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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王广  李德娴  张永涛  邹家浩  李雪清  余梦琦  陈璐  袁宇欣  李广  
【目的】对体成熟和老龄关中奶山羊睾丸进行代谢组学分析,探究关中奶山羊睾丸衰老代谢规律,为睾丸衰老症提供代谢标志物。【方法】根据关中奶山羊年龄、体质量和精液质量,选择体成熟(24月龄,C组)和老龄(60月龄,T组)关中奶山羊公羊各6只,采集双侧睾丸组织样本,使用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法对睾丸组织代谢物进行检测分析,利用多维和单维相结合的统计方法对2组不同代谢物进行检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物筛选关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢中的潜在关键通路。【结果】LC-MS/MS检测到2组关中奶山羊睾丸中有129种差异代谢物,与T组相比,C组有74种代谢物显著上调,55种显著下调;对前35个差异代谢物进行比较鉴定发现, 21个显著上调,14个显著下调。通过对不同代谢产物的富集和分析,获得了9条潜在的关键代谢途径,即铁死亡、ABC转运蛋白、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、氨基酸糖和核苷酸糖代谢、胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、嘌呤代谢及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】筛选出了与关中奶山羊睾丸发育和衰老相关的129种差异代谢物,鉴定了前35种差异代谢物,获得了9条潜在的关键代谢通路。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 石恒波  罗军  王维  许会芬  朱江江  李君  
【目的】分析奶山羊间性个体的遗传背景,探讨间性个体发生的遗传机制,为山羊性别调控以及性别决定的研究提供参考。【方法】通过核型分析、特异性性别调控基因(Sex-determining region of Y chromosome,SRY)的PCR扩增以及AFLP(Amplified fragment length polymorphism)指纹图谱分析等方法,研究西农萨能羊间性个体的遗传本质。【结果】间性山羊与正常母山羊的核型一致,为58+XX;间性个体基因组中未能扩增出SRY基因;AFLP指纹图谱分析发现,有9对引物扩增出清晰的条带,共1 833条,片段长度为70~500bp,9对引物的扩增结...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 夏荣欣  李悦  刘婷婷  孙宣  钟黄欣  郭文晴  曾诚  张国敏  
[目的]本实验旨在探究神经介素B(neuromedin B, NMB)及其受体[神经介素B受体(neuromedin B receptor, NMBR)、胃泌素释放肽受体(gastrin releasing peptide receptor, GRPR)和蛙皮素受体(bombesin receptor subtype 3, BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达,为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节的机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3和9月龄,各6只)进行阉割并采集睾丸组织,在NMB及其受体基因克隆与序列分析的基础上,采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位,利用RT-qPCR和western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近,NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上,结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于七次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达,其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比,9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增高(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节,丰富了家畜生殖生理学的研究。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 曾诚  夏荣欣  李悦  刘婷婷  孙宣  钟黄欣  郭文晴  张国敏  
[目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达,为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3月龄和9月龄,各6只)进行阉割并采集睾丸组织,在克隆NMB及其受体基因与分析序列的基础上,采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位,利用RT-qPCR和Western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近,NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上,结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于7次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达,其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比,9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李亚东  曹翠兰  丁虹茹  苗芳  
[目的]从转录水平揭示小麦叶片顺序和非顺序衰老的形成机制及其在小麦生产中的应用价值。[方法]以顺序衰老小麦(NR9405)和非顺序衰老小麦(温麦19)为材料,应用数字基因表达谱技术对两种衰老类型小麦旗叶在扬花后25 d、30 d和32 d的基因表达量进行检测,筛选花后25 d和30 d,30 d和32 d旗叶的差异表达基因,并对差异表达基因进行GO富集分析。[结果]顺序衰老小麦NR9405花后25 d与30 d相比,差异表达基因共计6 659个,其中上调表达基因3 404个,下调表达基因3 255个;花后30 d与32 d相比,差异表达基因共计4 058个,其中上调表达基因3 017个,下调表达基因1 041个。非顺序衰老小麦温麦19花后25 d与30 d相比,差异表达基因共计13 609个,其中上调表达基因7 454个,下调表达基因6 155个;花后30 d与32 d相比,差异表达基因共计6 321个,其中上调表达基因2 669个,下调表达基因3 652个。上调基因显著富集的主要GO条目有:环境胁迫响应、脂肪酸α-氧化、细胞死亡、DNA分解代谢、自噬、水解酶、转移酶、转运、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶等。下调基因显著富集的GO条目有:光合作用、光的捕获、光合电子传递链、叶绿素生物合成过程、叶绿体机体等。在小麦叶片非顺序衰老过程中,自噬、海藻糖生物合成过程、海藻糖磷酸酶、蔗糖合成酶等相关基因极显著上调表达,有利于保持叶片水分,促进叶片碳氮的转运,提高小麦产量。[结论]小麦叶片的非顺序衰老与自噬、水解酶和丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶基因的极显著上调表达密切相关。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 贾玉艳  陈宏  邓继先  
 BAC(bacterialartificialchromosome,细菌人工染色体)是一种新发展起来的构建高等生物基因组文库的重要方法。由于关中奶山羊产奶性能好,成为制备乳腺生物反应器的理想动物之一,故对关中奶山羊BAC文库的构建条件进行了研究。用BamH 部分酶切关中奶山羊的基因组,用CHEF(箝位匀强电场)凝胶电泳分离大片段DNA,以电透析法回收DNA后,与酶切脱磷的pBeloBAC11载体连接,然后电激转化感受态细胞DH10β,得到了数千个阳性克隆,插入片段平均为30~40kb。在此过程中摸索了BAC载体制备、高分子量DNA制备、酶切、连接和电激转化等一系列环节对高效转化产生大片段DN...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 纪志宾  王桂芝  王金凤  陈珊珊  王勇  赵金山  程明  王建民  
【目的】通过微卫星DNA标记技术对已知系谱记录的试验群体构建分子系谱,验证崂山奶山羊与原有系谱记录的一致性,探讨影响亲权鉴定的因素,摸清家系的遗传特征,为群体的保种和遗传管理提供科学依据。【方法】从25个微卫星DNA标记中筛选出12个高多态性的遗传标记,对已知系谱记录的212只崂山奶山羊,利用Cervus vs 2.0软件进行亲权分析,利用Pedigraph vs 2.2软件构建试验群体的分子系谱,利用Molkin vs 3.0、MEGA4和GeneClass2软件对所构建家系的遗传特征及系统发育关系进行分析。用SPSS vs 16软件对每个位点的排除概率(EP)与多态信息含量(PIC)、期望...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 夏雨婷  万永杰  姜志洋  陈琪  茆达干  
[目的]本研究旨在探究夏季日粮添加酵母硒对湖羊血液指标和睾丸发育的影响,解析酵母硒影响睾丸功能的潜在分子机制。[方法]将96只4月龄雄性湖羊按体重相近原则分为对照组(Con,基础日粮)和酵母硒组(Se,基础日粮+酵母硒0.4 g·kg~(-1))。预试期1周,正试期4周,记录体重变化;收集血液检测生化、抗氧化与免疫相关指标;采集睾丸组织,测量质量和大小及其硒浓度,HE染色观察组织学形态(HE),转录组测序(RNA-seq)分析差异基因。[结果]Se组平均日增重显著高于Con组(P0.05),但Se组睾丸中硒浓度极显著高于Con组(P<0.01)。与Con组相比,Se组血清游离脂肪酸(NEFA)浓度显著升高(P<0.05),血浆IgA、IgG和IgM浓度极显著升高(P<0.01),血清和睾丸组织中GSH-Px活性均极显著升高(P<0.01)。HE结果显示生精小管中有精子出现,Se组生精细胞排列更紧密且生精上皮厚度极显著增加(P
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 安世钰  张国敏  尤佩华  孟繁星  刘建玲  张婷婷  杨花  樊懿萱  王锋  
[目的]本试验旨在探究PPARGC1A/NRF1/TFAM通路核心基因在湖羊性成熟前后的表达变化。[方法]选取体况良好和系谱清楚的雄性湖羊18只(3和9月龄,各9只),颈静脉采血后进行阉割处理。ELISA检测血样中睾酮(T)、瘦素、胰岛素及胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的浓度;免疫组化法检测睾丸组织中PPARGC1A/NRF1/TFAM通路相关蛋白的表达定位; RT-qPCR和Western blot检测睾丸组织中PPARGC1A/NRF1/TFAM通路相关基因与蛋白的表达变化。[结果]与3月龄湖羊相比,9月龄湖羊外周血中T、瘦素、胰岛素及IGF-Ⅰ的浓度显著升高(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李会玲  李德娴  杨帆  逄国梁  张永涛  王广  余梦琦  袁雨欣  陈璐  李广  
[目的]探究苜蓿干草与燕麦干草的组合效应对关中奶山羊采食量、瘤胃发酵参数、产奶量、乳品质的影响,为合理利用苜蓿干草和燕麦干草资源提高关中奶山羊的生产性能提供支持。[方法]选取体况相近的泌乳中期关中奶山羊240只,随机分为对照组及T1、T2和T3组,每组3个重复,每个重复20只羊。对照组饲喂50%配方精料+50%苜蓿干草,T1组饲喂50%配方精料+25%苜蓿干草+25%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=1:1),T2组饲喂50%配方精料+30%苜蓿干草+20%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=3:2),T3组饲喂50%配方精料+37.5%苜蓿干草+12.5%燕麦干草(m(苜蓿):m(燕麦)=3:1),进行75 d的饲喂试验。期间进行采食量、产奶量、瘤胃发酵参数(pH,NH_3-N、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、总挥发性脂肪酸含量及乙酸/丙酸)、乳成分(乳蛋白、乳脂肪、乳糖、全乳固体含量及脂蛋比)数据的采集及测定。[结果]与对照组相比,T3组奶山羊的日干物质采食量和产奶量显著提高(P<0.05)。4个处理组奶山羊瘤胃液的pH差异不显著,T1和T3组奶山羊瘤胃液的NH_3-N显著高于对照组和T2组(P<0.05);T3组的乳脂肪、全乳固体含量和脂蛋比显著高于其他3组(P<0.05)。T3组和对照组乳蛋白含量显著高于T1和T2组(P0.05)。[结论]苜蓿干草与燕麦干草以质量比3:1比例组合,可以提高关中奶山羊的消化性能和生产性能,改善奶山羊乳品质。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 邢晋祎  张宁波  
为了解析鸡胚发育过程中NANOG、POUV和TWIST2基因的调控作用,利用荧光定量RT-PCR方法,研究NANOG、POUV和TWIST2基因在孵化1~6d(E1~E6)的整体胚胎和孵化15和18d(E15、E18)鸡胚的大脑、心脏、肝脏和左侧大腿肌肉组织中的表达谱。结果表明,1)NANOG基因的表达水平在E2~E6整胚和E15、E18胚期的大脑、心脏、肝脏和腿肌中的表达水平均极显著低于E1时期(P<0.01)。2)在鸡胚发育的整胚E1~E6和E15、E18时期的大脑、肝脏、心脏和腿肌中,POUV基因的表达水平基本呈现逐渐降低趋势,且从E3时期后均显著低于E1时期(P<0.05或P<0.01...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 李发弟  夏东  陈杰  赵茹茜  
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 苏少锋  赵一萍  李蓓  白东义  宋海燕  赵若阳  芒来  
为进一步揭示蒙古马发育与生殖调控的分子机制提供试验数据和理论依据,研究不同发育年龄蒙古马睾丸组织中生长激素(Growth hormone,GH)、生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)、胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like growth factorsⅠ,IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(Insulin-like growth factorⅠreceptor,IGF-ⅠR)表达的发育性变化模式,以性成熟前期(5匹)、性成熟期(5匹)、成年期(5匹)的蒙古公马为研究对象,采集其睾丸组织,利用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)对不同发育年龄蒙古马睾丸组织中的GH、GHR、IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因的表达差异进行分析,采用免疫组织化学方法对性成熟前期和性成熟期蒙古马睾丸组织中的GH和IGF-Ⅰ蛋白质进行定位。RT-qPCR试验结果表明蒙古马睾丸组织中上述4个基因的表达量从性成熟前期到性成熟期显著增加,成年期下降。免疫组织化学结果表明GH和IGF-Ⅰ免疫标记定位于精母细胞、精原细胞、精子细胞和睾丸间质细胞,其在相关细胞中的信号从性成熟前期到性成熟期逐渐增强。研究发现睾丸组织中GH、GHR、IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR的mRNA协同表达对蒙古马睾丸发育和性成熟有重要调节作用,GH和IGF-Ⅰ蛋白可能通过自分泌/旁分泌的方式调节蒙古马的精子形成和睾丸间质细胞的功能。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 徐永平  张涌  郑月茂  卿素珠  赵慧英  蒲鹏  
 对山羊胚胎小脑皮质形成及其神经元发育的形态学变化进行了研究。结果表明:(1)山羊胚胎小脑形成于第6周末,小脑皮质的外颗粒层、分子层首先形成。(2)发育过程中,山羊胚胎小脑的外颗粒层呈现出非常复杂的变化趋势:第7~10周外颗粒层达到一定厚度,第11~12周开始变薄,此后外颗粒层又开始变厚,直到第15~16周又变薄,17~18周再次增厚,此后再次变薄,直到出生前1周外颗粒层已经较薄,仅有4~5层细胞。(3)山羊胚胎的蒲肯野氏细胞可能在第8周以前就已聚集定位,第14周以后,蒲肯野氏细胞内部结构逐渐发育成熟,这说明蒲肯野氏细胞虽然发生较早,但其开始发育的时间较晚。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张川  王亚晨  崔守尧  杨泽恩  吴震  蒋芳玲  
[目的]通过研究耐裂果与易裂果番茄果实成熟过程中不同部位组织的衰老状况,揭示番茄果实组织衰老与裂果的关系,为裂果的防控提供理论依据。[方法]采用耐裂果番茄材料LA1698与易裂果番茄材料LA2683,测定其果实不同时期(绿熟期、转色期和红熟期)和不同部位(上部、中部和下部)的活性氧含量、膜脂过氧化程度、抗氧化酶活性、抗氧化物质As A及可溶性蛋白含量。[结果]与果实中部和下部相比,番茄上部具有更高的活性氧含量和膜脂过氧化程度;在果实成熟后期,相同部位相比,易裂果番茄的活性氧含量和膜脂过氧化程度高于耐裂果番茄。易裂果番茄红熟期果实相同部位抗氧化酶sOD、GR和APX活性及抗氧化物质As A含量显...
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