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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李华 苏立宁 刘东军 李雪峰 旭日干
【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp(JN936490),其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABPⅠ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨娇馥 史偈君 梁燕 郑旭 张涛 秦毅 王志钢 刘东军
【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM_001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王志钢 其布日 包婵婵 旭日干
【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh_1_N domain和Ldh_1_C domain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
范晓梅 栗瑞兰 张通 边小娜 张家新
为研究GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达模式,对初情期、体成熟期、老龄期3个生殖生理阶段绒山羊附睾及睾丸中的GPx5从mRNA和蛋白水平进行了检测。结果显示各生殖生理阶段绒山羊睾丸中均未见GPx5表达,附睾中均有GPx5表达。各生殖生理阶段附睾表达区域及表达量存在差异:初情期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部;体成熟期,附睾各区域GPx5 mRNA和蛋白的表达量极显著高于其他阶段,附睾起始部和附睾头部为主要表达区;老龄期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部,但较体成熟期明显减少。免疫组化
关键词：
绒山羊 附睾 精子 GPx5
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦凤 梁燕 金永 王晓晶 郭旭东 王玮 王潇 王志钢 刘东军
【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
勿都巴拉 吴江鸿 丽春 胡斯乐 高树新
为分析绒山羊JAG1蛋白结构特征,及其在不同毛囊生长期中的表达模式,从阿拉善种羊场选择2周岁、体重相近的3只内蒙古绒山羊母羊,利用生物信息学方法比对绒山羊JAG1氨基酸序列与其他物种的相似性,分析JAG1蛋白质理化性质和结构特征;利用免疫组化和实时荧光定量PCR检测其在内蒙古绒山羊皮肤中的表达部位和表达量。结果表明,绒山羊JAG1氨基酸序列与绵羊相似性可达99.5%,JAG1蛋白信号肽位于第1～29个氨基酸序列,含有一个剪切位点和一个跨膜结构,具有61个丝氨酸、26个苏氨酸、19个酪氨酸磷酸化位点,63个O-糖基化位点,6个N-糖基化位点,属于不稳定亲水蛋白。在毛囊退行期(1月份)和休止期(4月份)未检测到JAG1蛋白的表达;生长前期(7月份)和生长期(9月份)在毛乳头细胞中表达。JAG1 mRNA在内蒙古绒山羊皮肤毛囊的4个时期均有表达,随着毛囊进入生长期JAG1 mRNA表达量逐渐增加,生长期皮肤中的表达量显著高于其他阶段(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵珺 张文广 苏蕊 刘志红 张燕军 王乐 付绍印 李金泉
【目的】研究内蒙古绒山羊背最长肌、臂三头肌和臀肌的蛋白差异表达谱。【方法】以３只在相同背景下饲养的绒山羊成年母羊为研究对象，屠宰后取背最长肌、臂三头肌和臀肌３个部位骨骼肌，采用差异双向电泳方法建立蛋白质谱，找出１７个差异表达蛋白点，并进行质谱分析。【结果】成功鉴定并匹配到１５个差异表达蛋白，其中９个与山羊肌肉发育相关。背最长肌中发现的位于ＦＧＦ２反义链的蛋白的功能主要是独立控制ＦＧＦ２的表达，同时具有激素调节和抗增殖的作用；背最长肌和臂三头肌中发现的轻链肌球蛋白（ＭｙＬＣ）家族成员，其类型在２种肌肉组织中不同，功能是控制肌肉收缩。背最长肌和臂三头肌中的ＭｙＬＣ蛋白分子质量存在差异。【结论】建立．．．
关键词：
绒山羊 骨骼肌 差异蛋白 质谱分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵濛 奈日乐 谢遇春 马丽娜 米璐 李金泉 刘志红
【目的】研究绒山羊皮肤部分角蛋白关联蛋白(keratin-associated protein,KRTAPs)基因的表达谱及其与全年日照变化规律间的相关性。【方法】以3只周岁阿尔巴斯型内蒙古绒山羊体侧皮肤为样本,进行高通量转录组测序(RNA-Seq),对获得的部分KRTAPs基因一年内不同月份间的转录本进行表达丰度分析,并结合当地全年日照变化规律与RT-PCR试验方法,验证KRTAP24-1、KRTAP3-1、KRTAP8-1在关键节点月份的表达谱,确定全年皮肤KRTAPs表达丰度变化与日照变化规律间的相
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈定双 王瑞龙 林亚秋 王永 朱江江 李鑫 张浩 李艳艳
Hoxa5是HOX家族中的一员,在生长发育与肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用,但其在反刍动物中的研究较少。为了获得山羊Hoxa5基因序列,明确其表达特征,知悉其在山羊不同组织的表达水平,利用RT-PCR技术,从简州大耳羊的皮下脂肪组织中克隆得到Hoxa5基因序列,用生物信息学的方法分析其生物学特性,用实时荧光定量PCR技术检测Hoxa5基因在简州大耳羊心、肝、脾、肺、肾、背、股、臂等10个组织中的表达情况。结果表明:山羊Hoxa5基因的开放阅读框为813 bp,共编码270个氨基酸。Hoxa5相对分子质量为29.283 ku,等电点为9.42,无信号肽和跨膜结构域,该蛋白属于非分泌蛋白;Hoxa5蛋白的二级结构预测发现,Hoxa5蛋白中无规卷曲含量最高,其次是α螺旋,β转角占总氨基酸数相对较少;氨基酸同源性比对结果显示,简州大耳羊与绵羊、牛、马、猪、黑鼠、豚鼠、小鼠及人的Hoxa5氨基酸序列相似性依次为100.00%,99.63%,99.26%,99.26%,98.89%,98.89%,98,89%和98.15%,说明该基因在不同的物种间具有较高的保守性;实时荧光定量PCR结果显示,Hoxa5基因在山羊的组织中差异表达,在肾脏中表达量最高;构建pEGFP-Hoxa5融合载体转染山羊皮下脂肪细胞后的荧光定位显示该基因主要定位于细胞核中。研究表明山羊Hoxa5基因在皮下脂肪细胞分化过程上调且蛋白定位于细胞核中,推测该基因可能作为转录因子调控山羊皮下脂肪细胞分化。
关键词：
山羊 Hoxa5 表达特征 核定位
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
姜维 薛鹏 何永新 陈玉林
【目的】克隆山羊Eda基因CDS区全序列,并对其进行序列分析,研究Eda基因在毛囊生长周期不同阶段皮肤组织中的表达规律。【方法】以太行黑山羊为研究对象,采集其毛囊生长休止期、生长期和退行期背部皮肤组织,采用RT-PCR技术克隆山羊Eda基因,通过在线软件Blastn进行基因cDNA序列分析,用SMART进行氨基酸序列分析,利用SWISS-MODEL软件进行蛋白质结构分析;以β-actin为看家基因,采用实时荧光定量PCR技术对Eda mRNA在毛囊生长不同时期皮肤组织中的表达规律进行分析。【结果】太行黑山羊Eda-A1基因CDS区全长1 176bp,编码391个氨基酸;Eda-A2比Eda-A...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈明洁 罗立廷 刘勇 何勇刚 何光源
puroindoline a(Pin a)和puroindoline b(Pin b)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦Pin a基因的保守序列,设计合成了1对特异性引物ForA1和RevA1,对六倍体牡山羊草Aegilops juvenalis(UUMMDD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行Pin a基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了1个新型Pin a(Pin a-allele),其ORF长447 bp,编码148个氨基酸残基,具有麦类作物Pin a基因特有的28个氨基酸的信号肽序列和WRWWKWWK的色氨酸结构域基因序列,与软粒小麦cv.capitole的Pina-D1...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李明昭 刘超 孙军伟 朱海鲸 曹晖 吕晓 仇普斌 华进联
【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈定双 王瑞龙 林亚秋 王永 朱江江 李鑫 张浩 李艳艳
Hoxa5是HOX家族中的一员,在生长发育与肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用,但其在反刍动物中的研究较少。为了获得山羊Hoxa5基因序列,明确其表达特征,知悉其在山羊不同组织的表达水平,利用RT-PCR技术,从简州大耳羊的皮下脂肪组织中克隆得到Hoxa5基因序列,用生物信息学的方法分析其生物学特性,用实时荧光定量PCR技术检测Hoxa5基因在简州大耳羊心、肝、脾、肺、肾、背、股、臂等10个组织中的表达情况。结果表明:山羊Hoxa5基因的开放阅读框为813 bp,共编码270个氨基酸。Hoxa5相对分子质量为29.283 ku,等电点为9.42,无信号肽和跨膜结构域,该蛋白属于非分泌蛋白;Hoxa5蛋白的二级结构预测发现,Hoxa5蛋白中无规卷曲含量最高,其次是α螺旋,β转角占总氨基酸数相对较少;氨基酸同源性比对结果显示,简州大耳羊与绵羊、牛、马、猪、黑鼠、豚鼠、小鼠及人的Hoxa5氨基酸序列相似性依次为100.00%,99.63%,99.26%,99.26%,98.89%,98.89%,98.89%和98.15%,说明该基因在不同的物种间具有较高的保守性;实时荧光定量PCR结果显示,Hoxa5基因在山羊的组织中差异表达,在肾脏中表达量最高;构建pEGFP-Hoxa5融合载体转染山羊皮下脂肪细胞后的荧光定位显示该基因主要定位于细胞核中。研究表明,山羊Hoxa5基因在皮下脂肪细胞分化过程上调且蛋白定位于细胞核中,推测该基因可能作为转录因子调控山羊皮下脂肪细胞分化。
关键词：
山羊 Hoxa5 表达特征 核定位
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏蕊 张文广 尹俊 赵珺 常子丽 李金泉
为探讨调节内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育相关基因及其作用机理,采用原位杂交和荧光实时定量PCR方法对BMP2基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达情况进行了检测,分析了其可能的作用方式。原位杂交结果表明,该基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育休止期毛干周围有强烈的表达信号,在兴盛期不表达;荧光实时定量PCR结果显示,该基因在休止期皮肤毛囊的表达量是兴盛期的27.8倍。综合上述试验结果,推测BMP2基因在毛囊发育过程中主要起抑制毛囊生长发育、维持毛囊处于休止期的作用,且可能参与新一轮的毛囊重建,因此,可将BMP2基因作为绒山羊育种过程中提高其产绒量的一个潜在的分子靶点。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苏蕊 李金泉 张文广 尹俊 赵珺 常子丽
【目的】研究内蒙古绒山羊毛囊发育兴盛期和休止期BMP2基因在皮肤毛囊中的表达情况。【方法】功能分类基因芯片以及原位杂交技术。【结果】原位杂交结果表明,该基因在休止期毛囊毛干周围高表达,在兴盛期不表达;基因芯片结果显示,同兴盛期相比,休止期BMP2基因在皮肤中表达上调24.65倍。【结论】BMP2基因抑制内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育,与维持皮肤毛囊处于休止期有关;该基因主要在皮肤毛囊的毛干周围发挥作用,从而达到维持皮肤毛囊发育处于休止期的作用。
关键词：
BMP2 毛囊 表达 原位杂交 基因芯片
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