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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
丰明 王旭达 王鹤 李怀梅 张高华
离子平衡调节是植物抵御盐分伤害的一种非常重要的机制。将已分离出的獐茅Na+/H+逆向转运蛋白基因AlNHX1构建到植物表达载体pCAMBIA1301中,通过农杆菌介导转化法将AlNHX1基因转入到辽粳9号水稻中,并对转化体系进行优化。结果表明:水稻愈伤组织诱导培养基中2,4-D的最适浓度为2mg.L-1,最佳侵染时间为90s;抗生素敏感性试验结果表明:筛选培养基中适宜的潮霉素选择压为50mg.L-1。在较优转化体系下,辽粳9号水稻的转化频率和再生频率分别达到43.9%和16.1%。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王世全 李平 刘熔山
以水稻的两个亚种籼稻和粳稻作为受体, 比较了不同外值体、vir诱导物等对根癌农杆菌转化的影响, 建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。依据该体系,以粳籼DREW 的幼愈伤组织和籼稻D汕B的幼穗愈伤组织为受体,经农杆菌AGL1/pCAMBIA1301转化后, 获得了超过50% 的潮霉素抗性愈伤筛选率, 并获得再生植株。
关键词：
根癌农杆菌 水稻 基因转化 再生植株
[期刊] 农业现代化研究
[作者]
肖媛 李落叶 徐孟亮 崔延春 夏新界
以水稻两用不育系培矮64S成熟胚为外植体,以不同组合培养基为诱导和继代培养基,建立了适合水稻培矮64S转化的高效再生体系,并通过农杆菌EHA105介导,将大肠杆菌C1基因转入培矮64S,获得再生植株。结果表明,J0N1D3为合适的愈伤组织诱导培养基,诱导率达56.44%;通过潮霉素筛选后,获得的抗性愈伤组织分化率为73.08%,经分化,获得133株再生植株;随机挑选67株再生植株经PCR检测,其中46株检测到目的条带,阳性检出率占68.66%;对PCR阳性植株进行荧光定量实时PCR分析,结果表明C1基因能在转基因植株中表达。通过对T1代PCR分析,得到目的条带,表明C1基因能在转基因后代稳定遗...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王春萍 谢树章 蒋晓英 吴红 周幼昆 林清 雷开荣
本研究以籼稻科恢675成熟种子为材料进行了农杆菌介导的ThIPK2基因遗传转化。结果显示:持续高温光照培养使得愈伤诱导和继代只需10～14 d,有效缩短了愈伤获得周期,且愈伤诱导率可达95.6%。抗性愈伤率为10.6%,持续高温光照培养使得抗性愈伤继代5～7 d就可大量繁殖,且抗性愈伤分化率达48.8%。经第一次继代后的愈伤转化效率显著高于未经继代的愈伤的转化效率。因此,此转化系统有效缩短了水稻转化周期,优化了籼稻遗传转化,同时为抗逆基因转入籼稻提供了参考。
[期刊] 华北农学报
[作者]
上官小霞 吴霞 张林水 刘珍 李波 李燕娥 朱祯
辣椒农杆菌介导转化体系主要包括无菌苗制备、菌株培养、农杆菌介导转化、芽诱导、芽伸长、生根及移栽等 6个步骤。芽诱导培养基以MS +4.0～ 6 .0mg/L 6 BA +0 .5mg/LNAA +2 .0mg/LAgNO3 较好 ,诱芽分化率因品种不同而异 ,高的可达 70 %以上 ,子叶的分化率明显高于下胚轴 ;诱芽伸长培养基以MS +3.0mg/L 6 BA +0 .3mg/LNAA +1.0mg/LGA3 较好 ,伸长率达 4 0 % ;生根培养基以 1/2MS +0 .3mg/LNAA(或 0 .5mg/LIAA)较好 ,平均生根率达 6 5 %。经过对 3个品种的抗虫基因转化研究...
关键词：
农杆菌介导 基因转化 辣椒
[期刊] 华北农学报
[作者]
裴忠有 孙守钧 李玲 李明
以5个粳稻品种为材料,研究农杆菌介导转化中影响粳稻转化的几个重要因素。通过研究发现,根癌农杆菌菌株EHA105的转化率明显高于LBA4404,根癌农杆菌菌株EHA105介导的水稻转化率为25.3%,而LBA4404为7.6%;不同外植体的诱导率、转化率和分化率存在明显差异,以幼胚为外植体材料,它的出愈率和转化率明显比成熟胚高,而分化率则明显低于成熟胚;不同水稻品种在转化率与分化率上差异也很明显,反映了不同基因型水稻品种的差异,同时研究发现同一品种不同批次在转化率和再生频率上差异比较显著,反映了在水稻转化过程中还存在一些未知条件对于转化的影响;通过对抗性愈伤和转化植株的叶片、根的GUS染色,证明...
关键词：
农杆菌 转基因 粳稻
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张月婷 廖玉才 黄涛 刘正位 高春生 李和平
为建立农杆菌介导的高效小麦遗传转化体系,分析比较了不同小麦栽培品种、不同培养处理条件下的愈伤诱导、分化及转化效率。结果表明:2个长江中下游主推小麦品种扬麦158和华麦13的幼胚愈伤诱导没有差异,但扬麦158形成的胚性愈伤多、分化率及转化率高于华麦13,是优良的农杆菌介导的遗传转化受体基因型。预培养20d的愈伤转化率最高,高渗处理可进一步提高转化率。获得的T0、T1代转基因植株,经PCR分析鉴定,表明外源基因已经整合到小麦基因组中。
关键词：
小麦 农杆菌 幼胚 除草剂 转化体系
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
何少海 姚盛存 丰宇凯 汪轲 李飞飞
为建立以草丁膦为选择标记的农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的水稻Oryza sativa胚性愈伤组织转化体系,通过农杆菌介导法将bar基因导入了‘日本晴’Oryza sativa‘Nipponbare’‘秀水134’‘Xiushui 134’和‘中花11’‘Zhonghua 11’等3个水稻品种的胚性愈伤组织。在分别以选择压15.0,10.0和10.0 mg·L(-1)的草丁膦质量浓度进行了3次选择后,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭蓉 李霞 张金文 李兴涛 杨慧 刘玲
选黑田五寸胡萝卜栽培种,通过农杆菌介导的转化方法,获得转基因植株。结果表明:抗性愈伤和芽分化用不同浓度Kan筛选,Kan抗性芽的分化频率可达52%,Carb 500 mg/L能够完全抑制农杆菌的生长并能促进芽的分化;适当浓度的Cef对根形成有一定促进作用。转基因植株炼苗,采用塑料布覆盖并逐渐打开通风口通风的方法,抗性植株长势好,抗性强,成活率可以提高35%。低温春化,大棚和陆地相比,死亡率降低了49.5%。对7个株系T1植株的PCR分析,得出其中两株系接近1∶1,另两株系为1∶3。
关键词：
胡萝卜 转化体系 低温春化 农杆菌介导
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王旭达 于树涛 张高华 王鹤 丰明 都兴范 范琦 于国庆
DREB2As是一类可以激活干旱响应基因表达的转录因子。为了提高花生的耐旱性,本研究通过农杆菌介导的转化方式将AlDREB2A转录因子基因导入花生中。同时对影响花生转化的3种因素(烟草提取物添加量、超声波处理时间、抗生素浓度)进行优化。在聚乙二醇的干旱胁迫压力之下,AlDREB2A转基因花生的叶片相对含水量和脯氨酸含量均明显高于非转基因花生,而丙二醛含量低于非转基因花生。在表型方面,转基因花生的萎蔫程度也低于非转基因花生。研究证实,转基因花生比非转基因花生有更高的耐旱性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安娜 陈耀锋 崔志刚 白延红
【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50...
关键词：
芪合酶基因 烟草 根癌农杆菌 遗传转化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王旭达 丰明 王鹤 张高华
通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～＋逆向转运蛋白基因（ａｌＮＨＸ）表达在马铃薯中，并对影响马铃薯转化的几种因素（抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等）进行优化。结果表明：最适农杆菌菌液浓度是ＯＤ６００＝０．６，最适侵染时间是５ｍｉＮ，最适共培养时间是２Ｄ，马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是４００ｍｇ／ｌ；经ＰＣＲ检测确认的转基因马铃薯植株在含０．７％ＮａＣｌ的培养基中可以生长，而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下，转基因马铃薯的Ｎａ～＋、Ｋ～＋含量及Ｋ～＋／Ｎａ～＋的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈双臣 刘爱荣 王凤华 王菲 周洲
Micro-Tom番茄植株矮小,生长密度高,生命周期短,转化效率高,成为功能基因组学研究的新型模式植物。对影响Micro-Tom遗传转化频率的共培养时间、AS的添加、工程菌液浓度和抑制农杆菌所用抗生素种类进行了分析,建立了Micro-Tom稳定高效的遗传转化体系。以bar基因设计引物对转化群体进行PCR检测,阳性率为72.3%,平均插入位点数为1.8个。遗传体系的建立为Micro-Tom在植物生物学研究中提供理论基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张国裕 王岩 程智慧 王晓武
以建立的菜心高频再生体系为基础,利用GU S染色组织分析法研究了根癌农杆菌菌株、乙酰丁香酮(A S)、预培养时间、浸染时间和共培养时间等因素对菜心((B rassica camp estris L.var.p arach inesis)子叶遗传转化的影响,探讨了适宜菜心转化的卡那霉素与抑菌抗生素使用浓度。结果表明,农杆菌菌株AGL 0对菜心的浸染能力最强,添加100μm o l/L的乙酰丁香酮有利于菜心转化;子叶外植体预培养2 d后浸染(菌液浓度OD600值为0.8)15m in,共培养2 d,然后转移到含15 m g/L卡那霉素和100 m g/L T icarc illin的筛选培养基上,...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张自由 连青龙 辛海波 钟雄辉 罗弦 义鸣放
在唐菖蒲‘Advanced Red’胚性愈伤组织受体系统的基础上,建立其遗传转化体系。采用根癌农杆菌(GV3101)介导法,研究了侵染液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、负压和筛选方式等因子对唐菖蒲遗传转化效率的影响。结果表明:在遗传转化过程中,不经预培养,负压处理下,农杆菌菌液OD600为0.6～0.8,侵染时间15～20min,添加100μmol/L AS,共培养3d,可获得较高的遗传转化效率。经过3～4个月选择培养,部分抗性植株经PCR和Southern杂交检测表明,目的基因gus已整合到唐菖蒲基因组中。
关键词：
唐菖蒲 gus 根癌农杆菌 遗传转化
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