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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾玉艳 陈宏 邓继先
BAC(bacterialartificialchromosome,细菌人工染色体)是一种新发展起来的构建高等生物基因组文库的重要方法。由于关中奶山羊产奶性能好,成为制备乳腺生物反应器的理想动物之一,故对关中奶山羊BAC文库的构建条件进行了研究。用BamH 部分酶切关中奶山羊的基因组,用CHEF(箝位匀强电场)凝胶电泳分离大片段DNA,以电透析法回收DNA后,与酶切脱磷的pBeloBAC11载体连接,然后电激转化感受态细胞DH10β,得到了数千个阳性克隆,插入片段平均为30～40kb。在此过程中摸索了BAC载体制备、高分子量DNA制备、酶切、连接和电激转化等一系列环节对高效转化产生大片段DN...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李明昭 刘超 孙军伟 朱海鲸 曹晖 吕晓 仇普斌 华进联
【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨晓宇 吴东栋 杨华 陈锦屏 张富新
对不同泌乳期莎能奶山羊初乳的一般理化性质和热稳定性进行了研究。结果表明,莎能奶山羊初乳的密度、酸度、折光度均高于常乳,而pH值低于常乳,随泌乳期的延长,初乳的各指标逐步接近常乳;分娩后48 h内莎能奶山羊初乳煮沸凝固,48 h后莎能奶山羊初乳煮沸不凝固;泌乳期越短的莎能奶山羊初乳的热稳定性越差。
关键词：
莎能奶山羊 初乳 理化性质 热稳定性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李会玲 李德娴 杨帆 逄国梁 张永涛 王广 余梦琦 袁雨欣 陈璐 李广
[目的]探究苜蓿干草与燕麦干草的组合效应对关中奶山羊采食量、瘤胃发酵参数、产奶量、乳品质的影响,为合理利用苜蓿干草和燕麦干草资源提高关中奶山羊的生产性能提供支持。[方法]选取体况相近的泌乳中期关中奶山羊240只,随机分为对照组及T1、T2和T3组,每组3个重复,每个重复20只羊。对照组饲喂50%配方精料+50%苜蓿干草,T1组饲喂50%配方精料+25%苜蓿干草+25%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=1:1),T2组饲喂50%配方精料+30%苜蓿干草+20%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=3:2),T3组饲喂50%配方精料+37.5%苜蓿干草+12.5%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=3:1),进行75 d的饲喂试验。期间进行采食量、产奶量、瘤胃发酵参数(pH,NH_3-N、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、总挥发性脂肪酸含量及乙酸/丙酸)、乳成分(乳蛋白、乳脂肪、乳糖、全乳固体含量及脂蛋比)数据的采集及测定。[结果]与对照组相比,T3组奶山羊的日干物质采食量和产奶量显著提高(P<0.05)。4个处理组奶山羊瘤胃液的pH差异不显著,T1和T3组奶山羊瘤胃液的NH_3-N显著高于对照组和T2组(P<0.05);T3组的乳脂肪、全乳固体含量和脂蛋比显著高于其他3组(P<0.05)。T3组和对照组乳蛋白含量显著高于T1和T2组(P0.05)。[结论]苜蓿干草与燕麦干草以质量比3:1比例组合,可以提高关中奶山羊的消化性能和生产性能,改善奶山羊乳品质。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王广 李德娴 张永涛 邹家浩 李雪清 余梦琦 陈璐 袁宇欣 李广
【目的】对体成熟和老龄关中奶山羊睾丸进行代谢组学分析,探究关中奶山羊睾丸衰老代谢规律,为睾丸衰老症提供代谢标志物。【方法】根据关中奶山羊年龄、体质量和精液质量,选择体成熟(24月龄,C组)和老龄(60月龄,T组)关中奶山羊公羊各6只,采集双侧睾丸组织样本,使用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法对睾丸组织代谢物进行检测分析,利用多维和单维相结合的统计方法对2组不同代谢物进行检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物筛选关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢中的潜在关键通路。【结果】LC-MS/MS检测到2组关中奶山羊睾丸中有129种差异代谢物,与T组相比,C组有74种代谢物显著上调,55种显著下调;对前35个差异代谢物进行比较鉴定发现, 21个显著上调,14个显著下调。通过对不同代谢产物的富集和分析,获得了9条潜在的关键代谢途径,即铁死亡、ABC转运蛋白、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、氨基酸糖和核苷酸糖代谢、胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、嘌呤代谢及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】筛选出了与关中奶山羊睾丸发育和衰老相关的129种差异代谢物,鉴定了前35种差异代谢物,获得了9条潜在的关键代谢通路。
关键词：
代谢组学 睾丸 衰老代谢 关中奶山羊
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘家栋 王革娇 罗美中
为进一步阐明阿维菌素的生物合成路径和调控途径，提高阿维菌素的产量，采用ＢａｍＨⅠ限制性内切酶酶解阿维链霉菌基因组ＤＮａ的方法，构建了阿维链霉菌的细菌人工染色体（ＢａＣ）文库。该文库共包含２ ３０４个克隆，平均插入片段为１０１ｋＢ，空载率约９％，覆盖了该菌基因组的２５．９倍。该文库的成功构建可以为其他微生物尤其是基因组具有磷硫酰化修饰的微生物的文库构建提供参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘腾飞 潘东明 姜翠翠 陈桂信 郭志雄
【目的】构建琯溪蜜柚BAC文库,利用该文库筛选与汁胞粒化相关的基因。【方法】用温和的物理方法获得高分子量DNA,部分酶切后进行回收、连接、转化,超低温保存阳性克隆。构建DNA样品混合样,PCR法筛选文库,生物信息学分析DNA序列。【结果】改进了适合琯溪蜜柚BAC文库构建的方法;构建的琯溪蜜柚BAC文库含有26112个单克隆,空载率小于1%,叶绿体DNA的污染率不超过1%,插入片段平均大小大约120kb,覆盖8倍的琯溪蜜柚基因组。利用与琯溪蜜柚汁胞粒化相关的EST序列设计PCR引物筛选文库,得到一段大小为1088 bp的DNA序列,该序列含有两段大小分别为122bp和172bp的内含子,经同源比...
关键词：
琯溪蜜柚 BAC文库 粒化 文库筛选
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨晓宇 陈锦屏 张富新 丁辉煌 杨华
对不同泌乳期的莎能奶山羊初乳的化学组成成分进行了分析。结果表明:莎能奶山羊初乳中总干物质、灰分、蛋白质、脂肪含量均随泌乳期延长呈下降趋势。分娩后第一次(3h)所挤初乳中各指标含量最高,其中总干物质含量为21.32%,灰分含量为1.57%,蛋白质含量为10.24%,脂肪含量为6.61%(12 h),之后下降趋势都趋于平缓。分娩后第一次(3h)所挤初乳中乳糖含量最低,为1.93%,之后随泌乳期延长乳糖含量呈上升趋势。
关键词：
莎能奶山 羊初乳 不同泌乳期 化学组成
[期刊] 农业技术经济
[作者]
周衍平 陈会英
“崂山奶山羊选育及利用技术研究”具有较高的增产增收效果和很强的推广价值。１９９０年崂山区饲养崂山奶山羊新增效益７２．２１万元，为整个科研经费的１．４７倍；对影响崂山奶山羊饲养效益的主要因素进行了定量分析；提出进一步提高饲养效益的措施与建议＝２０．６２，个体纯收入Ｆ＝除个体产羔数差异不显著外，其余指标均达到显著或极显著水平，表明该课题研究增产增收具有明显的经济效益。据此可以估算１９９０年饲养崂山奶山羊的增产增收情况。据《１９９０年青岛市崂山区统计年鉴》资料，１９９０年全区崂山奶山羊存栏量为ｌ１３３５只，按泌乳母羊６５％计，当年泌乳羊只数约为７３６８只，据此可以推算当年新增鲜羊奶为７４３．２１吨，...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵光耀 孔秀英 贾继增
【目的】构建小麦D基因组供体粗山羊草根和叶的全长cDNA文库,探讨利用生物信息学方法分析发掘组织特异性表达基因的可行性。【方法】本研究利用Cap-trapper方法构建全长cDNA文库,利用高通量测序技术获得大批高质量EST序列,在基于Linux系统的本地化生物信息学分析平台上对上述EST进行了电子注释分析。【结果】成功构建了粗山羊草根和叶的全长cDNA文库,测序获得根EST序列6973条和叶EST6616条。利用本地化数据分析平台对其进行功能注释。利用GO-Diff软件,发现了两个文库间表达基因的功能差异,找到组织间表达差异显著的基因和组织内特异性表达的基因。【结论】利用构建的全长cDNA测...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
席海燕 周欢敏 郑琰
【目的】构建绒山羊生长期次级毛囊的消减文库,寻找绒毛生长的相关候选基因。【方法】以生长期次级毛囊cDNA为tester,休止期次级毛囊cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术构建生长期次级毛囊消减文库并进行生物信息学分析。【结果】构建了具有高消减效率的cDNA文库。随机挑取20个阳性克隆进行PCR扩增,插入片段长度主要分布在250～1000bp之间。挑取750个克隆进行测序,得到342条有效序列,平均长度596bp。进行同源性分析,有298个与nucleotide数据库山羊及其它物种的已知序列同源。在EST数据库中找到38个相似EST序列和6个无同源性序列。对298个已知功能基因的EST...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
罗松予 罗美中 刘忠松
为促进黄籽油菜的基因组研究和利用,构建了芥菜型油菜黄籽品种四川黄籽的高质量BAC文库。该文库由82 944个单克隆组成,被保存在216块384孔板中。质粒酶切检测结果表明,文库的平均插入片段大小约为140kb,空载率约为2.5%,按照芥菜型油菜基因组1 000 Mb计算,文库覆盖度约为油菜基因组的11.6倍。BAC末端序列比对分析结果显示,克隆被均匀比对到芥菜型油菜的18条染色体上,并且无任何叶绿体、线粒体和细菌基因组DNA污染。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭刚刚 董国清 周进 达瓦顿珠 袁兴淼 张京
【目的】从大麦BAC文库中快速筛选包含目的基因HvGW2的阳性BAC克隆。【方法】构建BAC文库三维混合池,设计2对HvGW2特异性引物,进行BAC文库筛选,对含有目的基因HvGW2的阳性BAC克隆进行测序,获得编码大麦GW2蛋白的基因组DNA序列,并与禾本科中的GW2进行同源进化分析。【结果】构建了大麦BAC文库的三维混合池160个,文库空载率为0.18%;筛选到含HvGW2的阳性BAC克隆3个,其中,BAC克隆196M02包含完整编码该基因的序列;HvGW2包含8个外显子和7个内含子,具有与其它植物GW2相似的结构特征和保守的功能结构域;同源进化分析结果显示,大麦与小麦的GW2蛋白同源性最...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
纪志宾 王桂芝 王金凤 陈珊珊 王勇 赵金山 程明 王建民
【目的】通过微卫星DNA标记技术对已知系谱记录的试验群体构建分子系谱,验证崂山奶山羊与原有系谱记录的一致性,探讨影响亲权鉴定的因素,摸清家系的遗传特征,为群体的保种和遗传管理提供科学依据。【方法】从25个微卫星DNA标记中筛选出12个高多态性的遗传标记,对已知系谱记录的212只崂山奶山羊,利用Cervus vs 2.0软件进行亲权分析,利用Pedigraph vs 2.2软件构建试验群体的分子系谱,利用Molkin vs 3.0、MEGA4和GeneClass2软件对所构建家系的遗传特征及系统发育关系进行分析。用SPSS vs 16软件对每个位点的排除概率(EP)与多态信息含量(PIC)、期望...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
么敬静 赵有文 邹霞 崔翠 何进 喻子牛
从采集到的污水样品中分离得到1株高效降解2-甲基异茨醇(2-methylisoborneol,2-MIB)的菌株Z5,通过16S rDNA序列分析,鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)。该菌在以2-MIB为唯一碳源的培养基中能正常生长代谢。经气相色谱-质谱分析,发现该菌对2-MIB的降解率高达89.7%。同时,测定了Z5在不同质量浓度2-MIB中的生长情况,结果表明:当2-MIB质量浓度为16μg/L时,其生长状况与在LB中最为接近。为了克隆降解2-MIB关键酶的编码基因并进一步研究其降解途径,本研究构建了E.cloacaeZ5的全基因组BAC文库,该文库覆盖了大约8倍的...
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