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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
谢志兵 钟晓红 邓子牛
为了得到优良的草莓抗病植株,采用根癌农杆菌介导法进行几丁质酶基因(chit42)对草莓叶片的转化,对转化过程中的一些因素进行研究,并得到了转化最优方案:乙酰丁香酮AS浓度80~120μmol/L,10~20 min侵染,3 d共培养.经PCR检测初步鉴定外源基因已经导入.
关键词：
草莓 几丁质酶基因 转化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王建辉 刘建军 陈克玲 李洪雯 何建 关斌
本研究以‘丰香’草莓(Fragaria ananassa cv. Toyonoka)试管苗叶片为外植体材料,运用根瘤农杆菌(包含pBI121-DHN)介导法转‘丰香’草莓,构建青稞(Hordeum vulgere L. var. nudum Hook. f.)脱水素基因(dhn4)编码区的过量表达载体pBI121-DHN。结果表明,经过抗生素筛选,获得再生草莓植株,提取转基因草莓叶片DNA,经PCR扩增,获得预期大小的外源插入片段。此"丰香"草莓转基因技术,为未来开展生物技术育种打下了基础。
关键词：
青稞 脱水素 草莓 转基因
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王亚 贺绥欢 裴越琳 陶宇逍 刘腾 杨泽浩 冷平
为研究草莓中几丁质酶基因的转录特性及其在果实中对生物及非生物胁迫的响应，以＂阿尔比＂草莓为试验材料，运用实时荧光定量ＰＣＲ技术对４个几丁质酶基因ＦａＣｈｉ１－ＦａＣｈｉ４在果实发育过程及不同器官中的表达情况及其对生物及非生物胁迫的响应情况进行研究。结果表明：１）ＦａＣｈｉ４主要在果实中表达，在转色期和红熟期有２个表达峰，它在果实发育与成熟过程中的表达水平显著地高于ＦａＣｈｉ１－ＦａＣｈｉ３。此外，ＦａＣｈｉ１主要在营养器官中表达，其中在叶中的表达量最高；ＦａＣｈｉ２主要在叶中表达；ＦａＣｈｉ３在各个器官中的表达量均相对较低。２）干旱胁迫及灰霉菌处理后，果实中ＦａＣｈｉ１－ＦａＣｈｉ４的表达均被．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱慧 王云霞 胡白石 刘凤权
利用PCR方法从产酶溶杆菌OH11菌株中克隆到编码几丁质酶的chiA基因。同源性比较发现,其推测产物与产酶溶杆菌C3菌株和N4-7菌株的ChiA有97%以上的序列一致性。基因经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到含T7启动子的高表达载体pET21a(+)上构建重组质粒pChiA,并转化宿主菌BL21(AI)产生BLChiA表达菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后发现,BLChiA菌株产生相对分子质量约为75×103的蛋白质。生物活性试验表明,该蛋白能水解几丁质,在几丁质培养基上产生一透明的水解圈,并对立枯丝核菌菌丝的生长有抑制作用。因此该蛋白具有一定的生物防治作用。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
任春梅 高必达 张学文 何迎春 苏建明
为了获得抗真菌病的番茄材料 ,采用农杆菌介导法将细菌几丁质酶基因转化番茄子叶 ,获得了抗卡那霉素的转化植株 ,PCR检测初步证明细菌几丁质酶基因已整合到番茄的基因组 .同时对番茄耐 Kan水平、转化受体的预培养以及共培后洗涤抑菌进行了研究 .结果表明 :卡那霉素质量浓度为 5 0 m g/ L 时就能完全抑制番茄子叶再生 ;共培后直接用抑菌剂洗涤的抑菌效果较好 ;番茄子叶预培养 1d的转化率最高
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沙莉 黄振吉 关雄
研究了不同氮源对苏云金芽胞杆菌(Bt)BRC-HZP7菌株产几丁质酶活力的影响.结果表明:在不添加几丁质的LB培养基和牛肉膏培养基中,菌株都能合成几丁质酶,最高酶活力分别为1368.72、103.39 U;在含2%(质量分数)几丁质的产酶培养基中添加酪蛋白,能有效提高产酶活力,最高酶活力为563.57 U;在产酶培养基中分别添加质量分数为1%的谷氨酰胺、天门冬酰胺、脯氨酸、甲硫氨酸4种氨基酸,产酶活力与对照组相比都大大下降,最高酶活力较对照分别下降了32.5%、33.7%、80.6%、82.6%,故推断氨基酸可抑制Bt合成几丁质酶.
关键词：
苏云金芽胞杆菌 几丁质酶 氮源
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
何业华 熊兴华 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达.
关键词：
枣树 ACC合成酶反义基因 转化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
章镇 孙爱君 房经贵 盛炳成
通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠变小、雄蕊变短等 ,还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用
关键词：
烟草 农杆菌 rolC基因 转化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孟楠 刘月学 孙立茹 杜安楠 李贺 张志宏
利用农杆菌注射法对草莓果实细胞进行了转化研究。以草莓(Fragaria×ananassa)品种丰香和红脸颊为试材,研究了农杆菌菌株的种类及其浓度、不同注射部位、果实发育时期和草莓基因型对转化效率的影响。结果表明:选用菌液OD600值为2.4的EHA105菌株,取花后19d大小的果实,从果蒂部位进行注射时转化效果最好,GUS染色率可达95%。本研究初步建立了能使外源基因在草莓果实细胞中高效表达的注射法转化体系,是草莓果实发育特性相关基因功能鉴定的可行方法。
关键词：
草莓果实 GUS表达 农杆菌注射 转化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
何迎春 高必达
烟草几丁质酶基因已转入番茄、烟草等作物中 ,并得到了抗病转基因植物 .为了检验该基因转入水稻后 ,能否得到抗病的水稻 ,构建了适于水稻转化的质粒 p BG112 1.将烟草几丁质酶基因 (Tchi B)连上 Ca MV35 S启动子和Nos终止区构建成融合基因 ,再将 Ca MV35 S启动子 / Tchi B编码区 / Nos终止区融合基因插入到双元载体p CAMBIA130 1的多克隆酶切位点 ,得到一个 13.9kb具有几丁质酶基因和潮霉素抗性基因的转化质粒 p BG112 1,进行酶切和 PCR检验后 ,用花器介导法转化水稻 ,后代植株用潮霉素处理 ,经 PCR检验 ,初步证实已将目的...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王世全 李平 刘熔山
以水稻的两个亚种籼稻和粳稻作为受体, 比较了不同外值体、vir诱导物等对根癌农杆菌转化的影响, 建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。依据该体系,以粳籼DREW 的幼愈伤组织和籼稻D汕B的幼穗愈伤组织为受体,经农杆菌AGL1/pCAMBIA1301转化后, 获得了超过50% 的潮霉素抗性愈伤筛选率, 并获得再生植株。
关键词：
根癌农杆菌 水稻 基因转化 再生植株
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安娜 陈耀锋 崔志刚 白延红
【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50...
关键词：
芪合酶基因 烟草 根癌农杆菌 遗传转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
上官小霞 吴霞 张林水 刘珍 李波 李燕娥 朱祯
辣椒农杆菌介导转化体系主要包括无菌苗制备、菌株培养、农杆菌介导转化、芽诱导、芽伸长、生根及移栽等 6个步骤。芽诱导培养基以MS +4.0～ 6 .0mg/L 6 BA +0 .5mg/LNAA +2 .0mg/LAgNO3 较好 ,诱芽分化率因品种不同而异 ,高的可达 70 %以上 ,子叶的分化率明显高于下胚轴 ;诱芽伸长培养基以MS +3.0mg/L 6 BA +0 .3mg/LNAA +1.0mg/LGA3 较好 ,伸长率达 4 0 % ;生根培养基以 1/2MS +0 .3mg/LNAA(或 0 .5mg/LIAA)较好 ,平均生根率达 6 5 %。经过对 3个品种的抗虫基因转化研究...
关键词：
农杆菌介导 基因转化 辣椒
[期刊] 林业科学
[作者]
罗在柒 郭辉力 杨亚东 杨明峰 马兰青 王有年
【目的】白藜芦醇作为植物次生代谢产物不但能提高果树抗真菌能力,还能改善果品质量。遗传转化芪合酶基因能够增强植物的抗真菌能力,虎杖芪合酶基因具有较高的催化合成白藜芦醇的效率,研究虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,以期获得具有抗真菌能力且改善枣果实品质的遗传转化新材料。【方法】通过组织培养再生体系与目的基因转化技术,优化获得茎诱导丛生芽,构建植物表达载体,优化遗传转化体系,采用农杆菌介导法将虎杖白藜芦醇生物合成关键酶基因Pc PKS5遗传转化壶瓶枣。【结果】优化壶瓶枣茎段诱导得到高分化率的丛生芽遗传转化体系,再生增植率为11.0,为壶瓶枣成功实现遗传转化奠定了基础。将壶瓶枣0.8~1.0 cm含茎尖和...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王志成 易自力 蒋建雄 覃静萍 肖亮 储成才
通过农杆菌介导,将几丁质酶基因和葡聚糖酶基因导入籼稻E32、9311、特青、盐恢559等4个栽培品种的愈伤组织中,经筛选与培养获得转基因植株.分子检测证明外源基因已整合到受体植株基因组中.抗病性鉴定的结果表明,转基因植株抗稻瘟病的能力有明显提高.
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