磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲嘧啶(SM2)和复方磺胺嘧啶(SD)的耐药性较强,耐药率达93.3%～100.0%。在2013-2018年,广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌共有20种耐药谱,其中优势耐药谱为SD/SM2/SMM/SMD/SXT/RAD。PCR扩增结果表明,I型整合酶int1基因检出率为64.4%,sul1和qacEΔ1基因检出率分别为25.0%和27.9%。int1、sul1和qacEΔ1基因均为阳性的菌株检出率为22.1%。在int1、sul1和qacEΔ1基因均为阳性的菌株中,有6株检出携带基因盒,基因盒种类包括blaCTX-M-2-aadA1和blaVIM-60-aadA1-aacA。所有菌株均未检出II和III型整合酶基因。int1和qacEΔ1基因在广西北海市、钦州市和防城港市分离菌株中的检出率差异显著(P0.05,下同);头孢拉定(RAD)的耐药表型与blaCTX-M-2和blaVIM-60基因、新霉素(NEO)的耐药表型与aadA1和aacA基因、磺胺类的耐药表型与sul1基因均无显著相关性。【结论】广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对氟苯尼考的敏感性最高,可考虑将该抗菌药物作为广西凡纳滨对虾副溶血弧菌病防治的备选药物。副溶血弧菌对大部分抗菌药物的耐药表型与int1基因间未检测到显著相关性、基因盒与相应抗菌药物的耐药表型间相关性也不显著,但I型整合子的流行增加了广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌产生多重耐药的可能性,因此应加强对弧菌整合子—基因盒的监控。

为了研究致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对凡纳滨对虾(Litopanaeus vannamei)肝胰腺抗氧化酶活性及相关基因表达的影响,本研究选取始体重(2.20±0.24)g的健康凡纳滨对虾初270尾,将其随机分为2组,分别以0 CFU/m L和5×107 CFU/m L剂量的致病性副溶血弧菌对凡纳滨对虾进行浸浴攻毒实验。在实验第6小时、12小时、24小时和36小时取肝胰腺,进行抗氧化酶活性及免疫相关基因表达测定。结果显示,感染副溶血弧菌后,实验组对虾肝胰腺中超氧化物歧

针对12株引起凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)的致病性副溶血弧菌,运用多位点测序技术,分析致病菌株的遗传特征。实验选择副溶血弧菌的7个管家基因dnaE、gyrB、recA、dtdS、pntA、pyrC及tnaA,对12株AHPND致病菌扩增测序。将核酸序列上传至PubMLST数据库进行比对后获得每株菌的序列型。收集其他地区AHPND致病性副溶血弧菌的多位点序列分型(MLST)数据,采用eBURSTV3及MEGA5.0软件进行遗传进化分析。结果显示,2014年中国广东分离的AHPND致病株属于一个新

分别给凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)注射生理盐水、3×106 CFU/mL(低浓度组)和9×106 CFU/mL(高浓度组)溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌液,采用荧光定量PCR技术,检测不同处理后凡纳滨对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶基因表达量随时间的变化。结果表明,处理42 h内,注射生理盐水组对虾的Toll受体和IMD mRNA表达量无显著变化,溶菌酶mRNA表达量在注射36 h后显著升高。急性感染溶藻弧菌后,凡纳滨对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA的表达量峰值分别出现在感染后24、42和36 h;溶藻弧菌的感染剂量不影...

在自然条件下从患红体病的养殖南美白对虾肝脏内分离出病原菌——副溶血弧菌,将该菌通过肌肉注射的方式,对南美白对虾做感染实验,以探讨副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响。注射弧菌后南美白对虾死亡率与时间、浓度呈正相关,与半致死剂量呈负相关;虾体肌肉、肝脏组织的超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)酶活性随弧菌浓度的增加呈下降的趋势,而过氧化物酶(POD)酶活性呈上升趋势,这可能是应激反应;酯酶同工酶(EST)酶带表现出缺失,苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)具有明显的组织特异性,并且两种酶在肌肉组织中表达最强。副溶菌弧菌感染后破坏了虾体的免疫系统,导致免疫机能的损坏,防病、抗病能力下降,进一步导...