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[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏晓 张奇 张文 李慧 李培武
【目的】为预防和降低黄曲霉毒素污染,在前期探明黄曲霉毒素产毒菌株鉴别标识性分子PO8蛋白的基础上,欲研究建立高灵敏、大容量反应体系的双抗夹心ELISA检测技术,为污染源头监控提供技术支撑。【方法】用干菌丝作标识性分子PO8蛋白的参考物,以高压均质制得的黄曲霉菌裂解液为检测抗原,纯化后的PO8-VHH作包被抗体,产毒菌株多抗作检测抗体,抗原、抗体分别以200μL/孔加入到96孔酶标板,进行大容量反应体系夹心ELISA法的试验。优化相关理化因素,以阳性孔OD_(450nm)≥1.0,阳性孔OD_(450nm)/阴性孔OD_(450nm)较高为原则,确定最佳试验条件,建立标准曲线。并通过样品添加回收试验、重复性试验、特异性试验,对建立的夹心ELISA方法进行性能评估。【结果】通过棋盘格试验确定了最佳包被抗体浓度为3.0μg·mL~(-1),最佳多抗的工作浓度为2.5μg·mL~(-1)。优化反应条件确定:最佳抗体包被条件为4℃过夜,最佳封闭液为3%的BSA,最佳封闭条件为37℃封闭2 h,最佳多抗作用条件为37℃反应50 min。在优化后的条件下建立了夹心ELISA方法的标准曲线,对黄曲霉菌检测限可达到0.1μg·mL~(-1),比前期报道的常规容量反应体系灵敏度提高了约10倍。该方法特异性强,与青霉菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、赭曲霉菌均无交叉反应,且检测非产毒黄曲霉菌株信号值较低,接近于阴性值。重复性试验显示,板间变异系数为1.5%—5.8%,板内变异系数为0.4%—3.2%,均小于7%,说明该方法稳定性好。采用该方法对花生、玉米等农产品进行添加回收试验,平均回收率在81.9%—109.0%。【结论】本研究建立的大容量反应体系夹心ELISA方法可快速、高灵敏地检测黄曲霉毒素产毒菌,为从源头上控制黄曲霉毒素污染提供了新的快速、方便的检测技术支撑。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙长坡 常晓娇 伍松陵 沈晗
【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张兆威 李培武 张奇 丁小霞
【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李培武 丁小霞 白艺珍 周海燕 印南日
黄曲霉毒素具有强毒性和强致癌性,不仅严重影响中国花生等农产品质量安全水平与国际贸易,还严重威胁人类和动物健康,受到社会的广泛关注。本文对国内外黄曲霉毒素风险评估研究进展进行综述,分析开展黄曲霉毒素风险评估的现状、技术难点和未来发展方向,以期促进中国农产品和食品中黄曲霉毒素风险评估工作的进一步发展。
[期刊] 世界农业
[作者]
张会娟 胡志超 王海鸥 王建楠 高学梅 刘敏基
黄曲霉毒素具有高毒性、高致畸性和高致突变性,是危害最大的真菌毒素之一。本文在介绍黄曲霉毒素概念、性质、产生条件及影响因子的基础上,阐述了国内外黄曲霉毒素在不同作物品种和地域上的危害以及其检测方法和预防、去除、降解措施,对中国今后农产品黄曲霉毒素污染防控技术研究提出了相关建议。
关键词：
黄曲霉毒素 产生 危害 防除
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王宁 马秋刚 计成 关舒 牛天贵
本研究对一株具有降解黄曲霉毒素B1活性的黏细菌的产酶条件进行了优化。通过单因素实验和正交实验得到最优化的培养基以及培养条件。优化后的培养基为:酵母粉7 g/L、CaCl2.2H2O为1 g/L、MgSO4.7H2O为0.5 g/L、VB12为750μg/L;并确定其最佳培养条件为:初始pH 7.5、接种量20%、发酵时间50 h、发酵温度30℃。在上述最佳培养基和最佳发酵条件下,该菌株降解黄曲霉毒素B1的能力为78.2%。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
章先 王继璇 程高钏 李可 张晓峰 孙孟娇 程昌勇 宋厚辉
【目的】真菌毒素可污染农产品和动物源性食品，其中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)毒性强、危害大，建立AFB_1快速、高灵敏和便捷的检测方法对于监测相关产品中AFB_1污染水平，保障人和动物健康均具有重要意义。本研究基于侧向层析技术原理，采用竞争模式，优化建立免疫层析检测方法，以实现AFB_1的快速定性检测和定量分析。【方法】通过比较分析不同粒径金颗粒标记抗体效果，优化确定免疫层析各组分材料类型、相关缓冲液配方及最佳使用质量浓度，建立AFB_1高灵敏定性定量免疫层析检测方法。【结果】优化建立的AFB_1免疫层析检测法在实际样本中的定性和定量检测限分别为2.5和0.5μg·kg~(-1)，灵敏度高、特异性强，与其他常见真菌毒素无交叉反应，加标回收实验结果显示：该方法准确稳定，且对AFB_1天然污染样本的定量检测结果与商品化试剂盒及LC-MS/MS一致性较好。【结论】本研究制备的免疫层析检测法可用于样本中AFB_1污染的快速定性检测与定量分析，适合缺乏实验条件的基层检验检疫机构和农产品加工企业对大量样本进行快速筛查，样本检测结果疑似阳性再采用仪器法进行确认，可降低检测成本，提升检测效率，同时为建立其他病原微生物免疫层析检测方法提供参考。图9表2参26
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵以桥 余烨颖 吕雅婷 曾昱龙 胥伟
以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。
关键词：
茶树籽 含水量 黄曲霉 黄曲霉毒素
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵以桥 余烨颖 吕雅婷 曾昱龙 胥伟
以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。
关键词：
茶树籽 含水量 黄曲霉 黄曲霉毒素
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何成华 樊彦红 王莹 皇超英 王希春 张海彬
为了探讨黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)两种真菌毒素单独或联合应用对水产养殖的影响,本试验选用鲤鱼270尾(体重为(18±0.1)g),均分为9组,每组设3个平行,2个平行组进行试验观察和统计,1个平行组作为试验过程中解剖检查用。试验采用二因素三水平设计,AFB1的含量分别为0、0.05和0.1mg·kg-1,DON的含量分别为0、1和5mg·kg-1。试验期为40d。每20d进行增重、体长、丰满系数的检测。试验结束时进行肝胰脏重/体重值、血清生化指标(碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(AL...
[期刊] 草业科学
[作者]
高晶 袁建振 侯扶江 常生华 王召锋 傅华 王静
黄曲霉毒素是严重威胁动物与人类健康的一类真菌毒素。牧草在收割、运输与贮存过程中极易发霉,易被黄曲霉毒素侵染。反刍动物采食感染有黄曲霉毒素的饲料后,其乳汁中也会分泌出黄曲霉毒素,即使微量的黄曲霉毒素也可对动物和人体造成危害。因此,本文对饲料及乳制品中黄曲霉毒素的来源、危害、检测技术以及预防措施进行了综述,并对其检测技术进行重点阐述,以期为在生产实践中能够准确、快速、实时地检测饲料及乳制品中的黄曲霉素提供理论依据与指导。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李俊霞 梁志宏 关舒 汪晓 王宁 计成 牛天贵
【目的】筛选能降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,以期在该毒素的生物脱毒中得到应用。【方法】以香豆素为惟一碳源和能源进行AFB1降解菌株的初筛,之后将初筛的10株菌分别降解浓度为100μg·kg-1的AFB1。【结果】筛选出的NMO-3菌株降解AFB1能力达85.7%,显著高于其它菌株(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王妍入 李培武 张奇 丁小霞 张文
【目的】笔者实验室前期免疫并构建噬菌体展示纳米抗体库,应用此抗体库筛选、制备可以用作黄曲霉毒素无毒替代抗原的纳米抗体。本研究旨在探明已筛选出的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5用作黄曲霉毒素替代抗原的活性,为后续纳米抗体的合成以及黄曲霉毒素绿色免疫分析方法的建立奠定基础。【方法】前期,笔者实验室对羊驼免疫黄曲霉毒素抗原(AFB1-BSA),经过5次免疫后,取血,提取RNA,反转录为cDNA,并采用PCR技术对抗体可变区VHH区域进行扩增,与载体pComb3X偶联,构建噬菌体展示纳米抗体库;经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与黄曲霉毒素竞争结合抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11的噬菌体展示纳米抗体...
关键词：
黄曲霉毒素 模拟抗原 噬菌体展示纳米抗体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀兰 张银志 汤坚 朱瑜
为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用...
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