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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
肖正国 张常印 李超美 朱柄桂 孙智锋
用两株抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体(McAb)混合包板,再以其中一株进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测 RHDV 的单抗夹心 ELISA 法。用本法和血凝(HA)试验检测51只实验感染致死兔的背肌、腿肌、淋巴结、脊髓和骨髓等5种组织中的 RHDV。结果以骨髓中 RHDV 含量最高,且较稳定,OD 值集中在1.2～1.6范围内;淋巴结次之,但 OD 值分散;肌肉和脊髓的 OD 值和检出率均较低。ELISA 的检出率显著高于HA,二者符合率很低,尤其是脊髓和淋巴结。有些样品的 OD 值很高,而 HA 却为阴性。骨髓是胴体检测 RHDV的最佳材料。经测定,本法的工作浓度为1∶20...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周智君 陈军 俞远京 肖献忠
根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR的假阳性结果.用该方法对12份RHD样本进行检测,检出率为100%.
关键词：
兔出血症病毒 套式PCR VP60基因
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙智锋 杜念兴 徐为燕
将抗兔出血症病毒(RHDV)的 AA8-1和 CG4-1两株单抗(McAb)分别致敏双醛化人红细胞,混合后建立单抗反向间接血凝(McAb-RPHA)方法。其敏感性较常规血凝试验(HA)高256倍,最小检出量为0.214 ng/ml。此法对感染兔的心、肝、脾、肺、骨髓、血液等检出率均为100%;脊髓、淋巴结、肌肉等组织的检出率分别为62.5%,58.3%和37.5%。HA 的检出率除肝为100%外,其余均低于 McAb—RPHA,不能检出脊髓、淋巴结和肌肉样品中的病毒抗原。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄吉风 徐福南
用兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）分别感染５，１５和２５日龄家兔，接种后７２ｈ扑杀，对其肝、脾、肺、肾、胸腺、骨髓等作组织病理学和超微结构观察。发现幼兔感染ＲＨＤＶ与成年兔病毒性出血症不同，其主要病变是血管内皮细胞、网状细胞的增生和肝、肾等脏器实质细胞的变性。ＲＨＤＶ对一月龄以内幼兔亦具有感染性，并对其肝、肾等造成一定程度的病理损伤。病理损伤程度随年龄的增长而加重
关键词：
幼兔 兔出血症病毒 病理学
[期刊] 西南农业学报
[作者]
韩建保 王开功 周碧君 文明 王凡 陈丽雯 史开志 刘旭
采用兔出血症病毒贵州分离株人工感染家兔,观察其临床表现、病理形态学及病理组织学变化。结果,临床表现:体温升高、被毛蓬乱、抽搐、呼吸困难等症状;肝,心、脾、肾等实质性器官出血或淤血,其中肝和肾有部分坏死;组织病理变化表现:肝、肾等实质性器官充满红细胞、大量中性粒细胞和淋巴细胞。贵州毒株具有高致病潜力。
关键词：
兔出血症病毒 人工感染 病理学,家兔
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐福南 陈万芳 张书霞 郑保纹 郝延刚
对出血症病兔的骨髓及血小板用光镜、透射和扫描电镜及免疫组织化学方法进行了研究。结果表明,本病的主要病变为骨髓巨核细胞发生退行性变化。电镜下,巨核细胞的胞浆界膜管道系统内出现病毒颗粒,血小板异常并出现巨血小极,血小板呈球拍状,花瓣状或蜂窝状膜复合体结构。扫描电镜下,血小板呈镰刀形,有时几乎呈环形。免疫组织化学染色,在骨髓巨核细胞浆内观察到黑色的胶体金颗粒。作者认为,兔出血症的出血机理主要是与骨髓巨核细胞受损伤有关,导致血小板生成障碍而数目减少,从而引起全身各组织器官的出血。
关键词：
兔 出血症 出血机理
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张英 吉传义 龚晓明 杜念兴
ＰＣＲ技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸作者在先行构建兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）中国分离ＮＪ株ｃＤＮＡ克隆的研究基础上，采用酶切鉴定和地高辛标记ＮＪ株病毒核酸探针杂交鉴定，从已获得的ｃＤＮＡ克隆中筛选一克隆ＰＧＤ－１２．把其中插入片段亚克隆Ｍ１３噬...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐为燕
兔病毒性出血症是中国首先报道的一种毁灭性传染病。此病在各种病名下遍及欧洲大部分地区，但均无病原特征的描述。兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）是一种新发现的病毒，直径３２～３４ｎｍ，二十面体对称，无囊膜，存在于感染细胞的核和胞浆内。它对酸（ｐＨ３）、热（６０℃）、乙醚（２０％）和ＭｇＣｌ２（１ｍｏｌ／Ｌ）有坚强的抵抗力。在ＣｓＣｌ中的浮密度为１．３６～１．３８ｇ／ｃｍ２；在蔗糖梯度中的沉降系数为１６２Ｓ。它能凝集人红细胞，滴度可达１０×２１８以上。在细胞培养中很难适应。核酸为线状单股ＤＮＡ，末端有发夹结构。用体外合成的双股ＤＮＡ，取其酶切片段插入ＢＳ质粒后，转化ＤＨ大肠杆菌。从重组质粒提取的２个片段（ｐＹ...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李传山 任力刚 李维英 杨增岐 郭蔼光
为了在原核系统中高效表达兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60,应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL中克隆出了衣壳蛋白VP60基因并测序,结果显示,YL株VP60基因全长1740 bp,GC含量为55.3%,已在GenBank中注册(登录号为DQ530363),VP60基因与中国RHDV最早期分离株WX84的VP60基因核苷酸序列同源性为93.0%,氨基酸序列同源性为95.8%。构建成功YL株VP60基因原核表达载体VP60-pET32a,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。1 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,VP60融合蛋白分子...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王玢瑸 哲名家 刘光清 张淼涛
【目的】构建重组兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)VPg(Viral Protein Ge-nome-Linked,VPg)蛋白基因的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化VPg蛋白,制备多克隆抗体,并检测抗体的基本特性。【方法】用PCR方法扩增RHDVVPg基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,使之重组表达VPg蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。PCR扩增获得了345bp的VPg基因,用纯化的重组VPg蛋白免疫试验兔,制备抗VPg的多克隆抗体,用Wes...
关键词：
VPg 原核表达 多克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙智锋 杜念兴 徐为燕
通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定簇，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。单抗的识别表位与其生物学活性密切相关
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵立红 范立中 徐福南
对兔出血症的凝血象和组织病理学变化进行了动态研究。结果表明：兔出血症伴有弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）病理过程，并呈动态发展规律。凝血象检测发现：感染后６ｈ凝血酶原时间（ＰＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）缩短或正常，为高凝期，该期短，很快进入低凝期。感染后１８ｈＰＴ、ＫＰＴＴ显著延长，死前更明显。血小板数（ＰＣ）呈渐进性降低，纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）在感染后６ｈ显著增加（Ｐ＜０．０１），感染后１８ｈ达高峰值。组织病理学观察表明：肺的病变严重而且有规律，感染后１２ｈ肺的微血栓检出率最高，同时在心、肝、肾、脑等器官也见微血栓。感染后２４ｈ或死兔的肺出血严重，血栓少见，表现为纤溶亢进的特...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张舍郁 程安春 汪铭书 沈婵娟 李传峰
【目的】建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDVIgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张大鹏 吕宁 符容婕 郭蔼光
【目的】构建兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】以保存的VP60基因的质粒(pTeasy-VP60)为模版,用PCR方法获得VP60基因,并将其克隆到pET28a(+)载体上,构建重组表达载体pET28a(+)-VP60,酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,优化诱导表达时间和IPTG浓度;利用镍离子螯合层析纯化重组蛋白,并制备了高效价的抗VP60多克隆抗体。【结果】成功构建了兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达质粒pET28a(+)-VP60,其在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,重组蛋白分子质量为60ku,制备的...
[期刊] 水产学报
[作者]
邵健忠 项黎新 李亚南 毛树坚
报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。
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